የሕዋስ ቀጥታ RT qPCR ኪት—SYBR GREEN I ዳይሬክት የሕዋስ ሊሲስ ሕዋስ ዝግጁ ባለ አንድ ደረጃ qRT-PCR ኪት
መግለጫዎች
ይህ ኪት አር ኤን ኤን ከሰለጠኑ የሕዋስ ናሙናዎች ለ RT-qPCR ምላሾች በፍጥነት የሚለቀቅ ልዩ የሊሲስ ቋት ሲስተም ይጠቀማል፣ በዚህም ጊዜ የሚፈጅ እና አድካሚ የሆነውን የአር ኤን ኤ የመንጻት ሂደትን ያስወግዳል።የ RNA አብነት በ 7 ደቂቃዎች ውስጥ ብቻ ሊገኝ ይችላል.5×ቀጥታ RT ድብልቅ እና 2×በመሳሪያው የሚቀርቡ ቀጥታ የqPCR ቅልቅል-SYBR ሪጀንቶች ፈጣን እና ውጤታማ በሆነ መልኩ የእውነተኛ ጊዜ የ PCR ውጤቶችን ማግኘት ይችላሉ።
5×ቀጥታ RT ድብልቅ እና 2×Direct qPCR Mix-SYBR ጠንካራ አጋቾቹ መቻቻል አላቸው፣ እና የናሙናዎቹ lysate በቀጥታ ለ RT-qPCR አብነት ሆኖ ሊያገለግል ይችላል።ይህ ኪት ልዩ የሆነውን አር ኤን ኤ ከፍተኛ-ግንኙነት Foregene በግልባጭ ትራንስክሪፕትሴዝ፣ እና Hot D-Taq DNA polymerase፣ dNTPs፣ MgCl ይዟል።2፣ ምላሽ ቋት ፣ PCR አመቻች እና ማረጋጊያ።
ዝርዝሮች
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit ክፍሎች
| ክፍል I | ቋት CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| ቋት ST | |
| ክፍል II | ዲ ኤን ኤ መጥረጊያ |
| 5× ቀጥተኛ RT ድብልቅ | |
| 2× ቀጥተኛ qPCR ቅልቅል-SYBR | |
| 50× ROX ማጣቀሻ ማቅለሚያ | |
| RNase-ነጻ ddH2O | |
| መመሪያዎች | |
ባህሪዎች እና ጥቅሞች
■ቀላል እና ውጤታማ፡ በሴል ቀጥታ RT ቴክኖሎጂ፣ የአር ኤን ኤ ናሙናዎች በ7 ደቂቃ ውስጥ ብቻ ሊገኙ ይችላሉ።
∎ የናሙና ፍላጎቱ ትንሽ ነው፣ እስከ 10 ህዋሶች መሞከር ስለሚቻል።
■ ከፍተኛ መጠን: በ 384, 96, 24, 12, 6-well plates ውስጥ በሰለጠኑ ሴሎች ውስጥ አር ኤን ኤ በፍጥነት መለየት ይችላል.
■ የዲኤንኤ ኢሬዘር የተለቀቁትን ጂኖም በፍጥነት ያስወግዳል፣በቀጣይ የሙከራ ውጤቶች ላይ ያለውን ተጽእኖ በእጅጉ ይቀንሳል።
∎ የተመቻቸ RT እና qPCR ስርዓት ባለ ሁለት ደረጃ RT-PCR በግልባጭ ግልባጭ ይበልጥ ቀልጣፋ እና PCR የበለጠ የተለየ እና የ RT-qPCR ምላሽ አጋቾችን የበለጠ የሚቋቋም ያደርገዋል።
Kit መተግበሪያ
የመተግበሪያው ወሰን: የሰለጠኑ ሴሎች.
- አር ኤን ኤ በናሙና ሊሲስ የተለቀቀ፡ ለዚህ ኪት RT-qPCR አብነት ብቻ ነው የሚመለከተው።
- ኪቱ ለሚከተሉት ዓላማዎች ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል፡ የጂን አገላለጽ ትንተና፣ በሲአርአና መካከለኛ የሆነ የጂን ጸጥታ ውጤት ማረጋገጥ፣ የመድኃኒት ማጣሪያ ወዘተ.
ሥዕላዊ መግለጫ
የማከማቻ እና የመደርደሪያ ሕይወት
የዚህ ኪት ክፍል I በ 4 ℃ ውስጥ መቀመጥ አለበት;ክፍል II በ -20 ℃ ውስጥ መቀመጥ አለበት.
Foregene Protease Plus II በ 4 ውስጥ መቀመጥ አለበት℃፣ በ -20 ℃ ላይ አትቀዘቅዙ።
ሬጀንት 2×ቀጥታ qPCR Mix-SYBR በ -20 መቀመጥ አለበት።℃ጨለማ ውስጥ;በተደጋጋሚ ጥቅም ላይ ከዋለ በ 4 ውስጥ ሊከማች ይችላል℃ ለአጭር ጊዜ ማከማቻ (በ10 ቀናት ውስጥ መጠቀም)።
የእውነተኛ ጊዜ PCR ፕሪመር ንድፍ መርሆዎች
ወደፊት ፕሪመር እና የተገላቢጦሽ ፕሪመር
ለሪል ታይም PCR, የፕሪመር ንድፍ በጣም አስፈላጊ ነው.ፕሪመርሮች ከ PCR ማጉላት ልዩነት እና ቅልጥፍና ጋር የተገናኙ ናቸው፣ እና የሚከተሉትን መርሆች በማጣቀስ ሊነደፉ ይችላሉ።
የመነሻ ርዝመት: 18-30bp.
የጂሲ ይዘት፡ 40-60%.
Tm ዋጋ፡- እንደ ፕሪመር 5 ያለ የፕሪመር ዲዛይን ሶፍትዌር የፕሪመርን ቲም ዋጋ ሊሰጥ ይችላል።የላይ እና የታችኛው ተፋሰሶች የቲኤም እሴቶች በተቻለ መጠን ቅርብ መሆን አለባቸው።የቲም ስሌት ቀመርም ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል፡ Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)።PCR ን ሲያከናውን ከ 5 ዲግሪ ሴንቲግሬድ የፕሪመር ቲም እሴት በታች ያለው የሙቀት መጠን በአጠቃላይ እንደ ማደንዘዣ የሙቀት መጠን ይመረጣል (ተዛማጁ የሙቀት መጠን መጨመር የ PCR ምላሽን ልዩነት ሊጨምር ይችላል).
ፕሪመርስ እና PCR ምርቶች፡-
የንድፍ ፕሪመር PCR ማጉላት የምርት ርዝመት ከ100-150ቢፒ ይመረጣል።
በአብነት ሁለተኛ መዋቅራዊ አካባቢ ውስጥ የንድፍ ፕሪመር በተቻለ መጠን መወገድ አለበት.
በ 3′ የላይኛው እና የታችኛው ተፋሰስ ፕሪመር መካከል 2 ወይም ከዚያ በላይ ተጨማሪ መሠረቶች እንዳይፈጠሩ ያስወግዱ።
ፕሪመር 3′ ተርሚናል ቤዝ ከ3 ተጨማሪ ተከታታይ G ወይም C ጋር ሊኖር አይችልም።
ፕራይመሮቹ እራሳቸው ተጨማሪ መዋቅሮች ሊኖራቸው አይችልም, አለበለዚያ የፀጉር አሠራር ይሠራል, የ PCR ማጉላት ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል.
ATCG በተቻለ መጠን በፕሪመር ቅደም ተከተል መሰራጨት አለበት ፣ እና የ 3′ ተርሚናል መሠረት እንደ ቲ መወገድ አለበት።
አባሪ 1፡ የሴል ቀጥታ RT-qPCR ኪት አካል ማሟያ ጥቅል
1.የሴል ሊሲስ መፍትሄ
|
| |||
| Kit ክፍሎች (24-ጉድጓድ ሊሲስ ሲስተም / ጉድጓድ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ቲ | 500 ቲ | ||
| ክፍልአይ | ቋት CL | 20 ሚሊ ሊትር | 100 ሚሊ ሊትር |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ሚሊ × 2 | |
| ቋት ST | 1 ሚሊ × 2 | 10 ሚሊ ሊትር | |
| ክፍልII | ዲ ኤን ኤ መጥረጊያ | 400 μl | 1 ሚሊ × 2 |
2.RT ቅልቅል
|
| |
| Kit ክፍሎች (20 μl ምላሽ ሥርዓት) | DRT-01011-B1 |
| 200 ቲ | |
| 5× ቀጥተኛ RT ድብልቅ | 800 μl |
| RNase-ነጻ ddH2O | 1.7 ሚሊ × 2 |
|
| ||
| Kit ክፍሎች (20 μl ምላሽ ሥርዓት) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ቲ | 1000 ቲ | |
| 2× ቀጥተኛ qPCR ቅልቅል-SYBR | 1 ሚሊ × 2 | 1.7 ሚሊ × 6 |
| 50× ROX ማጣቀሻ ማቅለሚያ | 40 μl | 200 ሚሊ ሊትር |
| RNase-ነጻ ddH2O | 1.7 ሚሊ ሊትር | 10 ሚሊ ሊትር |
መመሪያ መመሪያዎች፡-
