አር ኤን ኤ አልተወጣም ወይም የአር ኤን ኤ ምርት ዝቅተኛ ነው።

ብዙውን ጊዜ የመልሶ ማግኛ ቅልጥፍናን የሚነኩ የተለያዩ ምክንያቶች አሉ, ለምሳሌ: የቲሹ ናሙና አር ኤን ኤ ይዘት, የአሠራር ዘዴ, የኤሌክትሮል መጠን, ወዘተ.

1. የበረዶ መታጠቢያ ወይም ክሪዮጅኒክ (4 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ) ሴንትሪፍግሽን በቀዶ ጥገና ወቅት ተካሂዷል.

ምክር: በጠቅላላው ሂደት በክፍል ሙቀት (15-25 ° ሴ) ውስጥ ይስሩ, በረዶ አይጠቡ እና በዝቅተኛ የሙቀት መጠን ሴንትሪፉል ያድርጉ.

2. ተገቢ ያልሆነ የናሙና ጥበቃ ወይም ከመጠን በላይ የናሙና ማከማቻ ጊዜ።

ምክር፡ ናሙናዎችን በ -80 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ያከማቹ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ያቀዘቅዙ እና ተደጋጋሚ የማቀዝቀዝ አጠቃቀምን ያስወግዱ።ለአር ኤን ኤ ለማውጣት ትኩስ ቲሹ ወይም የሰለጠኑ ሴሎችን ለመጠቀም ይሞክሩ።

3. በቂ ያልሆነ ናሙና lysis.

ምክር፡- ቲሹን (homogenizing tissue) በሚፈጥሩበት ጊዜ ህብረ ህዋሱ በበቂ ሁኔታ ተመሳሳይነት ያለው መሆኑን እና የቲሹ ህዋሶች አር ኤን ኤ መውጣቱን ለማብራራት በበቂ ሁኔታ መከፋፈላቸውን ያረጋግጡ።

4. ኤሊዩቱ በትክክል አልተጨመረም.

ምክር፡ ከRNase-ነጻ ddH መሆኑን ያረጋግጡ₂O ወደ የመንጻት አምድ ሽፋን መሃል ላይ ጠብታ አቅጣጫ ይታከላል።

5. ትክክለኛው የኢታኖል መጠን ወደ Buffer RL2 ወይም Buffer RW2 አልተጨመረም።

ምክር፡ መመሪያዎቹን ይከተሉ፣ ትክክለኛውን የኢታኖል መጠን ወደ Buffer RL2 እና Buffer RW2 ይጨምሩ እና ኪቱን ከመጠቀምዎ በፊት በደንብ ይቀላቅሉ።

6. የቲሹ ናሙና መጠን ተገቢ አይደለም.

ምክር፡ ከ10-20 ሚ.ግ ቲሹ ወይም (1-5) × 10 ይጠቀሙ⁶ህዋሶች በ 500 μl ቋት RL1፣ ከመጠን በላይ የቲሹ አጠቃቀም የአር ኤን ኤ ማውጣትን ስለሚቀንስ።

7. ትክክለኛ ያልሆነ የመለጠጥ መጠን ወይም ያልተሟላ ኤሌሽን.

የውሳኔ ሃሳብ: የመንጻቱ አምድ የመለጠጥ መጠን 50-200 μl;የማብራሪያው ውጤት አጥጋቢ ካልሆነ በቅድሚያ በማሞቅ RNase-Free ddH ከተጨመረ በኋላ የክፍሉን የሙቀት አቀማመጥ ጊዜ ለማራዘም ይመከራል.₂ኦ፣ ለምሳሌ ለ5-10 ደቂቃ።

8.The የመንጻት ዓምድ Buffer RW2 መታጠብ በኋላ ኤታኖል ቅሪት አለው.

የውሳኔ ሃሳብ፡ ከ Buffer RW2 መታጠብ በኋላ የኢታኖል ቅሪት ካለ ባዶ ቱቦ ሴንትሪፍግሽን ለ 1 ደቂቃ ባዶ ቱቦ ሴንትሪፍግሽን የሚፈጀው ጊዜ ወደ 2 ደቂቃ ሊጨምር ይችላል ወይም የንፅህና አምድ በክፍል ሙቀት ውስጥ ለ 5 ደቂቃ ያህል ቀሪውን ኢታኖል በበቂ ሁኔታ ለማስወገድ ያስችላል።

የተጣራ አር ኤን ኤ ተበላሽቷል

የተጣራው አር ኤን ኤ ጥራት እንደ ናሙናውን መጠበቅ፣ የ RNase ብክለት እና መጠቀሚያ ወዘተ ካሉ ነገሮች ጋር የተያያዘ ነው።

1. የቲሹ ናሙናዎች በጊዜ ውስጥ አይቀመጡም.

ምክር: ከተሰበሰበ በኋላ የቲሹ ናሙናዎች ወይም ሴሎች በወቅቱ ጥቅም ላይ ካልዋሉ, ወዲያውኑ በ -80 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ያስቀምጡ.አር ኤን ኤን ለማውጣት በተቻለ መጠን አዲስ የተወሰዱ ቲሹ ወይም የሕዋስ ናሙና ይጠቀሙ።

2. የቲሹ ናሙናዎችን ተደጋጋሚ ማቀዝቀዝ.

ማሳሰቢያ፡ የቲሹ ናሙናዎችን በሚከማችበት ጊዜ ለማቆየት በትናንሽ ቁርጥራጮች መቁረጥ የተሻለ ነው፣ እና በሚጠቀሙበት ጊዜ አንዱን ክፍል በማንሳት ናሙናው በተደጋጋሚ እንዳይቀዘቅዝ እና የአር ኤን ኤ እንዳይበላሽ።

3. RNase በቀዶ ጥገናው ወቅት የሚጣሉ ጓንቶች፣ ጭምብሎች እና የመሳሰሉትን አስተዋውቋል ወይም አይለብስም።

የውሳኔ ሃሳብ፡ የአር ኤን ኤ ማውጣት ሙከራዎች በተሻለ የአር ኤን ኤ መጠቀሚያ ክፍሎች ውስጥ ይከናወናሉ እና ጠረጴዛው ከሙከራው በፊት ይጸዳል።

በሙከራው ወቅት በአርኤንኤስ መግቢያ ምክንያት የሚፈጠረውን የአር ኤን ኤ መበላሸትን ለመቀነስ የሚጣሉ ጓንቶች እና ጭንብል ያድርጉ።

4. ጥቅም ላይ በሚውልበት ጊዜ ሬጀንቶች በ RNase ተበክለዋል.

ምክር፡ ተዛማጅ ሙከራዎችን ለማድረግ በአዲስ የእንስሳት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለያ ኪት ይተኩ።

5. በአር ኤን ኤ መጠቀሚያ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉት የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች፣ ምክሮች፣ ወዘተ በ RNase ተበክለዋል።

ምክር፡ በአርኤንኤ ማውጣት ላይ ጥቅም ላይ የሚውሉት የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች፣ ምክሮች፣ pipettes፣ ወዘተ ሁሉም ከአር ናስ-ነጻ መሆናቸውን ያረጋግጡ።

የተጣራ አር ኤን ኤ የታችኛው ተፋሰስ ሙከራዎች ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል።

አር ኤን ኤ በማንጻት አምድ የጸዳ፣ የጨው ions፣ የፕሮቲን ይዘቱ በጣም ትልቅ ከሆነ የታችኛው ተፋሰስ ሙከራ ላይ ተጽእኖ ይኖረዋል፣ ለምሳሌ፡ የተገላቢጦሽ ግልባጭ፣ሰሜን ብሎት እና ሌሎች።

1. የተሻሻለው አር ኤን ኤ የጨው ion ቅሪቶች አሉት.

የውሳኔ ሃሳብ፡ ትክክለኛው የኢታኖል መጠን ወደ Buffer RW2 መጨመሩን ያረጋግጡ እና 2 የመንጻት አምድ ማጠቢያዎችን ለስራ በተጠቀሰው ሴንትሪፉጋል ፍጥነት ያድርጉ።ምንም የጨው ion ቅሪት ካለ የመንፃቱን አምድ ወደ Buffer RW2 ለ 5 ደቂቃ በክፍል ሙቀት ውስጥ ይተውት እና የጨው ብክለትን ለማስወገድ ከፍተኛ መጠን ያለው ሴንትሪፍግሽን ያከናውኑ።

2. የኤታኖል ቅሪት በተሻሻለ አር ኤን ኤ.

የውሳኔ ሃሳብ፡- ቋት RW2 ከታጠበ በኋላ ባዶውን ቱቦ ሴንትሪፍግሽን ኦፕሬሽን ለስራ በተጠቆመው ሴንትሪፍግሽን ፍጥነት ማከናወን፣ አሁንም የኢታኖል ቅሪት ካለ ወደ 2 ደቂቃ ባዶ ቱቦ ሴንትሪፍግሽን ኦፕሬሽን እንዲጨምር ወይም በክፍሉ የሙቀት መጠን ለ 5 ሜትር እንዲተው ያድርጉት።