የእንስሳት ጠቅላላ የአር ኤን ኤ ማግለል ስብስብ አጠቃላይ የአር ኤን ኤ ማውጣት እና ማጥራት ለእንስሳት ህዋሶች እና ህዋሶች
የኪት መግለጫ፡-
በፍጥነት እና በብቃት ከፍተኛ-ንፅህናን እና ከፍተኛ ጥራት ያላቸውን አጠቃላይ አር ኤን ኤ ከተለያዩ የእንስሳት ህዋሶች ማውጣት።
ስለ አር ኤን ኤ መበላሸት መጨነቅ አያስፈልግም።አጠቃላይ ስርዓቱ ከ RNase-ነጻ ነው።
ዲ ኤን ኤ-ክሊኒንግ አምድ በመጠቀም ዲ ኤን ኤ በትክክል ያስወግዱ
ዲኤንኤሴን ሳይጨምሩ ዲኤንኤ ያስወግዱ
ቀላል - ሁሉም ስራዎች በክፍል ሙቀት ውስጥ ይጠናቀቃሉ
ፈጣን - ክዋኔው በ 30 ደቂቃዎች ውስጥ ሊጠናቀቅ ይችላል
ደህንነቱ የተጠበቀ—ምንም ኦርጋኒክ reagent ጥቅም ላይ አልዋለም።
ከፍተኛ ንፅህና-OD260/280≈1.8-2.1
Kits መግለጫዎች
50 መሰናዶዎች, 200 መሰናዶዎች
ይህ ኪት ይጠቀማልሽክርክሪት አምድ እና ቀመርበኩባንያችን የተገነባው ከፍተኛ ንፅህናን እና ከፍተኛ ጥራት ያለው አጠቃላይ አር ኤን ኤ ከተለያዩ የእንስሳት ቲሹዎች በከፍተኛ ቅልጥፍና ማውጣት ይችላል ። ቀልጣፋ ዲ ኤን ኤ ማጽጃ አምድ ይሰጣል ፣ ይህም ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ከሱፐርናታንት እና ቲሹ lysate በቀላሉ መለየት እና ማስተዋወቅ ቀላል እና ጊዜ ቆጣቢ;አር ኤን ኤ-ብቻ አምድ አር ኤን ኤን በብቃት ማሰር ይችላል እና በአንድ ጊዜ በልዩ ፎርሙላ ብዙ ናሙናዎች ሊሰራ ይችላል።
መላው ሥርዓት RNase-ነጻ ነው, የተወሰደው አር ኤን ኤ አልተበላሸም ዘንድ;ቡፈር RW1፣ Buffer RW2 ቋት የማጠቢያ ስርዓት፣ ስለዚህም የተገኘው አር ኤን ኤ ከፕሮቲን፣ ዲኤንኤ፣ ion እና ኦርጋኒክ ውህድ ብክለት የጸዳ ነው።
Kit ክፍሎች
| የእንስሳት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ስብስብ | ||
| Kit ክፍሎች | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 ቲ | 200 ቲ | |
| ቋት RL1* | 25ml | 100 ሚሊ ሊትር |
| ቋት RL2 | 15ml | 60 ሚሊ ሊትር |
| ቋት RW1* | 25ml | 100 ሚሊ ሊትር |
| ቋት RW2 | 24ml | 96 ሚሊ |
| RNase-ነጻ ddH2O | 10 ሚሊ | 40 ሚሊ ሊትር |
| አር ኤን ኤ-ብቻ አምድ | 50 | 200 |
| ዲ ኤን ኤ-ማጽጃ አምድ | 50 | 200 |
| መመሪያ መመሪያ | 1 ቁራጭ | 1 ቁራጭ |
የምርት መረጃ
| ቅርጸት | ሽክርክሪት አምድ | የመንጻት አካል | Foregene አምድ፣ reagent |
| ፍሰት | 1-24 ናሙናዎች | ጊዜ በዝግጅት | ~ 30 ደቂቃ (24 ናሙናዎች) |
| ሴንትሪፉጅ | ዴስክ ሴንትሪፉጅ | የፒሮሊሲስ መለያየት | ሴንትሪፉጋል መለያየት |
| ናሙና | የእንስሳት ቲሹ;ሕዋስ | የናሙናዎች መጠን | ቲሹ: 10-20 ሚ.ግ;ሕዋስ፡(1-5)×106 |
| የኢሉሽን መጠን | 50-200 μል | ከፍተኛው የመጫኛ መጠን | 850 μል |
ባህሪዎች እና ጥቅሞች
■ ስለ አር ኤን ኤ መበላሸት መጨነቅ አያስፈልግም;አጠቃላይ ስርዓቱ ከ RNase-ነጻ ነው።
■ ዲ ኤን ኤ-ማጽጃ አምድ በመጠቀም ዲ ኤን ኤውን በደንብ ያስወግዱ
■ ዲኤንኤሴን ሳይጨምሩ ዲኤንኤ ያስወግዱ
■ ቀላል-ሁሉም ስራዎች በክፍል ሙቀት ውስጥ ይጠናቀቃሉ
■ ፈጣን ቀዶ ጥገና በ 30 ደቂቃዎች ውስጥ ሊጠናቀቅ ይችላል
■ ደህንነቱ የተጠበቀ - ምንም ኦርጋኒክ ሬጀንት አያስፈልግም
■ ከፍተኛ ንጽሕና -OD260/280≈1.8-2.1
Kit መተግበሪያ
ከተለያዩ ትኩስ ወይም የቀዘቀዙ የእንስሳት ቲሹዎች ወይም የሰለጠኑ ህዋሶች አጠቃላይ አር ኤን ለማውጣት እና ለማጣራት ተስማሚ ነው።
የምርት መለኪያዎች
■ የታች አፕሊኬሽኖች፡-የመጀመሪያ-ክር ሲዲኤንኤ ውህደት፣ RT-PCR፣ molecular cloning፣ Northern Blot፣ ወዘተ.
■ ናሙናዎች፡ የእንስሳት ቲሹዎች፣ የሰለጠኑ ሴሎች
■ መጠን፡ ቲሹዎች 10-20mg፣ ሕዋሶች(2-5)×106
■ የመንጻት ዓምድ ከፍተኛው የዲ ኤን ኤ ማሰር አቅም፡ 80 μg
■ የኢሉሽን መጠን: 50-200 μl
ሥዕላዊ መግለጫ
የእንስሳት ጠቅላላ የአር ኤን ኤ ማግለል ስብስብ 20mg
ትኩስ የመዳፊት ናሙናዎች፣ 5% የተጣራ አጠቃላይ አር ኤን ኤ 1% agar ይውሰዱ
ግላይኮጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ
1፡ ስፕሊን 2፡ ኩላሊት
3፡ ጉበት 4፡ ልብ
የማከማቻ እና የመቆያ ህይወት
ኪቱ ለ 24 ወራት በክፍል ሙቀት (15-25 ℃) ወይም 2-8 ℃ ለረጅም ጊዜ ሊከማች ይችላል።Buffer RL1 β-mercaptoethanol (አማራጭ) ከተጨመረ በኋላ በ4 ℃ ለ1 ወር ሊከማች ይችላል።
የተጠቀሱ መጣጥፎች
1.ከሆነ፡18.808፡ዜንግ፣ ጥ.፣ ኪን፣ ኤፍ.፣ ሉኦ፣ አር.፣ እና ሌሎች።mRNA-Loaded Lipid-like Nanoparticles ለጉበት መሰረት አርትዖት በማዕከላዊ የተቀናጀ ዲዛይን ማመቻቸት።Adv.ተግባርማተር.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.ከሆነ፡18.187፡ሄ ኤክስ፣ ሆንግ ደብሊው፣ ያንግ ጄ፣ እና ሌሎችም።በቴራፒዩቲካል ግንድ ሴል ዝግጅት ውስጥ ያሉ ሴሎች ድንገተኛ አፖፕቶሲስ ፎስፋቲዲልሰሪን በመልቀቃቸው የበሽታ መከላከያ ውጤት ያስከትላሉ።የሲግናል ማስተላለፊያ ዒላማ Ther.2021 ጁል 14፤6(1)፡270።doi: 10.1038 / s41392-021-00688-ዝ.
3.ከሆነ፡17.97:Dai Z፣ Liu H፣ Liao J፣ እና ሌሎችም።N7-Methylguanosin tRNA ማሻሻያ ኦንኮጂን ኤምአርኤን ትርጉምን ያሻሽላል እና በሄፓቲክ የ cholangiocarcinoma እድገትን ያበረታታል።ሞል ሕዋስ.2021 ጁል 29፡S1097-2765(21)00555-4።doi: 10.1016 / j.molcel.2021.07.003.
4.ከሆነ፡9.225: ካኦ ኤክስ፣ ሹ ዋይ፣ ቼን ዋይ፣ እና ሌሎችም።Mettl14-መካከለኛ m6A ማሻሻያ Endoplasmic Reticulum Homeostasisን በመጠበቅ የጉበት እድሳትን ያመቻቻል።ሴል ሞል ጋስትሮኢንትሮል ሄፓቶል.2021፤12(2)፡633-651።doi: 10.1016 / j.jcmgh.2021.04.001.
አር ኤን ኤ ማግለል ኪት ለ ሌሎች የናሙና ምንጮችይገኛሉ፡-
ሴል፣ ተክል፣ ቫይረስ፣ ደም፣ ወዘተ.
አር ኤን ኤ አልተወጣም ወይም የአር ኤን ኤ ምርት ዝቅተኛ ነው።
ብዙውን ጊዜ የመልሶ ማግኛ ቅልጥፍናን የሚነኩ የተለያዩ ምክንያቶች አሉ, ለምሳሌ: የቲሹ ናሙና አር ኤን ኤ ይዘት, የአሠራር ዘዴ, የኤሌክትሮል መጠን, ወዘተ.
1. የበረዶ መታጠቢያ ወይም ክሪዮጅኒክ (4 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ) ሴንትሪፍግሽን በቀዶ ጥገና ወቅት ተካሂዷል.
ምክር: በጠቅላላው ሂደት በክፍል ሙቀት (15-25 ° ሴ) ውስጥ ይስሩ, በረዶ አይጠቡ እና በዝቅተኛ የሙቀት መጠን ሴንትሪፉል ያድርጉ.
2. ተገቢ ያልሆነ የናሙና ጥበቃ ወይም ከመጠን በላይ የናሙና ማከማቻ ጊዜ።
ምክር፡ ናሙናዎችን በ -80 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ያከማቹ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ያቀዘቅዙ እና ተደጋጋሚ የማቀዝቀዝ አጠቃቀምን ያስወግዱ።ለአር ኤን ኤ ለማውጣት ትኩስ ቲሹ ወይም የሰለጠኑ ሴሎችን ለመጠቀም ይሞክሩ።
3. በቂ ያልሆነ ናሙና lysis.
ምክር፡- ቲሹን (homogenizing tissue) በሚፈጥሩበት ጊዜ ህብረ ህዋሱ በበቂ ሁኔታ ተመሳሳይነት ያለው መሆኑን እና የቲሹ ህዋሶች አር ኤን ኤ መውጣቱን ለማብራራት በበቂ ሁኔታ መከፋፈላቸውን ያረጋግጡ።
4. ኤሊዩቱ በትክክል አልተጨመረም.
ምክር፡ ከRNase-ነጻ ddH መሆኑን ያረጋግጡ2O ወደ የመንጻት አምድ ሽፋን መሃል ላይ ጠብታ አቅጣጫ ይታከላል።
5. ትክክለኛው የኢታኖል መጠን ወደ Buffer RL2 ወይም Buffer RW2 አልተጨመረም።
ምክር፡ መመሪያዎቹን ይከተሉ፣ ትክክለኛውን የኢታኖል መጠን ወደ Buffer RL2 እና Buffer RW2 ይጨምሩ እና ኪቱን ከመጠቀምዎ በፊት በደንብ ይቀላቅሉ።
6. የቲሹ ናሙና መጠን ተገቢ አይደለም.
ምክር፡ ከ10-20 ሚ.ግ ቲሹ ወይም (1-5) × 10 ይጠቀሙ6ህዋሶች በ 500 μl ቋት RL1፣ ከመጠን በላይ የቲሹ አጠቃቀም የአር ኤን ኤ ማውጣትን ስለሚቀንስ።
7. ትክክለኛ ያልሆነ የመለጠጥ መጠን ወይም ያልተሟላ ኤሌሽን.
የውሳኔ ሃሳብ: የመንጻቱ አምድ የመለጠጥ መጠን 50-200 μl;የማብራሪያው ውጤት አጥጋቢ ካልሆነ በቅድሚያ በማሞቅ RNase-Free ddH ከተጨመረ በኋላ የክፍሉን የሙቀት አቀማመጥ ጊዜ ለማራዘም ይመከራል.2ኦ፣ ለምሳሌ ለ5-10 ደቂቃ።
8.The የመንጻት ዓምድ Buffer RW2 መታጠብ በኋላ ኤታኖል ቅሪት አለው.
የውሳኔ ሃሳብ፡ ከ Buffer RW2 መታጠብ በኋላ የኢታኖል ቅሪት ካለ ባዶ ቱቦ ሴንትሪፍግሽን ለ 1 ደቂቃ ባዶ ቱቦ ሴንትሪፍግሽን የሚፈጀው ጊዜ ወደ 2 ደቂቃ ሊጨምር ይችላል ወይም የንፅህና አምድ በክፍል ሙቀት ውስጥ ለ 5 ደቂቃ ያህል ቀሪውን ኢታኖል በበቂ ሁኔታ ለማስወገድ ያስችላል።
የተጣራ አር ኤን ኤ ተበላሽቷል
የተጣራው አር ኤን ኤ ጥራት እንደ ናሙናውን መጠበቅ፣ የ RNase ብክለት እና መጠቀሚያ ወዘተ ካሉ ነገሮች ጋር የተያያዘ ነው።
1. የቲሹ ናሙናዎች በጊዜ ውስጥ አይቀመጡም.
ምክር: ከተሰበሰበ በኋላ የቲሹ ናሙናዎች ወይም ሴሎች በወቅቱ ጥቅም ላይ ካልዋሉ, ወዲያውኑ በ -80 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ያስቀምጡ.አር ኤን ኤን ለማውጣት በተቻለ መጠን አዲስ የተወሰዱ ቲሹ ወይም የሕዋስ ናሙና ይጠቀሙ።
2. የቲሹ ናሙናዎችን ተደጋጋሚ ማቀዝቀዝ.
ማሳሰቢያ፡ የቲሹ ናሙናዎችን በሚከማችበት ጊዜ ለማቆየት በትናንሽ ቁርጥራጮች መቁረጥ የተሻለ ነው፣ እና በሚጠቀሙበት ጊዜ አንዱን ክፍል በማንሳት ናሙናው በተደጋጋሚ እንዳይቀዘቅዝ እና የአር ኤን ኤ እንዳይበላሽ።
3. RNase በቀዶ ጥገናው ወቅት የሚጣሉ ጓንቶች፣ ጭምብሎች እና የመሳሰሉትን አስተዋውቋል ወይም አይለብስም።
የውሳኔ ሃሳብ፡ የአር ኤን ኤ ማውጣት ሙከራዎች በተሻለ የአር ኤን ኤ መጠቀሚያ ክፍሎች ውስጥ ይከናወናሉ እና ጠረጴዛው ከሙከራው በፊት ይጸዳል።
በሙከራው ወቅት በአርኤንኤስ መግቢያ ምክንያት የሚፈጠረውን የአር ኤን ኤ መበላሸትን ለመቀነስ የሚጣሉ ጓንቶች እና ጭንብል ያድርጉ።
4. ጥቅም ላይ በሚውልበት ጊዜ ሬጀንቶች በ RNase ተበክለዋል.
ምክር፡ ተዛማጅ ሙከራዎችን ለማድረግ በአዲስ የእንስሳት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለያ ኪት ይተኩ።
5. በአር ኤን ኤ መጠቀሚያ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉት የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች፣ ምክሮች፣ ወዘተ በ RNase ተበክለዋል።
ምክር፡ በአርኤንኤ ማውጣት ላይ ጥቅም ላይ የሚውሉት የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች፣ ምክሮች፣ pipettes፣ ወዘተ ሁሉም ከአር ናስ-ነጻ መሆናቸውን ያረጋግጡ።
የተጣራ አር ኤን ኤ የታችኛው ተፋሰስ ሙከራዎች ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል።
አር ኤን ኤ በማንጻት አምድ የጸዳ፣ የጨው ions፣ የፕሮቲን ይዘቱ በጣም ትልቅ ከሆነ የታችኛው ተፋሰስ ሙከራ ላይ ተጽእኖ ይኖረዋል፣ ለምሳሌ፡ የተገላቢጦሽ ግልባጭ፣ሰሜን ብሎት እና ሌሎች።
1. የተሻሻለው አር ኤን ኤ የጨው ion ቅሪቶች አሉት.
የውሳኔ ሃሳብ፡ ትክክለኛው የኢታኖል መጠን ወደ Buffer RW2 መጨመሩን ያረጋግጡ እና 2 የመንጻት አምድ ማጠቢያዎችን ለስራ በተጠቀሰው ሴንትሪፉጋል ፍጥነት ያድርጉ።ምንም የጨው ion ቅሪት ካለ የመንፃቱን አምድ ወደ Buffer RW2 ለ 5 ደቂቃ በክፍል ሙቀት ውስጥ ይተውት እና የጨው ብክለትን ለማስወገድ ከፍተኛ መጠን ያለው ሴንትሪፍግሽን ያከናውኑ።
2. የኤታኖል ቅሪት በተሻሻለ አር ኤን ኤ.
የውሳኔ ሃሳብ፡- ቋት RW2 ከታጠበ በኋላ ባዶውን ቱቦ ሴንትሪፍግሽን ኦፕሬሽን ለስራ በተጠቆመው ሴንትሪፍግሽን ፍጥነት ያከናውኑ፣ አሁንም የኢታኖል ቅሪት ካለ ባዶ ቱቦ ሴንትሪፉግሽን ኦፕሬሽን ጊዜውን ወደ 2 ደቂቃ ያሳድጋል፣ ወይም የተረፈውን ቱቦ ማስወገድን ከፍ ለማድረግ ከባዶ ቱቦ ሴንትሪፉግሽን በኋላ ለ 5 ደቂቃ በቤት ሙቀት ውስጥ ይተውት።
