የችግር ትንተና መመሪያ

ሊያጋጥሙዎት ስለሚችሉ ችግሮች የሚከተለው ትንታኔየእፅዋት ጠቅላላRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

የማዞሪያው አምድ ተዘግቷል።

የአከርካሪው አምድ መዘጋት አር ኤን ኤ ለማግኘት የአር ኤን ኤ ምርት እንዲቀንስ አልፎ ተርፎም መንጻት እንዳይችል ያደርገዋል፣ እና የተገኘው አር ኤን ኤ ጥራት ዝቅተኛ ይሆናል።

የጋራ መንስኤ ትንተና፡-

1. ናሙናው ሙሉ በሙሉ አልተሰበረም.

ያልተሟላ የናሙና መከፋፈል የዲ ኤን ኤ-ክሊኒንግ አምድ ሊዘጋው ይችላል፣ይህም የአር ኤን ኤ ምርትን እና ጥራትን ሊጎዳ ይችላል።የናሙና መቆራረጥን በሚሰሩበት ጊዜ በተቻለ መጠን እንደ የሕዋስ ግድግዳዎች እና የናሙናዎች የሕዋስ ሽፋን ያሉ ሕብረ ሕዋሳትን ለመስበር በቂ መጠን ያለው ፈሳሽ ናይትሮጅን በፍጥነት እንዲፈጩ እንመክራለን።ለ polyphenol polysaccharides የእጽዋት ናሙናዎች, Plant Total RNA Isolation Kit Plus እንዲጠቀሙ እንመክራለን.

2.DNA-Cleaning Column የገለልተኛ ሱፐርናታንትን ይመኙ፣የሚቻለውን የሕዋስ ፍርስራሽ እንክብሎችን ይፈልጉ።

በአር ኤን ኤ ማስታወቂያ አሰራር ሂደት ውስጥ የታመቀ የሴል ፍርስራሽ ፔሌት አር ኤን ኤ-ብቻውን አምድ ሊዘጋው ይችላል (የሂደቱን ደረጃ 5፣ የፖሊሲካካርዳይድ ፖሊፊኖል አሰራርን ደረጃ 6 ይመልከቱ)።የሕዋስ ፍርስራሾች እንዳይመኙ ይህንን ከፍተኛ መጠን ያለው ንጥረ ነገር ሲመኙ ጥንቃቄ እንዲደረግ እንመክራለን።

3. የናሙና የመጀመሪያ መጠን በጣም ትልቅ ነው.

ከመጠን በላይ የናሙና አጠቃቀም በ Buffer PRL1 ወይም Buffer PSL1 ያልተሟላ የናሙና መሰባበር ወይም ያልተሟላ የሕዋስ lysis ያስከትላል፣ ይህም ለጽዳት ሥራዎች የተዘጋ የመንጻት አምድ ያስከትላል።Plant Total RNA Isolation Kit በአንድ የሚሰራ ናሙና በአንድ የማጥራት ከፍተኛው 50 mg ነው።ለእጽዋት ናሙናዎች የ polyphenol polysaccharides, Plant Total RNA Isolation Kit Plus ን እንዲሞክሩ እንመክራለን.

4. የሴንትሪፉጅ ሙቀት በጣም ዝቅተኛ ነው.

የናሙና ቲሹ ፈሳሽ ናይትሮጅን ከመበላሸቱ በስተቀር ሙሉ አር ኤን ኤ ማግለል እና ማጽዳት ሁሉም እርምጃዎች በቤት ሙቀት (20-25 ° ሴ) ይከናወናሉ.አንዳንድ ዝቅተኛ የሙቀት መጠን ያላቸው ሴንትሪፉጅ የሙቀት መጠኑ ከ20 ዲግሪ ሴንቲግሬድ በታች ሲሆን ይህም በDNA-Cleaning Column እና/ወይም አር ኤን ኤ-ብቻ አምድ ውስጥ መዘጋትን ሊያስከትል ይችላል።ይህ ከተከሰተ, የሴንትሪፉጅ ሙቀትን ወደ 20-25 ° ሴ ያስቀምጡ እና የሊሲስ ቅልቅል ቀድመው ያሞቁ እና / ወይም የኤታኖል መለያየትን ወደ 37 ° ሴ ይጨምሩ.

የትኛውም አር ኤን ኤ ያልተወጣ ወይም የአር ኤን ኤ ምርት ዝቅተኛ አይደለም።

ብዙውን ጊዜ የመልሶ ማግኛ ቅልጥፍናን የሚነኩ ብዙ ምክንያቶች አሉ, ለምሳሌ: የናሙና አር ኤን ኤ ይዘት, የአሠራር ዘዴ, የኤሌክትሮል መጠን, ወዘተ.

የተለመዱ ምክንያቶች ትንተና እንደሚከተለው ነው-

1.በቀዶ ጥገናው ወቅት የበረዶ መታጠቢያ ወይም ዝቅተኛ የሙቀት መጠን (4 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ) ሴንቲግሬድ ተከናውኗል.

አስተያየት: በጠቅላላው ሂደት ውስጥ በቤት ሙቀት (15-25 ° ሴ) ውስጥ ይሰሩ, የበረዶ መታጠቢያ እና ዝቅተኛ የሙቀት መጠን ማእከላዊ አያድርጉ.

       2.ናሙናው ተገቢ ባልሆነ መንገድ በመቆየቱ ወይም ናሙናውን ለረጅም ጊዜ በመቆየቱ አር ኤን ኤ ተበላሽቷል።

ምክር፡ አዲስ የተሰበሰቡ ናሙናዎች በፍጥነት በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ እንዲቀዘቅዙ እና ከዚያም በ -80 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለረጅም ጊዜ እንዲከማቹ መደረግ አለባቸው, ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን እና ናሙናዎችን ማቅለጥ;ወይም ወዲያውኑ ናሙናዎቹን በ RNA stabilizer RNAlater solution (የእንስሳት ናሙናዎች) ውስጥ ያርቁ.

       3.በቂ ያልሆነ የናሙና መበታተን እና የሊሲስ የንጽሕና አምድ ወደ መዘጋት ይመራሉ.

አስተያየት: ቲሹውን በሚፈጩበት ጊዜ, እባክዎን ቲሹው በበቂ ሁኔታ የተፈጨ መሆኑን ያረጋግጡ እና በፍጥነት ወደ ተዘጋጀው Buffer PSL1 ያስተላልፉ (ትክክለኛውን የ β-ME መጠን መጨመሩን ያረጋግጡ, የሂደቱን ደረጃ 1 ይመልከቱ).

4.The eluent በስህተት ታክሏል.

አስተያየት፡ ከRNase-ነጻ ddH መሆኑን ያረጋግጡ₂O ወደ የመንጻት አምድ ሽፋን መሃል ይንጠባጠባል።

5.የፍፁም ኢታኖል ትክክለኛ መጠን ወደ Buffer PSL2 ወይም Buffer PRW2 አልተጨመረም።

የአስተያየት ጥቆማ፡ እባኮትን መመሪያዎቹን ይከተሉ፣ ትክክለኛውን የኢታኖል መጠን ወደ Buffer PSL2 እና Buffer PRW2 ያክሉ እና ኪቱ ከመጠቀሙ በፊት በደንብ ይቀላቀሉ።

6.የቲሹ ናሙና መጠን ተገቢ ያልሆነ ነው.

አስተያየት፡ በ 500 μl Buffer PSL1 50 mg ቲሹን ይጠቀሙ።በጣም ብዙ ቲሹን መጠቀም የተወጣውን አር ኤን ኤ መጠን ይቀንሳል እና የተገኘው አር ኤን ኤ ንፅህናም ይቀንሳል።የመጀመሪያው ናሙና መጠን በአንድ አር ኤን ኤ ማውጣት ከ 50 ሚሊ ግራም መብለጥ እንደሌለበት አበክረን እንመክራለን።

7. ተገቢ ያልሆነ የኤሌክትሮማግኔቲክ መጠን ወይም ያልተሟላ ቅልጥፍና.

አስተያየት: የመንጻቱ አምድ የኤሌክትሮል መጠን 50-200 μl;የማብራሪያው ውጤት አጥጋቢ ካልሆነ በቅድሚያ በማሞቅ RNase-Free ddH ከተጨመረ በኋላ በክፍል ሙቀት ውስጥ ጊዜውን ለማራዘም ይመከራል.₂ኦ፣ እንደ 5-10 ደቂቃ።

8.The የመንጻት አምድ በቡፈር PRW2 ከታጠበ በኋላ የኤታኖል ቅሪት አለው።

   አስተያየት፡ ባዶው ቱቦ ለ1 ደቂቃ ሴንትሪፉፍ ከተደረገ እና አሁንም በ Buffer PRW2 ውስጥ ከታጠበ በኋላ ኤታኖል የሚቀረው ከሆነ ባዶውን ቱቦ ሴንትሪፍግሽን ጊዜን ወደ 2 ደቂቃ ማሳደግ ወይም የተረፈውን ኢታኖል ሙሉ በሙሉ ለማስወገድ የንጽሕና አምድ በክፍል ሙቀት ውስጥ ለ 5 ደቂቃ ማስቀመጥ ትችላለህ።

9.The ኪት በስህተት ጥቅም ላይ ውሏል.

   የአስተያየት ጥቆማ፡ ለዕፅዋት ናሙናዎች ፖሊፊኖሊክ ፖሊሳክካርዳይድ፣ እንደ ፕላንት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ኪት ያሉ የተለመዱ ኪት መጠቀም ጥሩ የአር ኤን ኤ ናሙናዎችን ላያገኝ ይችላል።በተለይ ለ polyphenolic polysaccharide የእፅዋት ናሙናዎች የተዘጋጀውን Plant Total RNA IsolationKit Plus እንድትጠቀም እንመክርሃለን።አር ኤን ኤን ከፖሊፊኖል እና ፖሊሶካካርዳይድ የእፅዋት ናሙናዎች ለማውጣት በልዩ ሁኔታ የተዘጋጀ ኪት።

OD260/OD280 ዋጋ ዝቅተኛ ነው።

አር ኤን ኤ ከዲኤችኤች ጋር₂ኦ እና ለስፔክትሮፎቶሜትር ንባቦች ጥቅም ላይ የዋለው ዝቅተኛ OD260/OD280 እሴቶችን ያስከትላል።10 mM Tris-HCl፣ pH 7.5 (ከአርናሴ-ነጻ ddH ይልቅ) እንዲጠቀሙ እንመክራለን።₂O to elute RNA) በአንፃራዊነት ትክክለኛ የ OD260/OD280 እሴቶችን ለማግኘት፣ በገጽ 19 ላይ ያለውን “RNA Concentration and Purification Assays” የሚለውን ይመልከቱ።

የተጣራው አር ኤን ኤ ተበላሽቷል

የተጣራ አር ኤን ኤ ጥራት እንደ የናሙና ጥበቃ፣ የ RNase ብክለት እና መጠቀሚያ ካሉ ነገሮች ጋር የተያያዘ ነው።

የተለመዱ መንስኤዎች ትንተና;

1.Tissue ናሙናዎች ከተሰበሰቡ በኋላ በጊዜ ውስጥ አልተቀመጡም.

    ምክር፡ የቲሹ ናሙናዎች ከተሰበሰቡ በኋላ በጊዜ ውስጥ ጥቅም ላይ ካልዋሉ እባክዎን ወዲያውኑ በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ በዝቅተኛ የሙቀት መጠን ያከማቹ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ በፍጥነት ከቀዘቀዙ በኋላ ወደ -80 ° ሴ ያስተላልፉ ወይም ናሙናዎቹን ወዲያውኑ በአር ኤን ኤ stabilizer RNAlater መፍትሄ (የእንስሳት ናሙናዎች) ውስጥ ያስገቡ።ለአር ኤን ኤ ማውጣት፣ አዲስ የተሰበሰቡ የቲሹ ናሙናዎችን ለመጠቀም ይሞክሩ።

2.ተደጋጋሚ ቅዝቃዜ እና የቲሹ ናሙናዎችን ማቅለጥ.

   አስተያየት፡ የቲሹ ናሙናዎችን በሚከማችበት ጊዜ ለማቆየት በትናንሽ ቁርጥራጭ መቁረጥ እና ሲጠቀሙበት የተወሰነውን ክፍል ማውጣቱ የተሻለው የናሙናዎቹ ተደጋጋሚ ቅዝቃዜና ማቅለጥ ምክንያት የሚከሰተውን የአር ኤን ኤ መበላሸት ለማስወገድ ነው።

3.RNase ቀዶ ጥገና ክፍል ውስጥ አስተዋውቋል ወይም የማይለብሱ ጓንቶች, ጭንብል, ወዘተ.

   አስተያየት፡ የአር ኤን ኤ ማውጣት ሙከራዎች በተሻለ ሁኔታ የሚከናወኑት በተለየ የአር ኤን ኤ ኦፕሬሽኖች ሲሆን ከሙከራው በፊት የላብራቶሪ ጠረጴዛው ማጽዳት አለበት እና በሙከራው ወቅት የሚጣሉ ጓንቶች እና ጭምብሎች አር ኤን ኤ በከፍተኛ መጠን በማስተዋወቅ ምክንያት የሚፈጠረውን የአር ኤን ኤ መበላሸት ለማስወገድ ይጠቅማሉ።

4.The reagent ጥቅም ላይ በሚውልበት ጊዜ በ RNase ተበክሏል.

   የአስተያየት ጥቆማ፡ ለተዛማጅ ሙከራዎች በአዲስ ተከታታይ የእጽዋት አጠቃላይ የአር ኤን ኤ ማስወጫ መሳሪያዎች ይተኩ።

5. ለአር ኤን ኤ ማኒፑል ጥቅም ላይ የሚውሉት የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች እና የ pipette ምክሮች በ RNase ተበክለዋል.

የአስተያየት ጥቆማ፡- በአርኤንኤ ማውጣት ላይ ጥቅም ላይ የሚውሉት የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች፣ pipette ምክሮች፣ pipettes፣ ወዘተ ሁሉም ከአር ናስ-ነጻ መሆናቸውን ያረጋግጡ።

መመሪያ መመሪያዎች፡-

የእፅዋት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ኪት መመሪያ መመሪያ