(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR ኪት - SYBR አረንጓዴ I
መግለጫዎች
የ(96-በደንብ) QuickEasyTM የሕዋስ ቀጥታ RT-qPCR ኪት–SYBR አረንጓዴ Iያቀርባልልዩ የሊሲስ ቋት ስርዓትto አር ኤን ኤ በፍጥነት ይልቀቁከሰለጠነ ሕዋስጊዜ የሚወስድ እና አድካሚን በማስወገድ ለ RT-qPCR ምላሽ ናሙናዎችየአር ኤን ኤ የመንጻት ሂደት፣ እና የሚፈለገውን አር ኤን ኤ አብነት ለማግኘት 7 ደቂቃ ብቻ ይወስዳል።የ5× ቀጥተኛ RT ድብልቅእና2× ቀጥተኛ qPCR ቅልቅል-SYBRበሳጥኑ ውስጥ የቀረበው በፍጥነት እናየእውነተኛ ጊዜ መጠንን በትክክል ያግኙPCR ውጤቶች.
5× Direct RT Mix እና 2× Direct qPCR Mix-SYBR ጠንካራ አጋቾቹ መቻቻል አላቸው፣ እና የናሙናውን lysate በብቃት በግልባጭ ወደ ጽሑፍ ቅጂ እና ለተለየ ማጉላት እንደ አብነት ሊሞከር ይችላል።ሪአጀንቱ ለ አር ኤን ኤ ከፍተኛ ቅርበት ያለው Foregene ልዩ የሆነ የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትሴዝ፣ እንዲሁም ሙቅ ዲ-ታክ ዲኤንኤ ፖሊመሬሴን፣ ዲኤንቲፒ፣ ኤምጂሲኤልን ይዟል።2 , ምላሽ ቋት, PCR አመቻች እና stabilizer , እና ናሙናውን በፍጥነት, በቀላሉ እና በትክክል ለመለየት ከሊሲስ ቋት ጋር በማጣመር ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል, እና ከፍተኛ የስሜታዊነት, ጠንካራ ልዩነት እና ጥሩ መረጋጋት ባህሪያት አሉት.
ኪት 96-በደንብ የሰለጠኑ ሕዋሳት ማይክሮ-ስርዓት lysis ያለመ ነው, እና ጥሩ ወጥነት እና ወጥነት አለው;የኪት ክፍሎቹ 96 የሊሲስ ምላሾችን፣ 96 የተገላቢጦሽ ግልባጭ ምላሽ እና 96×2 qPCR ምላሽ ይሰጣሉ፣ ይህም ባለ 96-ጉድጓድ ሴሎችን ለአንድ ጊዜ አገልግሎት የሚያሟሉ ሲሆን ይህም በተደጋጋሚ በሚከፈት መከፈት፣ በ reagents ቅዝቃዜ እና መቅለጥ እና የ reagents አፈጻጸም መበላሸት የሚፈጠረውን ብክለት በማስወገድ ነው።
Kit ክፍሎች
የኪት ቅንብር ( 50 μኤል ሊሲስ ሲስተም/20 μLRT ምላሽ ሥርዓት /20μL qPCR ምላሽ ሥርዓት) | DRT-03011 | አስተያየት | |
96ቲ | |||
ክፍልI | ቋትCL | 5 ሚሊ | ሕዋስሊሲስ |
ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
ቋትST | 500 μL | ||
ክፍል II | ዲ.ኤን.ኤማጥፊያ | 100 μL | |
5× ቀጥተኛ RT ድብልቅ | 400 μL | RT | |
2× ቀጥተኛ qPCR ቅልቅል-SYBR | 1 ሜL × 2 | qPCR | |
50× ROX ማጣቀሻ ማቅለሚያ | 400µL | ||
RNase- ፍርይddH2 O | 1.7 ሚሊ |
| |
Mዓመታዊ | 1 ቁራጭ | 1 አገልግሎት |
*: የ lysis reagent ዲ ኤን ኤ ኢሬዘር በመሳሪያው ክፍል II ውስጥ ተካትቷል;የሴል ሊሲስ፣ RT እና qPCR ክፍሎች ለየብቻ ሊገዙ ይችላሉ።
ባህሪዎች እና ጥቅሞች
■ቀላል እና ውጤታማ፡ በሴል ቀጥታ RT ቴክኖሎጂ፣ የአር ኤን ኤ ናሙናዎች በ7 ደቂቃ ውስጥ ብቻ ሊገኙ ይችላሉ።
∎ የናሙና ፍላጎቱ ትንሽ ነው፣ እስከ 10 ህዋሶች መሞከር ስለሚቻል።
■ ከፍተኛ መጠን: በ 384, 96, 24, 12, 6-well plates ውስጥ በሰለጠኑ ሴሎች ውስጥ አር ኤን ኤ በፍጥነት መለየት ይችላል.
■ የዲኤንኤ ኢሬዘር የተለቀቁትን ጂኖም በፍጥነት ያስወግዳል፣በቀጣይ የሙከራ ውጤቶች ላይ ያለውን ተጽእኖ በእጅጉ ይቀንሳል።
∎ የተመቻቸ RT እና qPCR ስርዓት ባለ ሁለት ደረጃ RT-PCR በግልባጭ ግልባጭ ይበልጥ ቀልጣፋ እና PCR የበለጠ የተለየ እና የ RT-qPCR ምላሽ አጋቾችን የበለጠ የሚቋቋም ያደርገዋል።
Kit መተግበሪያ
የመተግበሪያው ወሰን: የሰለጠኑ ሴሎች.
- አር ኤን ኤ በናሙና ሊሲስ የተለቀቀ፡ ለዚህ ኪት RT-qPCR አብነት ብቻ ነው የሚመለከተው።
- ኪቱ ለሚከተሉት ዓላማዎች ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል፡ የጂን አገላለጽ ትንተና፣ በሲአርአና መካከለኛ የሆነ የጂን ጸጥታ ውጤት ማረጋገጥ፣ የመድኃኒት ማጣሪያ ወዘተ.
የማከማቻ እና የመደርደሪያ ሕይወት
የዚህ ኪት ክፍል I በ4 መቀመጥ አለበት።℃;ክፍል II በ -20 ℃ ውስጥ መቀመጥ አለበት.
Foregene Protease Plus II በ 4 ውስጥ መቀመጥ አለበት℃፣ በ -20 ℃ ላይ አትቀዘቅዙ።
ሬጀንት 2×ቀጥታ qPCR ሚክስ-ታክማን በ -20 መቀመጥ አለበት።℃ጨለማ ውስጥ;በተደጋጋሚ ጥቅም ላይ ከዋለ በ 4 ውስጥ ሊከማች ይችላል℃ ለአጭር ጊዜ ማከማቻ (በ10 ቀናት ውስጥ መጠቀም)።
የእውነተኛ ጊዜ PCR ፕሪመር ንድፍ መርሆዎች
ወደፊት ፕሪመር እና የተገላቢጦሽ ፕሪመር
ለሪል ታይም PCR, የፕሪመር ንድፍ በጣም አስፈላጊ ነው.ፕሪመርሮች ከ PCR ማጉላት ልዩነት እና ቅልጥፍና ጋር የተገናኙ ናቸው፣ እና የሚከተሉትን መርሆች በማጣቀስ ሊነደፉ ይችላሉ።
- የመነሻ ርዝመት: 18-30bp.
- የጂሲ ይዘት፡ 40-60%.
- Tm ዋጋ፡- እንደ ፕሪመር 5 ያለ የፕሪመር ዲዛይን ሶፍትዌር የፕሪመርን ቲም ዋጋ ሊሰጥ ይችላል።የላይ እና የታችኛው ተፋሰሶች የቲኤም እሴቶች በተቻለ መጠን ቅርብ መሆን አለባቸው።የቲም ስሌት ቀመርም ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል፡ Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)።PCR ን ሲያከናውን ከ 5 ዲግሪ ሴንቲግሬድ የፕሪመር ቲም እሴት በታች ያለው የሙቀት መጠን በአጠቃላይ እንደ ማደንዘዣ የሙቀት መጠን ይመረጣል (ተዛማጁ የሙቀት መጠን መጨመር የ PCR ምላሽን ልዩነት ሊጨምር ይችላል).
- ፕሪመርስ እና PCR ምርቶች፡-
- የንድፍ ፕሪመር PCR ማጉላት የምርት ርዝመት ከ100-150ቢፒ ይመረጣል።
- በአብነት ሁለተኛ መዋቅራዊ አካባቢ ውስጥ የንድፍ ፕሪመር በተቻለ መጠን መወገድ አለበት.
- በ 3′ የላይኛው እና የታችኛው ተፋሰስ ፕሪመር መካከል 2 ወይም ከዚያ በላይ ተጨማሪ መሠረቶች እንዳይፈጠሩ ያስወግዱ።
- ፕሪመር 3′ ተርሚናል ቤዝ ከ3 ተጨማሪ ተከታታይ G ወይም C ጋር ሊኖር አይችልም።
- ፕራይመሮቹ እራሳቸው ተጨማሪ መዋቅሮች ሊኖራቸው አይችልም, አለበለዚያ የፀጉር አሠራር ይሠራል, የ PCR ማጉላት ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል.
- ATCG በተቻለ መጠን በፕሪመር ቅደም ተከተል መሰራጨት አለበት ፣ እና የ 3′ ተርሚናል መሠረት እንደ ቲ መወገድ አለበት።
አባሪ1፡ ሲኤል ዳይሬክትRT-qPCR Kit component ማሟያ ጥቅል
1.የሴል ሊሲስ መፍትሄ
የሴል ሊሲስ መፍትሄ | |||
Kit ክፍሎች (24-ጉድጓድ ሊሲስ ሲስተም / ጉድጓድ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 ቲ | 500 ቲ | ||
ክፍልአይ | ቋት CL | 20 ሚሊ ሊትር | 100 ሚሊ ሊትር |
Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ሚሊ × 2 | |
ቋት ST | 1 ሚሊ × 2 | 10 ሚሊ ሊትር | |
ክፍልII | ዲ ኤን ኤ መጥረጊያ | 400 μl | 1 ሚሊ × 2 |
RT ድብልቅ | |
Kit ክፍሎች (20 μl ምላሽ ሥርዓት) | DRT-01011-B1 |
200 ቲ | |
5× ቀጥተኛ RT ድብልቅ | 800 μl |
RNase-ነጻ ddH2O | 1.7 ሚሊ × 2 |
qPCR ድብልቅ | ||
Kit ክፍሎች (20 μl ምላሽ ሥርዓት) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
200 ቲ | 1000 ቲ | |
2× ቀጥተኛ qPCR ቅልቅል-ታክማን | 1 ሚሊ × 2 | 1.7 ሚሊ × 6 |
20× ROX ማጣቀሻ ማቅለሚያ | 40 μl | 200 ሚሊ ሊትር |
RNase-ነጻ ddH2O | 1.7 ሚሊ ሊትር | 10 ሚሊ ሊትር |
መመሪያ መመሪያዎች፡-