ዓምዱ ተሰክቷል።

ዓምዱ ከተሰካ በኋላ, የአር ኤን ኤ ምርት ይቀንሳል ወይም አር ኤን ኤውን ለማጣራት እንኳን የማይቻል ነው, እና የተገኘው አር ኤን ኤ ክብደት ዝቅተኛ ነው.

የጋራ መንስኤ ትንተና;

1. የናሙና እረፍቶች ሙሉ በሙሉ አይደሉም.

የናሙና መሰባበር የአር ኤን ኤ ምርትን እና ጥራትን በሚጎዳ መልኩ የዲኤንኤ ማጽጃ ዓምድ ሙሉ በሙሉ እንዲታገድ አያደርግም።ናሙናዎችን በሚሰብሩበት ጊዜ በበቂ ፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ፈጣን የመፍጨት ስራን እንመክራለን፣ የናሙናውን የሕዋስ ግድግዳ፣ የሕዋስ ሽፋን እና ሌሎች ሕብረ ሕዋሳትን ለመፍጨት ይሞክሩ።ለፖሊዮል ፖሊሶክካርዳይድ የእጽዋት ናሙናዎች፣ Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS እንዲጠቀሙ እንመክራለን።

2. የተለየውን የናሙና ሱፐርናታንትን በDNA-Cleaning Column ሲጠቡት የሚቻለው የሕዋስ የተበጣጠሰ ዝናብ ሊተነፍስ ይችላል።

የተወሰደው ሕዋስ የተበጣጠሰ ደለል የ RNA-ONLY አምድ ያስከተለው አር ኤን ኤ የማስተዋወቅ ስራ ሲሰራ የሚዘጋውን (ደረጃ 6 ይመልከቱ)።የሕዋስ ፍርስራሾች እንዳይጠቡ ይህንን ከፍተኛ መጠን በሚስቡበት ጊዜ በጥንቃቄ እንመክርዎታለን።

3. የናሙና የመጀመሪያ መጠን በጣም ብዙ ነው.

ከመጠን በላይ የናሙና አጠቃቀም ያልተሟላ የናሙና መከፋፈል ወይም ያልተሟላ የሕዋስ ሊሲስ በ Buffer PSL1 ያስከትላል፣ ይህም በማጽዳት ጊዜ የመንጻት ዓምድ መዘጋት ያስከትላል።የእፅዋት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ኪት እያንዳንዱ ነጠላ የተጣራ የአሠራር ናሙና 50 mg ነው።ለፖሊዮል ፖሊሶክካርዳይድ የእፅዋት ናሙናዎች፣ Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS እንዲሞክሩ እንመክርዎታለን።

4. የሴንትሪፉጅ ሙቀት በጣም ዝቅተኛ ነው.

አጠቃላይ የአር ኤን ኤ ማግለል እና የማጥራት ሂደት በክፍል ሙቀት (20-25) ውስጥ ይካሄዳል°ሐ) ፣ የናሙና ቲሹ በፈሳሽ ናይትሮጂን ከተሰበረ በስተቀር። የአንዳንድ ክሪዮጅኒክ ሴንትሪፉጅ ሙቀት ከ 20 በታች ነው።℃የዲኤንኤ-ማጽጃ አምድ እና/ወይም አር ኤን ኤ-ብቻ አምድ እንዲዘጋ ሊያደርግ ይችላል።ይህ ከተከሰተ የሴንትሪፉጅ ሙቀትን ወደ 20-25 ያዘጋጁ℃, እናየሊሲስ ቅይጥ እና/ወይም ኤታኖል የተጨመረው ሱፐርናታንት ወደ 37 ቀድመው መሙላቱን ያረጋግጡ°C.

የትኛውም አር ኤን ኤ ያልተወጣ ወይም የአር ኤን ኤ ምርት ዝቅተኛ አይደለም።

ብዙውን ጊዜ የመልሶ ማግኛ ቅልጥፍናን የሚነኩ ብዙ ምክንያቶች አሉ, ለምሳሌ: የናሙና አር ኤን ኤ ይዘት, የአሠራር ዘዴ, የኤሌክትሮል መጠን, ወዘተ.

የተለመዱ ምክንያቶች ትንተና እንደሚከተለው ነው-

1.በቀዶ ጥገናው ወቅት የበረዶ መታጠቢያ ወይም ዝቅተኛ የሙቀት መጠን (4 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ) ሴንቲግሬድ ተከናውኗል.

አስተያየት፡ በክፍል ሙቀት (15-25°ሐ) በጠቅላላው ሂደት, የበረዶ መታጠቢያ እና ዝቅተኛ የሙቀት መጠን ማእከላዊ አያድርጉ.

2.አር ኤን ኤው የናሙናውን ተገቢ ባልሆነ መንገድ በማቆየት ወይም የናሙናውን ረጅም ጊዜ በመቆየቱ ምክንያት ተበላሽቷል.

ምክር፡ አዲስ የተሰበሰቡ ናሙናዎች በፍጥነት በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ እንዲቀዘቅዙ እና ከዚያም በ -80 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለረጅም ጊዜ እንዲከማቹ መደረግ አለባቸው, ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን እና ናሙናዎችን ማቅለጥ;ወይም ወዲያውኑ ናሙናዎቹን በ RNA stabilizer RNAlater solution (የእንስሳት ናሙናዎች) ውስጥ ያርቁ.

3. በቂ ያልሆነ የናሙና መቆራረጥ እና የሊሲስ የመንጻት አምድ መዘጋትን ያስከትላል.

አስተያየት: ቲሹውን በሚፈጩበት ጊዜ, እባክዎን ቲሹው በበቂ ሁኔታ የተፈጨ መሆኑን ያረጋግጡ እና በፍጥነት ወደ ተዘጋጀው Buffer PSL1 ያስተላልፉ (ትክክለኛውን የ β-ME መጠን መጨመሩን ያረጋግጡ, የሂደቱን ደረጃ 1 ይመልከቱ).

4.The eluent በስህተት ታክሏል.

የአስተያየት ጥቆማ፡ ከRNase-ነጻ ddH2O ወደ የመንጻቱ አምድ ሽፋን መሃል ይንጠባጠባል።

5.የፍፁም ኢታኖል ትክክለኛ መጠን ወደ Buffer PSL2 ወይም Buffer PRW2 አልተጨመረም።

የአስተያየት ጥቆማ፡ እባኮትን መመሪያዎቹን ይከተሉ፣ ትክክለኛውን የኢታኖል መጠን ወደ Buffer PSL2 እና Buffer PRW2 ያክሉ እና ኪቱ ከመጠቀሙ በፊት በደንብ ይቀላቀሉ።

6.የቲሹ ናሙና መጠን ተገቢ ያልሆነ ነው.

አስተያየት፡ በ 500 μl Buffer PSL1 50 mg ቲሹን ይጠቀሙ።በጣም ብዙ ቲሹን መጠቀም የተወጣውን አር ኤን ኤ መጠን ይቀንሳል እና የተገኘው አር ኤን ኤ ንፅህናም ይቀንሳል።የመጀመሪያው ናሙና መጠን በአንድ አር ኤን ኤ ማውጣት ከ 50 ሚሊ ግራም መብለጥ እንደሌለበት አበክረን እንመክራለን።

7. ተገቢ ያልሆነ የኤሌክትሮማግኔቲክ መጠን ወይም ያልተሟላ ኤሉሽን.

አስተያየት: የመንጻቱ አምድ የኤሌክትሮል መጠን 50-200 μl;የማብራሪያው ውጤት አጥጋቢ ካልሆነ ቀድሞ በማሞቅ RNase-Free ddH2O ለምሳሌ 5-10min ከተጨመረ በኋላ በክፍል ሙቀት ውስጥ ጊዜውን ለማራዘም ይመከራል.

8.የመንጻቱ አምድ በ BufferPRW2 ከታጠበ በኋላ የኢታኖል ቅሪት አለው።

አስተያየት፡ ባዶው ቱቦ ለ1 ደቂቃ ሴንትሪፉፍ ከተደረገ እና አሁንም በ Buffer PRW2 ውስጥ ከታጠበ በኋላ ኤታኖል የሚቀረው ከሆነ ባዶውን ቱቦ ሴንትሪፍግሽን ጊዜን ወደ 2 ደቂቃ ማሳደግ ወይም የተረፈውን ኢታኖል ሙሉ በሙሉ ለማስወገድ የንጽሕና አምድ በክፍል ሙቀት ውስጥ ለ 5 ደቂቃ ማስቀመጥ ትችላለህ።

9.The ኪት በስህተት ጥቅም ላይ ውሏል.

የአስተያየት ጥቆማ፡ ለዕፅዋት ናሙናዎች ፖሊፊኖሊክ ፖሊሳክካርዳይድ፣ እንደ ፕላንት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ኪት ያሉ የተለመዱ ኪት መጠቀም ጥሩ የአር ኤን ኤ ናሙናዎችን ላያገኝ ይችላል።በተለይ ለ polyphenolic polysaccharide የእፅዋት ናሙናዎች የተዘጋጀውን Plant Total RNA IsolationKit Plus እንድትጠቀም እንመክርሃለን።አር ኤን ኤን ከፖሊፊኖል እና ፖሊሶካካርዳይድ የእፅዋት ናሙናዎች ለማውጣት በልዩ ሁኔታ የተዘጋጀ ኪት።

OD260/OD280 ዋጋ ዝቅተኛ ነው።

አር ኤን ኤ ኤልኤልሽን ከddH2O ጋር እና ለስፔክትሮፎቶሜትር ንባቦች ጥቅም ላይ የዋለው ዝቅተኛ OD260/OD280 እሴቶችን ያስከትላል።በአንፃራዊነት ትክክለኛ OD260/OD280 እሴቶችን ለማግኘት 10 mM Tris-HCl፣ pH 7.5 (ከRNase-Free ddH2O ይልቅ) እንዲጠቀሙ እንመክራለን፣ በገጽ 19 ላይ ያለውን “RNA Concentration and Purification Assays” ይመልከቱ።

የተጣራው አር ኤን ኤ ተበላሽቷል

የተጣራ አር ኤን ኤ ጥራት እንደ የናሙና ጥበቃ፣ የ RNase ብክለት እና መጠቀሚያ ካሉ ነገሮች ጋር የተያያዘ ነው።

የተለመዱ መንስኤዎች ትንተና;

1.Tissue ናሙናዎች ከተሰበሰቡ በኋላ በጊዜ ውስጥ አልተቀመጡም.

ምክር፡ የቲሹ ናሙናዎች ከተሰበሰቡ በኋላ በጊዜ ውስጥ ጥቅም ላይ ካልዋሉ እባክዎን ወዲያውኑ በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ በዝቅተኛ የሙቀት መጠን ያከማቹ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ በፍጥነት ከቀዘቀዙ በኋላ ወደ -80 ° ሴ ያስተላልፉ ወይም ናሙናዎቹን ወዲያውኑ በአር ኤን ኤ stabilizer RNAlater መፍትሄ (የእንስሳት ናሙናዎች) ውስጥ ያስገቡ።ለአር ኤን ኤ ማውጣት፣ አዲስ የተሰበሰቡ የቲሹ ናሙናዎችን ለመጠቀም ይሞክሩ።

2.ተደጋጋሚ ቅዝቃዜ እና የቲሹ ናሙናዎችን ማቅለጥ.

አስተያየት፡ የቲሹ ናሙናዎችን በሚከማችበት ጊዜ ለማቆየት በትናንሽ ቁርጥራጭ መቁረጥ እና ሲጠቀሙበት የተወሰነውን ክፍል ማውጣቱ የተሻለው የናሙናዎቹ ተደጋጋሚ ቅዝቃዜና ማቅለጥ ምክንያት የሚከሰተውን የአር ኤን ኤ መበላሸት ለማስወገድ ነው።

3.RNase ቀዶ ጥገና ክፍል ውስጥ አስተዋውቋል ወይም የማይለብሱ ጓንቶች, ጭንብል, ወዘተ.

አስተያየት፡ የአር ኤን ኤ ማውጣት ሙከራዎች በተሻለ ሁኔታ የሚከናወኑት በተለየ የአር ኤን ኤ ኦፕሬሽኖች ሲሆን ከሙከራው በፊት የላብራቶሪ ጠረጴዛው ማጽዳት አለበት እና በሙከራው ወቅት የሚጣሉ ጓንቶች እና ጭምብሎች አር ኤን ኤ በከፍተኛ መጠን በማስተዋወቅ ምክንያት የሚፈጠረውን የአር ኤን ኤ መበላሸት ለማስወገድ ይጠቅማሉ።

4.The reagent ጥቅም ላይ በሚውልበት ጊዜ በ RNase ተበክሏል.

የአስተያየት ጥቆማ፡ ለተዛማጅ ሙከራዎች በአዲስ ተከታታይ የእጽዋት አጠቃላይ የአር ኤን ኤ ማስወጫ መሳሪያዎች ይተኩ።

5. ለአር ኤን ኤ ማኒፑል ጥቅም ላይ የሚውሉት የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች እና የ pipette ምክሮች በ RNase ተበክለዋል.

የአስተያየት ጥቆማ፡- በአርኤንኤ ማውጣት ላይ ጥቅም ላይ የሚውሉት የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች፣ pipette ምክሮች፣ pipettes፣ ወዘተ ሁሉም ከአር ናስ-ነጻ መሆናቸውን ያረጋግጡ።

መመሪያ መመሪያዎች፡-

የእፅዋት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ኪት ፕላስ መመሪያ መመሪያ