Foreasy Taq DNA Polymerase
የኪት መግለጫ፡-
◮ከፍተኛ ልዩነት፡ ኢንዛይሙ የተወሰነ የሙቅ ጅምር እንቅስቃሴ አለው።
◮ፈጣን ማጉላት፡ 10 ሰከንድ/ኪባ
◮በጣም የሚለምደዉ አብነት፡ የጂሲ ከፍተኛ እሴት፣ የተለያዩ ለማጉላት አስቸጋሪ የሆኑ የDNA አብነት በብቃት ለማጉላት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።
◮ጠንካራ ታማኝነት: ተራ Taq ኢንዛይም 6 ጊዜ.
◮ጠንካራ የሙቀት መረጋጋት: ለአንድ ሳምንት በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ማስቀመጥ እና ከ 90% በላይ እንቅስቃሴን ይይዛል.
መግለጫ
Foreasy Taq ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ በኢሼሪሺያ ኮሊ ኢንጂነሪንግ ባክቴሪያ ውስጥ በጂን ዳግም ውህደት ቴክኖሎጂ የተገለጸ አዲስ የታክ ኢንዛይም ነው።ኢንዛይሙ ራሱ የተወሰነ የሙቅ ጅምር እንቅስቃሴ አለው እና ለተለመደው PCR እና qPCR ሊያገለግል ይችላል።እሱ 5'→3' የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬዜሽን እንቅስቃሴ እና 5'→3' exonuclease እንቅስቃሴ አለው፣ ግን 3'→5' exonuclease እንቅስቃሴ የለውም።
Kit ክፍሎች
| አካል | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
| Foreasy Taq DNA Polymerase(5 U/μL) | 5000 U (1 ሚሊ) | 50 KU (10 ሚሊ) | 500 KU (100 ሚሊ) |
| 2× Taq Reaction Buffer | 25 ሚሊ × 5 | 250 ሚሊ × 5 | 500 ሚሊ × 25 |
ባህሪዎች እና ጥቅሞች
- ከፍተኛ ልዩነት፡- ኢንዛይሙ የተወሰነ ትኩስ ጅምር እንቅስቃሴ አለው።
- ፈጣን ማጉላት፡ 10 ሰከንድ/ኪባ
- በጣም የሚለምደዉ አብነት፡ የጂሲ ከፍተኛ እሴት፣ የተለያዩ ለማጉላት አስቸጋሪ የሆኑ የDNA አብነት በብቃት ለማጉላት ሊያገለግል ይችላል።
- ጠንካራ ታማኝነት: ተራ Taq ኢንዛይም 6 ጊዜ.
- ጠንካራ የሙቀት መረጋጋት: ለአንድ ሳምንት በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ማስቀመጥ እና ከ 90% በላይ እንቅስቃሴን ይይዛል.
Kit መተግበሪያ
የተለያዩ PCR/qPCR ስርዓቶች እና ቀጥተኛ PCR ስርዓቶች
የዲኤንኤ ቁርጥራጮች PCR ማጉላት
የዲኤንኤ መሰየሚያ
የዲኤንኤ ቅደም ተከተል
PCR A-ጭራ
ዩ ፍቺ
1U፡ 10 nmol ዲኦክሲኑክሊዮታይድ ወደ አሲድ የማይሟሟ ቁስ ለማካተት የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠን የነቃ የሳልሞንን ስፐርም ዲ ኤን ኤ እንደ አብነት/ፕሪመር ለ30 ደቂቃ በ74°ሴ።
ምላሽ ሁኔታ
| የሙቀት መጠን | ጊዜ | ዑደት |
| 37 ° ሴ | 5 ደቂቃ | 1 |
| 94°ሴ | 5 ደቂቃ | 1 |
| 94°ሴ | 10 ሰከንድ | 35 |
| 60 ° ሴ | 10 ሰከንድ | |
| 72 ° ሴ | 20 ሰከንድ በኪባ | |
| 72 ° ሴ | 2ደቂቃ | 1 |
ማከማቻ
-20 ± 5 ° ሴ ለ 2 ዓመታት ወይም በ -80 ° ሴ ለረጅም ጊዜ ማከማቻ.
ምንም የማጉላት ምልክቶች የሉም
1.በመሳሪያው ውስጥ ያለው ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ በአግባቡ ባልተቀመጠበት ወይም በማለቁ ምክንያት እንቅስቃሴውን ያጣል።
የውሳኔ ሃሳብ: የኪቱ ማከማቻ ሁኔታዎችን ያረጋግጡ;ተገቢውን የTaq DNA Polymerase መጠን ወደ PCR ስርዓት እንደገና ይጨምሩ ወይም ለተዛማጅ ሙከራዎች አዲስ ሪል ታይም PCR ኪት ይግዙ።
2.በዲኤንኤ አብነት ውስጥ ብዙ የ Taq DNA Polymerase አጋቾች አሉ።
አስተያየት፡ አብነቱን እንደገና ያጽዱ ወይም ጥቅም ላይ የዋለውን የአብነት መጠን ይቀንሱ።
3.The Mg2+ ትኩረት ተስማሚ አይደለም.
ምክር፡ እኛ የምናቀርበው የ2× Real PCR ድብልቅ የMg2+ ትኩረት 3.5ሚሜ ነው።ነገር ግን፣ ለአንዳንድ ልዩ ፕሪመርሮች እና አብነቶች፣ የMg2+ ትኩረት ከፍ ያለ ሊሆን ይችላል።ስለዚህ፣ የMg2+ ትኩረትን ለማመቻቸት MgCl2ን በቀጥታ ማከል ይችላሉ።ለማመቻቸት በእያንዳንዱ ጊዜ Mg2+ 0.5mM ለመጨመር ይመከራል.
4.የ PCR ማጉላት ሁኔታዎች ተስማሚ አይደሉም, እና የፕሪመር ቅደም ተከተል ወይም ትኩረት ተገቢ አይደለም.
የአስተያየት ጥቆማ: የፕሪመር ቅደም ተከተል ትክክለኛነት ያረጋግጡ እና ፕሪመር አልተበላሸም;የማጉላት ምልክቱ ጥሩ ካልሆነ ፣ የቀዘቀዘውን የሙቀት መጠን ዝቅ ለማድረግ እና የፕሪሚየር ትኩረትን በትክክል ለማስተካከል ይሞክሩ።
5.የአብነት መጠን በጣም ትንሽ ወይም በጣም ብዙ ነው.
ምክር፡ የአብነት መስመራዊ ቅልመት ቅልጥፍናን ያከናውኑ እና የአብነት ትኩረትን ለእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራ ከምርጥ PCR ውጤት ጋር ይምረጡ።
NTC በጣም ከፍተኛ የፍሎረሰንት ዋጋ አለው።
በሚሠራበት ጊዜ የተከሰተው 1.Reagent ብክለት.
ምክር፡ ለእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራዎች በአዲስ ሪጀንቶች ይተኩ።
2.Contamination PCR ምላሽ ሥርዓት ዝግጅት ወቅት ተከስቷል.
የውሳኔ ሃሳብ፡ በሚሰሩበት ጊዜ አስፈላጊ የመከላከያ እርምጃዎችን ይውሰዱ፡ ለምሳሌ፡ የላቲክ ጓንቶችን መልበስ፣ የ pipette ጫፍን በማጣሪያ በመጠቀም፣ ወዘተ.
3.The primers ተበላሽቷል, እና primers መካከል መበስበስ ያልሆኑ-ተኮር ማጉላት ያስከትላል.
የአስተያየት ጥቆማ፡ ፕሪመሮች የተበላሹ መሆናቸውን ለማወቅ SDS-PAGE ኤሌክትሮፊሸሮችን ይጠቀሙ እና ለእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራዎች በአዲስ ፕሪመር ይተኩ።
ፕሪመር ዲመር ወይም የተለየ ያልሆነ ማጉላት
1.The Mg2+ ትኩረት ተስማሚ አይደለም.
ምክር፡- የምናቀርበው የ2× Real PCR EasyTM ድብልቅ የMg2+ ትኩረት 3.5 ሚሜ ነው።ነገር ግን፣ ለአንዳንድ ልዩ ፕሪመርሮች እና አብነቶች፣ የMg2+ ትኩረት ከፍ ያለ ሊሆን ይችላል።ስለዚህ፣ የMg2+ ትኩረትን ለማመቻቸት MgCl2ን በቀጥታ ማከል ይችላሉ።ለማመቻቸት በእያንዳንዱ ጊዜ Mg2+ 0.5mM ለመጨመር ይመከራል.
2.የ PCR ማደንዘዣ ሙቀት በጣም ዝቅተኛ ነው.
የአስተያየት ጥቆማ፡ በእያንዳንዱ ጊዜ PCR የሚያጠፋውን የሙቀት መጠን በ1℃ ወይም 2℃ ይጨምሩ።
3.The PCR ምርት በጣም ረጅም ነው.
ምክር፡ የሪል ታይም PCR ምርት ርዝመት ከ100-150ቢፒ፣ ከ 500ቢቢ ያልበለጠ መሆን አለበት።
4.The primers ተበላሽቷል, እና primers መካከል መበስበስ የተወሰነ ማጉሊያ መልክ ይመራል.
የአስተያየት ጥቆማ፡ ፕሪመሮች የተበላሹ መሆናቸውን ለማወቅ SDS-PAGE ኤሌክትሮፊሸሮችን ይጠቀሙ እና ለእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራዎች በአዲስ ፕሪመር ይተኩ።
5.The PCR ስርዓት ተገቢ ያልሆነ ነው, ወይም ስርዓቱ በጣም ትንሽ ነው.
የአስተያየት ጥቆማ፡ የ PCR ምላሽ ስርዓት በጣም ትንሽ ስለሆነ የመለየት ትክክለኛነት እንዲቀንስ ያደርጋል።የሪል ታይም PCR ሙከራን እንደገና ለማስኬድ በቁጥር PCR መሳሪያ የተመከረውን የምላሽ ስርዓት መጠቀም ጥሩ ነው።
የቁጥር እሴቶች ደካማ ተደጋጋሚነት
1. መሳሪያው እየተበላሸ ነው።
የአስተያየት ጥቆማ፡ በእያንዳንዱ የ PCR መሳሪያ ቀዳዳ መካከል ስህተቶች ሊኖሩ ይችላሉ, በዚህም ምክንያት በሙቀት አስተዳደር ወይም በማወቅ ጊዜ ደካማ መራባት.እባክዎ በተዛማጅ መሳሪያ መመሪያ መሰረት ያረጋግጡ።
2.የናሙና ንጽሕና ጥሩ አይደለም.
ጠቃሚ ምክር፡- ንጹሕ ያልሆኑ ናሙናዎች የሙከራውን ደካማ ዳግም መባዛት ያስከትላሉ፣ ይህም የአብነት እና ፕሪመር ንፅህናን ይጨምራል።አብነቱን እንደገና ማደስ በጣም ጥሩ ነው, እና ፕሪመርዎቹ በ SDS-PAGE የተሻሉ ናቸው.
3.The PCR ስርዓት ዝግጅት እና የማከማቻ ጊዜ በጣም ረጅም ነው.
የአስተያየት ጥቆማ፡ ከተዘጋጁ በኋላ ወዲያውኑ ለ PCR ሙከራ የሪል ታይም PCR ስርዓት ይጠቀሙ እና ለረጅም ጊዜ አይተዉት.
4.የ PCR ማጉላት ሁኔታዎች ተስማሚ አይደሉም, እና የፕሪመር ቅደም ተከተል ወይም ትኩረት ተገቢ አይደለም.
የአስተያየት ጥቆማ: የፕሪመር ቅደም ተከተል ትክክለኛነት ያረጋግጡ እና ፕሪመር አልተበላሸም;የማጉላት ምልክቱ ጥሩ ካልሆነ ፣ የቀዘቀዘውን የሙቀት መጠን ዝቅ ለማድረግ እና የፕሪሚየር ትኩረትን በትክክል ለማስተካከል ይሞክሩ።
5.The PCR ስርዓት ተገቢ ያልሆነ ነው, ወይም ስርዓቱ በጣም ትንሽ ነው.
የአስተያየት ጥቆማ፡ የ PCR ምላሽ ስርዓት በጣም ትንሽ ስለሆነ የመለየት ትክክለኛነት እንዲቀንስ ያደርጋል።የሪል ታይም PCR ሙከራን እንደገና ለማስኬድ በቁጥር PCR መሳሪያ የተመከረውን የምላሽ ስርዓት መጠቀም ጥሩ ነው።
