Foreasy HS Taq DNA Polymerase
የኪት መግለጫ፡-
◮ከፍተኛ ልዩነት፡ ከፍተኛ የሙቀት ጅምር እንቅስቃሴ ያለው ኢንዛይም.
◮ፈጣን ማጉላት፡ 10 ሰከንድ/ኪባ
◮ከፍተኛ የአብነት ማስማማት-ከፍተኛን በብቃት ለማጉላት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።GCዋጋእናለማጉላት የተለያዩ አስቸጋሪ የዲኤንኤ አብነት።
◮ጠንካራ ታማኝነት: ታማኝነት 6 ጊዜ ነውof ተራ ታክ ኢንዛይም.
መግለጫ
Foreasy HS Taq DNA Polymerase በ Escherichia coli ኢንጂነሪንግ ባክቴሪያ በጂን ዳግም ማጣመር ቴክኖሎጂ የተገለጸ አዲስ የታክ ኢንዛይም ነው።ኢንዛይም በልዩ ሂደት ከታከመ በኋላ's እንቅስቃሴ የሙቀት ገቢር በፊት ታግዷል, በዚህም ዝቅተኛ የሙቀት ሁኔታዎች ውስጥ primers ወይም primer dimers ልዩ ያልሆኑ annealing ምክንያት ልዩ ያልሆነ ማጉላት የሚከለክል ነው.ይህ ምርት በጣም ለተለየ PCR React ተስማሚ ነው።ion፣ M ultiple x PCR ፣ ከፍተኛ የጂሲሲ ይዘት (> 60%) ፣ጋርሁለተኛ ደረጃ መዋቅርወይም ሌላጠንካራ የጀርባ ጂኖምicsማጉላት እና መጠነ-ሰፊ ጂኖምicsማጉላት መለየት.ኢንዛይሙ 5' → 3' የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዜዝ እንቅስቃሴ እና 5' → 3' የ exonuclease እንቅስቃሴ ግን 3' → 5' exonuclease እንቅስቃሴ የለውም።
Kit ክፍሎች
| አካል | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 5000 U (1 ሚሊ) | 50 KU (10 ሚሊ) | 500 KU (100 ሚሊ) |
| 2× Taq Reaction Buffer | 25 ሚሊ × 5 | 250 ሚሊ × 5 | 500 ሚሊ × 25 |
ባህሪዎች እና ጥቅሞች
- ከፍተኛ ልዩነት፡- ከፍተኛ የሙቀት ጅምር እንቅስቃሴ ያለው ኢንዛይም።
- ፈጣን ማጉላት: 10 ሰከንድ / ኪባ.
- ከፍተኛ አብነት መላመድ-ከፍተኛን በብቃት ለማጉላት ሊያገለግል ይችላል።GCዋጋእናለማጉላት የተለያዩ አስቸጋሪ የዲኤንኤ አብነት።
- ጠንካራ ታማኝነት: ታማኝነት 6 ጊዜ ነውof ተራ ታክ ኢንዛይም.
Kit መተግበሪያ
- የተለያዩ PCR/qPCR ስርዓት እና ቀጥተኛ PCR ስርዓት
- PCR አምፕሊፋይድ ዲ ኤን ኤ ቁርጥራጭ
- የዲኤንኤ ምልክት
- የዲኤንኤ ቅደም ተከተል
- PCR እና A ጅራት
የእንቅስቃሴ ፍቺ
1U: 10 nmol ለማካተት የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠንዲ.ኤን.ኤየነቃ የሳልሞንን ስፐርም ዲኤንኤ እንደ አብነት/ፕሪመር፣ 74°C፣ 30 ደቂቃ በመጠቀም ወደ አሲድ የማይሟሟ ቁስ።
ምላሽ ሁኔታ
| የሙቀት መጠን | ምላሽ ጊዜ | የዑደት ጊዜ |
| 37 ° ሴ | 5 ደቂቃ | 1 |
| 94°ሴ | 5 ደቂቃ | 1 |
| 94°ሴ | 10 ሰከንድ | 40 |
| 60 ° ሴ | 10 ሰከንድ |
ማስታወሻ:ለ 10 µL እና 20µL ስርዓቶች የሙቀት ዑደት ማሞቂያው የሙቀት ክዳን ከሌለው እኩል መጠን ያለው የማዕድን ዘይት ይጨምሩ።
የ PCR ምላሽ ሁኔታዎች እንደ አብነቶች፣ ፕሪመር እና የመሳሰሉት መዋቅራዊ ሁኔታዎች ይለያያሉ።በተወሰነው ኦፕሬሽን ውስጥ እንደ አብነት አይነት, የዒላማ ቁርጥራጭ መጠን, የአምፕሊፋይድ ቁርጥራጭ መሰረታዊ ቅደም ተከተል, እና የጂ.ሲ.ሲ ይዘት እና የፕሪሚየር ርዝመትን የመሳሰሉ ሁኔታዎችን, የሙቀት መጠን መጨመርን, የኤክስቴንሽን ጊዜን, ወዘተ የመሳሰሉትን ጨምሮ ጥሩውን ምላሽ ማዘጋጀት አስፈላጊ ነው.
ማከማቻ
-20 ± 5 ° ሴ ለ 2 ዓመታት ወይም በ -80 ° ሴ ለረጅም ጊዜ ማከማቻ.
ምንም የማጉላት ምልክቶች የሉም
1.በመሳሪያው ውስጥ ያለው ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ በአግባቡ ባልተቀመጠበት ወይም በማለቁ ምክንያት እንቅስቃሴውን ያጣል።
የውሳኔ ሃሳብ: የኪቱ ማከማቻ ሁኔታዎችን ያረጋግጡ;ተገቢውን የTaq DNA Polymerase መጠን ወደ PCR ስርዓት እንደገና ይጨምሩ ወይም ለተዛማጅ ሙከራዎች አዲስ ሪል ታይም PCR ኪት ይግዙ።
2.በዲኤንኤ አብነት ውስጥ ብዙ የ Taq DNA Polymerase አጋቾች አሉ።
አስተያየት፡ አብነቱን እንደገና ያጽዱ ወይም ጥቅም ላይ የዋለውን የአብነት መጠን ይቀንሱ።
3.The Mg2+ ትኩረት ተስማሚ አይደለም.
ምክር፡ እኛ የምናቀርበው የ2× Real PCR ድብልቅ የMg2+ ትኩረት 3.5ሚሜ ነው።ነገር ግን፣ ለአንዳንድ ልዩ ፕሪመርሮች እና አብነቶች፣ የMg2+ ትኩረት ከፍ ያለ ሊሆን ይችላል።ስለዚህ፣ የMg2+ ትኩረትን ለማመቻቸት MgCl2ን በቀጥታ ማከል ይችላሉ።ለማመቻቸት በእያንዳንዱ ጊዜ Mg2+ 0.5mM ለመጨመር ይመከራል.
4.የ PCR ማጉላት ሁኔታዎች ተስማሚ አይደሉም, እና የፕሪመር ቅደም ተከተል ወይም ትኩረት ተገቢ አይደለም.
የአስተያየት ጥቆማ: የፕሪመር ቅደም ተከተል ትክክለኛነት ያረጋግጡ እና ፕሪመር አልተበላሸም;የማጉላት ምልክቱ ጥሩ ካልሆነ ፣ የቀዘቀዘውን የሙቀት መጠን ዝቅ ለማድረግ እና የፕሪሚየር ትኩረትን በትክክል ለማስተካከል ይሞክሩ።
5.የአብነት መጠን በጣም ትንሽ ወይም በጣም ብዙ ነው.
ምክር፡ የአብነት መስመራዊ ቅልመት ቅልጥፍናን ያከናውኑ እና የአብነት ትኩረትን ለእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራ ከምርጥ PCR ውጤት ጋር ይምረጡ።
NTC በጣም ከፍተኛ የፍሎረሰንት ዋጋ አለው።
በሚሠራበት ጊዜ የተከሰተው 1.Reagent ብክለት.
ምክር፡ ለእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራዎች በአዲስ ሪጀንቶች ይተኩ።
2.Contamination PCR ምላሽ ሥርዓት ዝግጅት ወቅት ተከስቷል.
የውሳኔ ሃሳብ፡ በሚሰሩበት ጊዜ አስፈላጊ የመከላከያ እርምጃዎችን ይውሰዱ፡ ለምሳሌ፡ የላቲክ ጓንቶችን መልበስ፣ የ pipette ጫፍን በማጣሪያ በመጠቀም፣ ወዘተ.
3.The primers ተበላሽቷል, እና primers መካከል መበስበስ ያልሆኑ-ተኮር ማጉላት ያስከትላል.
የአስተያየት ጥቆማ፡ ፕሪመሮች የተበላሹ መሆናቸውን ለማወቅ SDS-PAGE ኤሌክትሮፊሸሮችን ይጠቀሙ እና ለእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራዎች በአዲስ ፕሪመር ይተኩ።
ፕሪመር ዲመር ወይም የተለየ ያልሆነ ማጉላት
1.The Mg2+ ትኩረት ተስማሚ አይደለም.
ምክር፡- የምናቀርበው የ2× Real PCR EasyTM ድብልቅ የMg2+ ትኩረት 3.5 ሚሜ ነው።ነገር ግን፣ ለአንዳንድ ልዩ ፕሪመርሮች እና አብነቶች፣ የMg2+ ትኩረት ከፍ ያለ ሊሆን ይችላል።ስለዚህ፣ የMg2+ ትኩረትን ለማመቻቸት MgCl2ን በቀጥታ ማከል ይችላሉ።ለማመቻቸት በእያንዳንዱ ጊዜ Mg2+ 0.5mM ለመጨመር ይመከራል.
2.የ PCR ማደንዘዣ ሙቀት በጣም ዝቅተኛ ነው.
የአስተያየት ጥቆማ፡ በእያንዳንዱ ጊዜ PCR የሚያጠፋውን የሙቀት መጠን በ1℃ ወይም 2℃ ይጨምሩ።
3.The PCR ምርት በጣም ረጅም ነው.
ምክር፡ የሪል ታይም PCR ምርት ርዝመት ከ100-150ቢፒ፣ ከ 500ቢቢ ያልበለጠ መሆን አለበት።
4.The primers ተበላሽቷል, እና primers መካከል መበስበስ የተወሰነ ማጉሊያ መልክ ይመራል.
የአስተያየት ጥቆማ፡ ፕሪመሮች የተበላሹ መሆናቸውን ለማወቅ SDS-PAGE ኤሌክትሮፊሸሮችን ይጠቀሙ እና ለእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራዎች በአዲስ ፕሪመር ይተኩ።
5.The PCR ስርዓት ተገቢ ያልሆነ ነው, ወይም ስርዓቱ በጣም ትንሽ ነው.
የአስተያየት ጥቆማ፡ የ PCR ምላሽ ስርዓት በጣም ትንሽ ስለሆነ የመለየት ትክክለኛነት እንዲቀንስ ያደርጋል።የሪል ታይም PCR ሙከራን እንደገና ለማስኬድ በቁጥር PCR መሳሪያ የተመከረውን የምላሽ ስርዓት መጠቀም ጥሩ ነው።
የቁጥር እሴቶች ደካማ ተደጋጋሚነት
1. መሳሪያው እየተበላሸ ነው።
የአስተያየት ጥቆማ፡ በእያንዳንዱ የ PCR መሳሪያ ቀዳዳ መካከል ስህተቶች ሊኖሩ ይችላሉ, በዚህም ምክንያት በሙቀት አስተዳደር ወይም በማወቅ ጊዜ ደካማ መራባት.እባክዎ በተዛማጅ መሳሪያ መመሪያ መሰረት ያረጋግጡ።
2.የናሙና ንጽሕና ጥሩ አይደለም.
ጠቃሚ ምክር፡- ንጹሕ ያልሆኑ ናሙናዎች የሙከራውን ደካማ ዳግም መባዛት ያስከትላሉ፣ ይህም የአብነት እና ፕሪመር ንፅህናን ይጨምራል።አብነቱን እንደገና ማደስ በጣም ጥሩ ነው, እና ፕሪመርዎቹ በ SDS-PAGE የተሻሉ ናቸው.
3.The PCR ስርዓት ዝግጅት እና የማከማቻ ጊዜ በጣም ረጅም ነው.
የአስተያየት ጥቆማ፡ ከተዘጋጁ በኋላ ወዲያውኑ ለ PCR ሙከራ የሪል ታይም PCR ስርዓት ይጠቀሙ እና ለረጅም ጊዜ አይተዉት.
4.የ PCR ማጉላት ሁኔታዎች ተስማሚ አይደሉም, እና የፕሪመር ቅደም ተከተል ወይም ትኩረት ተገቢ አይደለም.
የአስተያየት ጥቆማ: የፕሪመር ቅደም ተከተል ትክክለኛነት ያረጋግጡ እና ፕሪመር አልተበላሸም;የማጉላት ምልክቱ ጥሩ ካልሆነ ፣ የቀዘቀዘውን የሙቀት መጠን ዝቅ ለማድረግ እና የፕሪሚየር ትኩረትን በትክክል ለማስተካከል ይሞክሩ።
5.The PCR ስርዓት ተገቢ ያልሆነ ነው, ወይም ስርዓቱ በጣም ትንሽ ነው.
የአስተያየት ጥቆማ፡ የ PCR ምላሽ ስርዓት በጣም ትንሽ ስለሆነ የመለየት ትክክለኛነት እንዲቀንስ ያደርጋል።የሪል ታይም PCR ሙከራን እንደገና ለማስኬድ በቁጥር PCR መሳሪያ የተመከረውን የምላሽ ስርዓት መጠቀም ጥሩ ነው።
