የመጀመሪያ ደረጃ ንድፍ መሠረት (99% ችግሮች ሊፈቱ ይችላሉ)
1. የፕሪመር ርዝመት፡ የመማሪያ መፅሃፉ 15-30ቢፒ ይፈልጋል፣ ብዙ ጊዜ ወደ 20ቢ.ትክክለኛው ሁኔታ ልዩነቱን ለማረጋገጥ 18-24bp መሆን የተሻለ ነው, ነገር ግን ረዘም ላለ ጊዜ የተሻለው በጣም ረጅም ፕሪመር ልዩነቱን ይቀንሳል እና ምርቱን ይቀንሳል.
2. የፕሪመር ማጉላት ስፔን: 200-500bp ተገቢ ነው, እና ቁርጥራጩ በተወሰኑ ሁኔታዎች ወደ 10 ኪ.ባ ሊሰፋ ይችላል.
3. የፕሪመር መሰረት፡ የG+C ይዘት ከ40-60% መሆን አለበት፣ በጣም ትንሽ የG+C ማጉላት ውጤት ጥሩ አይደለም፣ G+C በጣም ብዙ ልዩ ያልሆኑ ባንዶች ለመታየት ቀላል ነው።ATGC በተሻለ በዘፈቀደ የሚሰራጩ ሲሆን ከ5 በላይ የፑሪን ወይም ፒሪሚዲን ኑክሊዮታይድ ስብስቦችን በማስወገድ ነው።ባለብዙ-ጂሲ ለ 5′ መጨረሻ እና መካከለኛ ቅደም ተከተሎች መረጋጋትን ለመጨመር፣ ሀብታም GCን በ3′ መጨረሻ ያስወግዱ፣ ላለፉት 3 መሠረቶች ጂሲ የለም፣ ወይም ላለፉት 5 መሠረቶች 3 ጂሲ የለም።
4. በፕሪመር ውስጥ የሁለተኛ ደረጃ መዋቅርን ያስወግዱ እና በሁለት ፕሪመር መካከል ያለውን ማሟያ ያስወግዱ, በተለይም በ 3 'መጨረሻ ላይ ማሟያ, አለበለዚያ ፕሪመር ዲመር ይሠራል እና ልዩ ያልሆኑ አምፕሊፋይድ ባንዶች ይፈጠራሉ.
5. ባልተጣመሩ የተርሚናል መሰረቶች ምክንያት PCR አለመሳካትን ለማስወገድ በ 3 'የፕሪመር መጨረሻ ላይ በተለይም የመጨረሻው እና የመጨረሻዎቹ መሠረቶች በጥብቅ የተጣመሩ መሆን አለባቸው.
6. ፕራይመሮች ከተገቢው የመንጠፊያ ቦታዎች ጋር ሊጨመሩ ወይም ሊጨመሩ ይችላሉ, እና የተጠናከረው የዒላማ ቅደም ተከተል በተገቢው ሁኔታ ተስማሚ የመለያያ ቦታዎች ሊኖራቸው ይገባል, ይህም ለክንጥ ትንተና ወይም ሞለኪውላር ክሎኒንግ በጣም ጠቃሚ ነው.
7. የፕሪመርስ ልዩነት፡- ፕሪመርሮች በኑክሊክ አሲድ ተከታታይ የውሂብ ጎታ ውስጥ ካሉ ሌሎች ቅደም ተከተሎች ጋር ግልጽ የሆነ ግብረ-ሰዶማዊነት ሊኖራቸው አይገባም።
8. ሶፍትዌሮችን መጠቀም ይማሩ፡ PP5፣ Oligo6፣ DNAstar፣ Vector NTI፣ primer3 (ይህ የመስመር ላይ ንድፍ በተሻለ ሁኔታ ይሰራል)።
ከላይ ያለው ይዘት ቢያንስ 99% የፕሪመር ዲዛይን ችግሮችን መፍታት ይችላል።
የፕሪመር ንድፍ ዝርዝሮችን ይቆጣጠሩ
1. የቀዳማዊ ርዝመት
አጠቃላይ የፕሪመር ርዝመት 18-30 መሠረቶች ነው.በአጠቃላይ, የፕሪሚየር የሙቀት መጠኑን የሚወስነው በጣም አስፈላጊው ነገር የመነሻው ርዝመት ነው.የፕሪመር የሙቀት መጠኑ በአጠቃላይ ይመረጣል (Tm value -5℃)፣ እና አንዳንዶቹ በቀጥታ የቲኤም እሴትን ይጠቀማሉ።የሚከተሉት ቀመሮች የፕሪሚየርስ የሙቀት መጠንን በግምት ለማስላት ጥቅም ላይ ሊውሉ ይችላሉ.
የፕሪመር ርዝመት ከ20ቢ/ሴ በታች ሲሆን፡ [4(G+C)+2(A+T)]-5℃
የፕሪመር ርዝመት ከ20ቢ/ፒ ሲበልጥ፡ 62.3℃+0.41℃(%GC)-500/ርዝመት-5℃
በተጨማሪም, ብዙ ሶፍትዌሮች የጨረር ሙቀትን ለማስላት ጥቅም ላይ ሊውሉ ይችላሉ, የስሌት መርህ የተለየ ይሆናል, ስለዚህ አንዳንድ ጊዜ የተሰላው እሴት ትንሽ ክፍተት ሊኖረው ይችላል.የ PCR ምላሾችን ለማመቻቸት ከ 54 ℃ ያላነሰ የሙቀት መጠንን የሚያረጋግጡ አጫጭር ፕሪመርሮች ለተሻለ ቅልጥፍና እና ልዩነት ጥቅም ላይ ይውላሉ።
በአጠቃላይ፣ ለእያንዳንዱ ተጨማሪ ኑክሊዮታይድ በአራት እጥፍ ይጨምራል፣ ስለዚህ ለአብዛኞቹ አፕሊኬሽኖች ዝቅተኛው የፕሪመር ርዝመት 18 ኑክሊዮታይድ ነው።የፕሪመር ርዝመት የላይኛው ገደብ በጣም አስፈላጊ አይደለም, በዋናነት ከምላሽ ቅልጥፍና ጋር የተያያዘ.በኤንትሮፒ ምክንያት፣ ፕሪመር (ፕሪመር) በቆየ ቁጥር፣ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴን ለማሰር የተረጋጋ ድርብ-ፈትል አብነት ለመፍጠር ወደ ኢላማው ዲ ኤን ኤ ለማያያዝ የሚፈሰው ፍጥነት ይቀንሳል።
ፕሪምሮችን ለመንደፍ ሶፍትዌሮችን በሚጠቀሙበት ጊዜ የፕሪመርሮች ርዝመት በተራው በቲኤም እሴት ሊወሰን ይችላል ፣በተለይ የፍሎረሰንስ መጠናዊ PCR ፣ TM=60℃ ወይም ከዚያ በላይ ቁጥጥር ሊደረግበት ይገባል።
2.GC ይዘት
በአጠቃላይ የG+C ይዘት በፕሪመር ቅደም ተከተሎች 40% ~ 60% ነው፣ እና የጂሲ ይዘት እና የቲኤም እሴት ጥንድ ፕሪመር የተቀናጀ መሆን አለበት።ፕሪመር ከባድ የጂሲ ወይም የ AT ዝንባሌ ካለው፣ ተገቢው መጠን A፣ T ወይም G እና C ጅራት ወደ ፕሪመር 5 'መጨረሻ ሊጨመር ይችላል።
3. የሚያበሳጭ ሙቀት
የማደንዘዣው የሙቀት መጠን ሰንሰለት ከሌለው የሙቀት መጠን በ 5 ℃ ያነሰ መሆን አለበት።የፕሪሚየር መሠረቶች ቁጥር ትንሽ ከሆነ, የአነቃቂው የሙቀት መጠን በትክክል ሊጨምር ይችላል, ይህም የ PCR ልዩነትን ይጨምራል.የመሠረቶቹ ብዛት ትልቅ ከሆነ, የማስታገሻውን የሙቀት መጠን በትክክል መቀነስ ይቻላል.በ4℃ ~ 6℃ ጥንድ ፕሪመር መካከል ያለው የአናሲንግ የሙቀት ልዩነት የ PCR ምርትን አይጎዳውም ፣ ግን በሐሳብ ደረጃ የአንድ ጥንድ ፕሪመር የሙቀት መጠኑ ተመሳሳይ ነው ፣ ይህም በ 55 ℃ ~ 75 ℃ መካከል ሊለያይ ይችላል።
4. የማጉላት አብነት ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር አካባቢን ያስወግዱ
የተጨመረው ቁርጥራጭን በሚመርጡበት ጊዜ የአብነት ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ክልልን ማስወገድ የተሻለ ነው.የዓላማው ክፍልፋይ የተረጋጋ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር በሚመለከታቸው የኮምፒዩተር ሶፍትዌር ሊተነብይ እና ሊገመት ይችላል፣ ይህም ለአብነት ምርጫ አጋዥ ነው።የሙከራ ውጤቶቹ እንደሚያሳዩት የማስፋፊያ ስራው ብዙ ጊዜ የማይሳካ ሲሆን የሚስፋፋው የክልሉ ነፃ ኢነርጂ (△G) ከ58.6lkJ/mol በታች ነው።
5. ከዒላማው ዲኤንኤ ጋር አለመመጣጠን
የተስፋፋው የዲ ኤን ኤ ቅደም ተከተል ትልቅ ሲሆን ፕሪመር ከብዙ የዲ ኤን ኤ ክፍሎች ጋር ሊተሳሰር ይችላል፣ በዚህም በውጤቱ ውስጥ ብዙ ባንዶች ይታያሉ።በዚህ ጊዜ የBLAST ሶፍትዌር ሙከራን፣ ድህረ ገጽን መጠቀም አስፈላጊ ነው፡-http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/.ሁለት ቅደም ተከተሎችን አሰልፍ (bl2seq) ምረጥ።
የፕሪመር ቅደም ተከተሎችን ወደ ዞን 1 እና የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎችን ወደ ዞን 2 መለጠፍ ተለዋጭ ነው፣ እና BLAST ተጨማሪ፣ አንቲሴንስ እና ሌሎች እድሎችን ያሰላል፣ ስለዚህ ተጠቃሚዎች ሁለቱም ሰንሰለቶች የስሜት ሰንሰለቶች መሆናቸውን ማወቅ አያስፈልጋቸውም።እንዲሁም በመረጃ ቋቱ ውስጥ የተከታታይ GI ቁጥርን ካወቁ የጂአይአይ ቁጥሩን ማስገባት ይችላሉ።በመጨረሻም ፕሪመር በዒላማው ዲ ኤን ኤ ውስጥ ብዙ ተመሳሳይነት ያላቸው ቦታዎች እንዳሉት ለማየት አሰልፍ በ 3 ላይ ጠቅ ያድርጉ።
6. ፕሪመር ተርሚናል
የፕሪመር 3 'መጨረሻ ማራዘሚያው የሚጀምርበት ቦታ ነው, ስለዚህ አለመግባባቶች እዚያ እንዳይጀምሩ መከላከል አስፈላጊ ነው.የ 3 'መጨረሻው ከ 3 ተከታታይ G ወይም C በላይ መሆን የለበትም, ምክንያቱም ይህ በ G+C ማበልጸጊያ ቅደም ተከተል ክልል ውስጥ ፕሪመር በስህተት እንዲነሳሳ ያደርገዋል.የ 3 'መጨረሻ ምንም ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር መፍጠር አይችልም, ልዩ PCR (AS-PCR) ምላሽ በስተቀር, የ primer 3′ መጨረሻ ሊዛመድ አይችልም.ለምሳሌ, ኢንኮዲንግ ክልሉ ከተስፋፋ, 3 'የፕሪመር መጨረሻ በሶስተኛው የ coden ቦታ ላይ መቋረጥ የለበትም, ምክንያቱም የሶስተኛው የኮዶን አቀማመጥ ለመበስበስ የተጋለጠ ነው, ይህም የማጉላትን ልዩነት እና ውጤታማነት ይነካል.አባሪ ፕሪመርን በሚጠቀሙበት ጊዜ የኮዶን አጠቃቀም ሰንጠረዥን ይመልከቱ፣ ለባዮሎጂያዊ ምርጫ ትኩረት ይስጡ፣ በ3′ መጨረሻ ላይ የማያያዝ ፕሪመርን አይጠቀሙ እና ከፍተኛ መጠን ያለው የፕሪምሮች (1uM-3uM) ይጠቀሙ።
7. የፕሪሚየርስ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር
ቀዳዮቹ እራሳቸው ተጨማሪ ቅደም ተከተሎች ሊኖራቸው አይገባም, አለበለዚያ ቀዳዮቹ እራሳቸው ወደ የፀጉር አሠራሮች ይለጠፋሉ, እና ይህ የሁለተኛ ደረጃ መዋቅር በጠንካራ መሰናክል ምክንያት የፕሪም እና የአብነት ትስስር ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል.ሰው ሰራሽ ፍርድ ጥቅም ላይ ከዋለ፣ የፕሪምሮች ቀጣይነት ያለው ተጨማሪ መሠረቶች እራሳቸው ከ 3ቢፒ በላይ መሆን የለባቸውም።በሁለቱ primers መካከል ምንም ማሟያ መሆን የለበትም, በተለይ 3 'ፍጻሜ ያለውን ማሟያ መደራረብ primer dimers ምስረታ ለመከላከል መወገድ አለበት.በአጠቃላይ ከ 4 በላይ ተከታታይ መሠረቶች ግብረ-ሰዶማዊነት ወይም ማሟያነት በጥንዶች መካከል መሆን የለበትም.
8. ማርከሮችን ወይም ሎሲዎችን ይጨምሩ
የ 5' መጨረሻ በማጉላት ስፔሲፊኬሽን ላይ ትንሽ ተጽእኖ የለውም እና ስለዚህ የማጉላት ልዩነቱን ሳይነካ ሊሻሻል ይችላል።የፕሪመር 5 'ፍጻሜ ማሻሻያ ተካቷል: የኢንዛይም ገደብ ቦታ መጨመር;የተሰየመ ባዮቲን, ፍሎረሰንስ, ዲጎክሲን, Eu3+, ወዘተ. የፕሮቲን ትስስር የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎችን ማስተዋወቅ;የሚውቴሽን ጣቢያዎችን ማስተዋወቅ፣ ሚውቴሽን ቅደም ተከተሎችን ማስገባት እና መቅረት እና የአስተዋዋቂ ቅደም ተከተሎችን ማስተዋወቅ፣ ወዘተ ተጨማሪ መሰረቶች ብዙ ወይም ያነሰ የማጉላት ቅልጥፍና ላይ ተጽእኖ ያሳድራሉ እና የፕሪመር ዲመር የመፍጠር እድልን ይጨምራሉ፣ ነገር ግን ለቀጣዩ ደረጃ አንዳንድ ቅናሾች መደረግ አለባቸው።በዒላማው ቅደም ተከተል ላይ የሌሉ ተጨማሪ ቅደም ተከተሎች፣ እንደ መገደብ ጣቢያዎች እና የማስተዋወቂያ ቅደም ተከተሎች፣ ልዩነቱን ሳይነኩ ወደ ፕሪመር 5′ መጨረሻ ሊጨመሩ ይችላሉ።እነዚህ ቅደም ተከተሎች በፕሪመር ቲም ዋጋዎች ስሌት ውስጥ አልተካተቱም, ነገር ግን ለተጨማሪ እና ውስጣዊ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር መሞከር አለባቸው.
9. ንዑስ ክሎኖች
አብዛኛውን ጊዜ PCR የቅድሚያ ክሎኒንግ ብቻ ነው, ከዚያም የዒላማውን ክፍልፋይ ወደ ተለያዩ ቬክተሮች ማሰር ያስፈልገናል, ስለዚህ በ PCR ደረጃ ላይ ለሚቀጥለው ቀዶ ጥገና ተጨማሪ መሰረቶችን ማዘጋጀት አለብን.
ለንዑስ ክሎኒንግ የተነደፉ አንዳንድ ቅደም ተከተሎች ከዚህ በታች ተጠቃለዋል.
የ endonuclease ገደብ ቦታ ተጨምሯል
የኢንዛይም መገደብ ጣቢያዎችን ማከል PCR ምርቶችን ለመከለል በብዛት ጥቅም ላይ የሚውለው ዘዴ ነው።በአጠቃላይ, የመፍቻ ቦታው ስድስት መሠረቶች ነው, ከ 5 'መጨረሻ በተጨማሪ የ 2 ~ 3 መከላከያ መሰረቶችን መጨመር ያስፈልጋል.ይሁን እንጂ በተለያዩ ኢንዛይሞች የሚፈለጉ የመከላከያ መሠረቶች ቁጥር የተለየ ነው.ለምሳሌ፣ SalⅠ ምንም መከላከያ መሰረት አይፈልግም፣ EcoRⅤ 1 መከላከያ መሰረት ይፈልጋል፣ ኖትⅠ 2 መከላከያ መሰረቶችን ይፈልጋል፣ እና ሂንድ Ⅲ 3 መከላከያ መሰረቶችን ይፈልጋል።
LIC ጅራቱን ይጨምራል
የኤልአይሲ ሙሉ ስም Ligation-Independent ክሎኒንግ ሲሆን በናቮገን በተለይ ለፒኢቲ ቬክተር ክፍል የፈለሰፈው የክሎኒንግ ዘዴ ነው።በኤልአይሲ ዘዴ የሚዘጋጀው የፔኢቲ ተሸካሚ ያልተሟሉ 12-15 ቤዝ ነጠላ ክር የሚጣበቁ ጫፎች ያሉት ሲሆን ይህም በዒላማው የማስገባት ክፍል ላይ ያሉትን ተለጣፊ ጫፎች ያሟላል።ለማጉላት ዓላማ፣ የገባው ቁራጭ ፕሪመር 5′ ቅደም ተከተል የኤልአይሲ ቬክተርን ማሟላት አለበት።የ 3′ 5′ የ T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ እንቅስቃሴ ከአጭር ጊዜ በኋላ በገባው ቁርጥራጭ ላይ አንድ ነጠላ ክር የሚያጣብቅ ጫፍ ሊፈጥር ይችላል።ምርቱ ሊፈጠር የሚችለው ከተዘጋጀው መጨመሪያ ቁርጥራጭ እና ቬክተር መካከል ካለው የጋራ መቆራረጥ ብቻ ነው, ይህ ዘዴ በጣም ፈጣን እና ቀልጣፋ ነው, እና ክሎኒንግ ይመራል.
ተመርቷል TA clone ጅራትን ይጨምሩ
TA ክሎኒንግ ክፍተቱን ወደ ቬክተር ማነጣጠር አልቻለም፣ስለዚህ በኋላ ኢንቫይትሮጅን ክሎኒንግን ሊያነጣጥር የሚችል ቬክተር አስተዋወቀ፣ይህም በአንድ ጫፍ አራት ታዋቂ GTGGS ይዟል።ስለዚህ, በ PCR ፕሪመር ንድፍ ውስጥ, ተጨማሪ ቅደም ተከተሎች በዚሁ መሰረት መጨመር አለባቸው, ስለዚህም ቁርጥራጮች "ተኮር" ሊሆኑ ይችላሉ.
በጊዜ አጭር ከሆንክ ጂንን ከቬክተር ጋር በማጣመር ቀጥተኛ ውህደትን መሞከር ትችላለህ ይህም በሙዚኩላርስቶች ውስጥ ET ጂን ውህድ የምንለው ነው።
D. In-Fusion ክሎኒንግ ዘዴ
ምንም ligase አያስፈልግም, ረጅም ምላሽ አያስፈልግም.በሁለቱም የሊኒየር ቬክተር ጫፎች ላይ አንድ ቅደም ተከተል እስካልተዋወቀ ድረስ በፕሪምየርስ ንድፍ ውስጥ, የ PCR ምርት እና የሊኒየር ቬክተር ወደ ኢን-ፊውዥን ኢንዛይም መፍትሄ (ቢኤስኤ) ውስጥ ተጨምረዋል እና ለግማሽ ሰዓት በቤት ሙቀት ውስጥ ይቀመጣሉ, ለውጡም ሊከናወን ይችላል.ይህ ዘዴ በተለይ ለትልቅ መጠን መለዋወጥ ተስማሚ ነው.
10. ፕሪመርን ያዋህዱ
አንዳንድ ጊዜ ስለ ፕሪመር ዲዛይን የሚታወቀው የተወሰነ ቅደም ተከተል ያለው መረጃ ብቻ ነው።ለምሳሌ, የአሚኖ አሲድ ቅደም ተከተል ብቻ የሚታወቅ ከሆነ, የማዋሃድ ፕሪመር ሊዘጋጅ ይችላል.የውህደት ፕሪመር ነጠላ አሚኖ አሲድን የሚያመለክቱ ሁሉንም የተለያዩ መሰረታዊ እድሎችን የሚወክሉ የተለያዩ ቅደም ተከተሎች ድብልቅ ነው።ልዩነትን ለመጨመር በተለያዩ ፍጥረታት የመሠረት አጠቃቀም ምርጫዎች መሰረት መጨመርን ለመቀነስ የ coden አጠቃቀም ሰንጠረዥን መመልከት ይችላሉ።የፕሪሚየር ሙቀት መጠንን ለመቀነስ Hypoxanthine ከሁሉም መሠረቶች ጋር ሊጣመር ይችላል.የተጨመሩትን መሰረቶች በፕሪሚየር 3′ መጨረሻ ላይ አይጠቀሙ ምክንያቱም የመጨረሻዎቹን 3 መሠረቶች በ 3′ መጨረሻ ላይ መሰረዝ PCRን በተሳሳተ ቦታ ላይ ለመጀመር በቂ ነው።ከፍተኛ የፕሪመር ውህዶች (1μM እስከ 3μM) ጥቅም ላይ ይውላሉ ምክንያቱም በብዙ የማያያዝ ድብልቆች ውስጥ ያሉ ፕሪመርሮች ለታላሚው አብነት የተወሰኑ አይደሉም።
PCR ጥሬ ዕቃዎችመቆጣጠር
1. ዋና መጠን
የእያንዳንዱ ፕሪመር መጠን 0.1 ~ 1umol ወይም 10 ~ 100pmol ነው።የሚፈለገውን ውጤት በትንሹ የፕሪመር መጠን ማምረት የተሻለ ነው.ከፍተኛ መጠን ያለው የፕሪመር መጠን አለመመጣጠን እና ልዩ ያልሆነ ማጉላትን ያስከትላል፣ እና በፕሪመር መካከል ዲመሮች የመፍጠር እድልን ይጨምራል።
2. ዋና ትኩረት
የፕሪመርስ ትኩረት ልዩነቱን ይነካል.በጣም ጥሩው የፕሪመር ትኩረት በአጠቃላይ በ0.1 እና 0.5μM መካከል ነው።ከፍተኛ የፕሪመር ክምችት ልዩ ያልሆኑ ምርቶችን ወደ ማጉላት ይመራል።
3. የፕሪመር ሙቀት መጨመር
ለፕሪመርሮች ሌላ አስፈላጊ መለኪያ የሙቀት ሙቀት (ቲኤም) ነው.ይህ የሙቀት መጠኑ 50% ፕሪመር እና ተጨማሪ ቅደም ተከተሎች እንደ ድርብ-ሽቦ የዲ ኤን ኤ ሞለኪውሎች ሲወከሉ ነው።PCR የማደንዘዣ ሙቀትን ለማዘጋጀት Tm ያስፈልጋል።በሐሳብ ደረጃ፣ የማደንዘዣው የሙቀት መጠን ከታቀደው ቅደም ተከተል ጋር ውጤታማ በሆነ መንገድ የፕሪመርሮችን ማደንዘዣ ለማረጋገጥ በቂ ዝቅተኛ ነው፣ ነገር ግን ልዩ ያልሆነ ትስስርን ለመቀነስ በቂ ነው።ምክንያታዊ የማስታገሻ ሙቀት ከ 55 ℃ እስከ 70 ℃።የማደንዘዣ ሙቀት በአጠቃላይ ከቲኤም ፕሪመር በ 5 ℃ ዝቅ ያለ ነው።
Tm ን ለማቀናበር ብዙ ቀመሮች አሉ ፣ እነሱም እንደ ተጠቀመው ቀመር እና እንደ ፕሪመር ቅደም ተከተል በጣም ይለያያሉ።አብዛኛዎቹ ቀመሮች የተገመተውን የቲኤም ዋጋ ስለሚሰጡ፣ ሁሉም የሚያረዝሙ ሙቀቶች መነሻ ነጥብ ብቻ ናቸው።ልዩነቱን ቀስ በቀስ የሚያደክም የሙቀት መጠንን የሚጨምሩትን በርካታ ግብረመልሶችን በመተንተን ማሻሻል ይቻላል።ከተገመተው Tm-5℃ በታች ይጀምሩ እና ቀስ በቀስ የሚያስጨንቀውን የሙቀት መጠን በ2℃ ጭማሪ ይጨምሩ።ከፍተኛ የማደንዘዣ ሙቀት የፕሪመር ዲመሮች እና ልዩ ያልሆኑ ምርቶች መፈጠርን ይቀንሳል.ለበለጠ ውጤት ሁለቱ ፕሪምሮች ግምታዊ የቲኤም እሴቶች ሊኖራቸው ይገባል።የፕሪመር ጥንዶች የቲኤም ልዩነት ከ 5 ℃ በላይ ከሆነ ፣ ፕሪመርዎቹ በዑደት ውስጥ ዝቅተኛ የማደንዘዣ ሙቀትን በመጠቀም ጉልህ የሆነ የውሸት ጅምር ያሳያሉ።ሁለቱ ፕሪመርሮች Tm የሚለያዩ ከሆነ፣ የሚያስከፋውን የሙቀት መጠን ከዝቅተኛው Tm ወደ 5 ℃ ያዘጋጁ።በአማራጭ፣ ስፔሲፊኬሽንን ለመጨመር አምስት ዑደቶችን በመጀመሪያ ለከፍተኛ Tm ተብሎ በተዘጋጀ የሙቀት መጠን መከናወን ይቻላል፣ የተቀሩት ዑደቶች ደግሞ ለዝቅተኛ Tm በተሰራ የሙቀት መጠን።ይህ የመድረሻ አብነት ከፊል ቅጂ ጥብቅ በሆኑ ሁኔታዎች ውስጥ ለማግኘት ያስችላል።
4. ዋናው ንፅህና እና መረጋጋት
ለአብዛኛዎቹ PCR አፕሊኬሽኖች የብጁ ፕሪመር መደበኛ ንፅህና በቂ ነው።የቤንዞይል እና የ isobutylyl ቡድኖችን በማጽዳት ማስወገድ በጣም ትንሽ ስለሆነ በ PCR ላይ ጣልቃ አይገባም.አንዳንድ አፕሊኬሽኖች በማዋሃድ ሂደት ውስጥ ማንኛቸውም ሙሉ-ርዝመት ያልሆኑ ቅደም ተከተሎችን ለማስወገድ መንጻት ያስፈልጋቸዋል።እነዚህ የተቆራረጡ ቅደም ተከተሎች የሚከሰቱት የዲኤንኤ ውህደት ኬሚስትሪ ውጤታማነት 100% ስላልሆነ ነው.ይህ ተደጋጋሚ ኬሚካላዊ ግብረመልሶችን የሚጠቀም ክብ ሂደት ሲሆን እያንዳንዱ መሰረት ሲጨመር ዲኤንኤ ከ3′ እስከ 5′።በሁለቱም ዑደት ውስጥ ሊወድቅ ይችላል.ረዣዥም ፕሪመርስ, በተለይም ከ 50 መሰረቶች በላይ, ከፍተኛ መጠን ያለው የተቆራረጡ ቅደም ተከተሎች አሏቸው እና ማጽዳት ሊፈልጉ ይችላሉ.
የፕሪመርስ ምርት በሰው ሰራሽ ኬሚስትሪ እና የመንፃት ዘዴ ውጤታማነት ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል።እንደ ሳይቶሎጂ እና ሼንጎንግ ያሉ የባዮፋርማሱቲካል ኩባንያዎች ሁሉም የ oligonucleoside አጠቃላይ ምርትን ለማረጋገጥ አነስተኛውን የኦዲ አሃድ ይጠቀማሉ።ብጁ ፕሪመርሮች በደረቅ ዱቄት መልክ ይላካሉ.የመጨረሻው ትኩረት 100μM እንዲሆን በ TE ውስጥ ያሉትን ፕሪሚኖች እንደገና መፍታት ጥሩ ነው.TE ከተመረዘ ውሃ የተሻለ ነው ምክንያቱም የውሃው ፒኤች ብዙውን ጊዜ አሲዳማ ስለሆነ እና ኦሊጎኑክሊዮሲዶችን ሃይድሮላይዜሽን ያስከትላል።
የፕሪመርሮች መረጋጋት በማከማቻ ሁኔታዎች ላይ የተመሰረተ ነው.ደረቅ ዱቄት እና የተሟሟት ፕሪም በ -20 ℃ ውስጥ መቀመጥ አለባቸው.ከ10μM በላይ በሆነ መጠን በቲኢ ውስጥ የሚሟሟ ፕሪመርሮች በ -20℃ ለ6 ወራት በተረጋጋ ሁኔታ ሊቀመጡ ይችላሉ፣ነገር ግን በክፍል ሙቀት (ከ15℃ እስከ 30℃) ከ1 ሳምንት ባነሰ ጊዜ ውስጥ ሊቀመጡ ይችላሉ።የደረቁ የዱቄት መጠቀሚያዎች በ -20 C ቢያንስ ለ 1 አመት እና በክፍል ሙቀት (ከ 15 C እስከ 30 C) እስከ 2 ወር ድረስ ሊቀመጡ ይችላሉ.
5. ኢንዛይሞች እና ትኩረታቸው
በአሁኑ ጊዜ ጥቅም ላይ የዋለው ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ በመሠረቱ በኮሊፎርም ባክቴሪያ የተዋሃደ የጂን ኢንጂነሪንግ ኢንዛይም ነው።የተለመደው PCR ምላሽን ለማነቃቃት የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠን 2.5U ያህል ነው (የ 100ul አጠቃላይ ምላሽ መጠንን ያመለክታል)።ትኩረቱ በጣም ከፍተኛ ከሆነ ወደ ልዩ ያልሆነ ማጉላት ሊያመራ ይችላል;ትኩረቱ በጣም ዝቅተኛ ከሆነ, የሰው ሰራሽ ምርት መጠን ይቀንሳል.
6. የዲኤንቲፒ ጥራት እና ትኩረት
የዲኤንቲፒ ጥራት ከማጎሪያው እና ከ PCR ማጉላት ቅልጥፍና ጋር በቅርበት የተያያዘ ነው።የዲኤንቲፒ ዱቄት ጥራጥሬ ነው, እና ተለዋዋጭነቱ በአግባቡ ካልተከማቸ ባዮሎጂያዊ እንቅስቃሴውን ያጣል.dNTP መፍትሄ አሲዳማ ነው፣ እና በከፍተኛ ትኩረት በ 1M NaOH ወይም 1M Tris.HCL ቋት መፍትሄ የሱን ፒኤች ወደ 7.0 ~ 7.5 ለማስተካከል፣ አነስተኛ መጠን ያለው ንዑስ ማሸጊያ፣ የቀዘቀዘ ማከማቻ -20℃ ላይ መዋል አለበት።ብዙ በረዶ-ማቅለጥ dNTP ን ይቀንሳል።በ PCR ምላሽ፣ dNTP 50 ~ 200umol/L መሆን አለበት።በተለይም ለአራቱ ዲኤንቲፒኤስ ትኩረት መስጠት እኩል መሆን አለበት (እኩል ሞል ዝግጅት)።የአንዳቸው ትኩረት ከሌሎቹ (ከፍተኛ ወይም ዝቅተኛ) የተለየ ከሆነ አለመመጣጠን ይከሰታል።በጣም ዝቅተኛ ትኩረት የ PCR ምርቶችን ምርት ይቀንሳል.dNTP ከMg2+ ጋር በማጣመር የነጻ Mg2+ መጠንን ሊቀንስ ይችላል።
7. አብነት (ዒላማ ጂን) ኑክሊክ አሲድ
የአብነት ኑክሊክ አሲድ መጠን እና የመንጻት ደረጃ ለ PCR ስኬት ወይም ውድቀት ቁልፍ ከሆኑ አገናኞች አንዱ ነው።ባህላዊው የዲኤንኤ የማጥራት ዘዴዎች አብዛኛውን ጊዜ SDS እና protease Kን በመጠቀም ናሙናዎችን ለመፍጨት እና ለማስወገድ ይጠቀማሉ።የኤስ.ዲ.ኤስ ዋና ተግባራት በሴል ሽፋን ላይ ቅባቶችን እና ፕሮቲኖችን በማሟሟት የሴል ሽፋኑን በማጥፋት የሜምፕል ፕሮቲኖችን በማፍረስ እና በሴል ውስጥ የሚገኙትን የኑክሌር ፕሮቲኖችን መበታተን ፣ SDS ከፕሮቲኖች ጋር ሊጣመር እና ሊያዝል ይችላል ።ፕሮቲን ኬ ፕሮቲኖችን ሃይድሮላይዝ በማድረግ እና በማዋሃድ በተለይም ከዲ ኤን ኤ ጋር የተቆራኙ ሂስቶን እና ኦርጋኒክ ሟሟትን ፌኖል እና ክሎሮፎርምን በመጠቀም ፕሮቲኖችን እና ሌሎች የሕዋስ ክፍሎችን ለማውጣት እና ኤታኖል ወይም አይሶፕሮፒል አልኮሆልን በመጠቀም ኑክሊክ አሲድን ያመነጫሉ።የወጣው ኑክሊክ አሲድ ለ PCR ምላሽ እንደ አብነት ሊያገለግል ይችላል።ለአጠቃላይ ክሊኒካዊ የፍተሻ ናሙናዎች ፈጣን እና ቀላል ዘዴ ሴሎችን ለማሟሟት ፣ በሽታ አምጪ ተህዋስያንን lysate ፣ ፕሮቲኖችን ከክሮሞሶም ወደ ነፃ ዒላማ ጂኖች ለማፍጨት እና በቀጥታ ለ PCR ማጉላት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።አር ኤን ኤ አብነት ማውጣት አር ኤን ኤ ን እንዳይቀንስ ለመከላከል አብዛኛውን ጊዜ የጓኒዲን ኢሶቲዮካናት ወይም ፕሮቲሴስ ኬ ዘዴን ይጠቀማል።
8.Mg2+ ትኩረት
Mg2+ በ PCR ማጉላት ልዩነት እና ምርት ላይ ከፍተኛ ተጽእኖ አለው.በአጠቃላይ የ PCR ምላሽ፣ የተለያዩ dNTP መጠን 200umol/L ሲሆን ትክክለኛው የ Mg2+ መጠን 1.5 ~ 2.0mmol/L ነው።የMg2+ ትኩረት በጣም ከፍተኛ ነው፣ የምላሽ ልዩነት ይቀንሳል፣ የተለየ ያልሆነ ማጉላት ይከሰታል፣ በጣም ዝቅተኛ ትኩረት የ Taq DNA polymerase እንቅስቃሴን ይቀንሳል፣ በዚህም ምክንያት የምላሽ ምርቶችን ይቀንሳል።
የማግኒዥየም ionዎች እንደ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዜሽን እንቅስቃሴ ባሉ በርካታ የ PCR ገጽታዎች ላይ ተጽእኖ ያሳድራሉ, ይህም ምርትን ይጎዳል;ሌላው ምሳሌ ፕሪመር ማደንዘዣ ነው, እሱም የተወሰነውን ይነካል.dNTP እና አብነት ከማግኒዚየም ion ጋር ይጣመራሉ፣ ይህም ለኤንዛይም እንቅስቃሴ የሚያስፈልገውን የነጻ ማግኒዚየም ion መጠን ይቀንሳል።በጣም ጥሩው የማግኒዚየም ion ትኩረት ለተለያዩ ፕሪመር ጥንዶች እና አብነቶች ይለያያል፣ ነገር ግን ከ200μM dNTP ጋር ያለው የተለመደ PCR የመነሻ ትኩረት 1.5mM ነው (ማስታወሻ፡ ለእውነተኛ ጊዜ መጠናዊ PCR ከ3 እስከ 5ሚኤም ማግኒዥየም ion መፍትሄ በፍሎረሰንት መፈተሻ ይጠቀሙ)።ከፍ ያለ የነጻ ማግኒዚየም ions ክምችት ምርትን ይጨምራል፣ነገር ግን ልዩ ያልሆነ ማጉላትን ይጨምራል እና ታማኝነትን ይቀንሳል።በጣም ጥሩውን ትኩረት ለመወሰን የማግኒዚየም ion ቲትሬሽን በ 0.5 ሚሜ ከ 1 ሚሜ ወደ 3 ሚ.ሜ.በማግኒዚየም ion ማመቻቸት ላይ ያለውን ጥገኝነት ለመቀነስ, ፕላቲኒየም ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ መጠቀም ይቻላል.ፕላቲነም ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ከታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ በበለጠ ሰፊ የማግኒዚየም ion ውህዶች ላይ ያለውን ተግባር ማቆየት ስለሚችል ትንሽ ማመቻቸትን ይፈልጋል።
9. ፒሲአርን የሚያስተዋውቁ ተጨማሪዎች
ለአብዛኛዎቹ አብነቶች ከፍተኛ ልዩ የሆነ የማጉላት ሙቀት፣ የፕሪመር ዲዛይን እና የማግኒዚየም ion ትኩረትን ማመቻቸት በቂ ነው።ሆኖም፣ አንዳንድ አብነቶች፣ ከፍተኛ የጂሲሲ ይዘት ያላቸውን ጨምሮ፣ ተጨማሪ እርምጃዎችን ይፈልጋሉ።በዲ ኤን ኤው የማቅለጥ ሙቀት ላይ ተጽእኖ የሚያሳድሩ ተጨማሪዎች የምርትን ልዩነት እና ምርትን ለማሻሻል ሌላ መንገድ ይሰጣሉ.ለተሻለ ውጤት የአብነት ሙሉ denaturation ያስፈልጋል።
በተጨማሪም, የሁለተኛ ደረጃ መዋቅሩ የፕሪመር ትስስር እና የኢንዛይም ማራዘሚያ ይከላከላል.
የ PCR ተጨማሪዎች፣ ፎርማሚድ፣ DMSO፣ glycerin፣ betaine እና PCRx Enhancer Solution ጨምሮ፣ ማጉላትን ያጎላሉ።የእነሱ ሊሆን የሚችለው ዘዴ የማቅለጫውን የሙቀት መጠን ለመቀነስ ነው, ስለዚህ የፕሪምተሮች መጨፍጨፍ እና የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ማራዘሚያ በሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ክልል ውስጥ ይረዳል.PCRx መፍትሔ ሌሎች ጥቅሞች አሉት.ከፕላቲኒየም ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴ እና ከፕላቲኒየም ፒኤፍክስ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴ ጋር ሲጠቀሙ አነስተኛ የማግኒዚየም ion ማመቻቸት ያስፈልጋል።ስለዚህ የፕላቲኒየም ቴክኒክ ከተጨማሪው ጋር ተጣምሮ የሦስተኛውን አቀራረብ ጥገኝነት ሲቀንስ የማግኒዚየም ion ማመቻቸት ልዩነትን ይጨምራል።ለበለጠ ውጤት፣የተጨማሪዎች ክምችት በተለይም ዲኤምኤስኦ፣ፎርማሚድ እና ግሊሰሮል ታቅ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴን የሚገታ መሆን አለበት።
10. ትኩስ ጅምር
ትኩስ ጅምር PCR ከጥሩ የፕሪመር ዲዛይን በተጨማሪ የ PCR ልዩነትን ለማሻሻል በጣም አስፈላጊ ከሆኑ ዘዴዎች ውስጥ አንዱ ነው።ምንም እንኳን የTaq DNA polymerase ጥሩው የማራዘሚያ ሙቀት 72 ℃ ቢሆንም፣ ፖሊሜሬዝ በክፍል ሙቀት ውስጥ ንቁ ሆኖ ይቆያል።ስለዚህ, የ PCR ምላሽ በሚዘጋጅበት ጊዜ እና በሙቀት ዑደቱ መጀመሪያ ላይ የመያዣው ሙቀት ከአነቃቂው የሙቀት መጠን ያነሰ በሚሆንበት ጊዜ ልዩ ያልሆኑ ምርቶች ይመረታሉ.አንዴ ከተፈጠሩ በኋላ እነዚህ ልዩ ያልሆኑ ምርቶች በውጤታማነት ይጨምራሉ።Hot-star PCR በተለይ ለፕሪመር ዲዛይን የሚያገለግሉ ቦታዎች በጄኔቲክ ንጥረ ነገሮች መገኛ የተገደቡ እንደ ሳይት-ተኮር ሚውቴሽን፣ የገለፃ ክሎኒንግ ወይም ግንባታ እና የጄኔቲክ ንጥረ ነገሮችን ለዲኤንኤ ምህንድስና ጥቅም ላይ ሲውል ነው።
የTaq DNA polymerase እንቅስቃሴን ለመገደብ የተለመደው ዘዴ የ PCR ምላሽን በበረዶ ላይ ማዘጋጀት እና በቅድሚያ በማሞቅ PCR መሳሪያ ውስጥ ማስቀመጥ ነው.ይህ ዘዴ ቀላል እና ርካሽ ነው, ነገር ግን የኢንዛይም እንቅስቃሴን አያጠናቅቅም እና ስለዚህ ልዩ ያልሆኑ ምርቶችን ማጉላትን ሙሉ በሙሉ አያስወግድም.
Thermal priming PCR አፓርተማ የዲንቴሽን የሙቀት መጠን እስኪደርስ ድረስ አንድ አስፈላጊ አካልን በመከልከል የዲኤንኤ ውህደትን ያዘገያል።የታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴን ዘግይቶ መጨመርን ጨምሮ አብዛኛዎቹ በእጅ የሚሞቁ የማስጀመሪያ ዘዴዎች፣ በተለይ ለከፍተኛ አፕሊኬሽኖች አስቸጋሪ ናቸው።ሌሎች የሙቀት ፕሪሚንግ ዘዴዎች የማግኒዚየም ionዎችን ወይም ኢንዛይሞችን ጨምሮ አስፈላጊ አካልን ለማካተት የሰም ጋሻን ይጠቀማሉ ወይም እንደ አብነቶች እና ቋቶች ያሉ ምላሽ ሰጪ ክፍሎችን በአካል ለመለየት።በሙቀት ዑደት ውስጥ, ሰም ሲቀልጥ የተለያዩ ክፍሎች ይለቃሉ እና ይቀላቀላሉ.ልክ እንደ በእጅ ሙቅ አጀማመር ዘዴ፣ የሰም ጋሻ ዘዴው አስቸጋሪ እና ለብክለት የተጋለጠ እና ለከፍተኛ የግብአት አፕሊኬሽኖች ተስማሚ አይደለም።
ፕላቲነም ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ለራስ-ሰር ትኩስ ጅምር PCR ምቹ እና ቀልጣፋ ነው።ፕላቲነም ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ከሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት ጋር ተጣምሮ ከታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ጋር እንደገና የተዋሃደ ታቅ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴን ያካትታል።ፀረ እንግዳ አካላት ለረጅም ጊዜ የሙቀት መጠን ሲቆዩ የኢንዛይም እንቅስቃሴን ለመግታት በ PCR ተዘጋጅተዋል.ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ወደ ምላሹ ተለቋል በ 94 ℃ የ denaturation ደረጃ ሽፋን ፣ ሙሉ የ polymerase እንቅስቃሴን ወደነበረበት ይመልሳል።ለሙቀት አጀማመር በኬሚካል ከተሻሻለው Taq DNA polymerase በተቃራኒ ፕላቲነም ኢንዛይም ፖሊመሬሴስን ለማንቃት በ94℃ (ከ10 እስከ 15 ደቂቃ) ላይ ረጅም መከላከያ አያስፈልገውም።በPlatinumTaq DNA polymerase፣ 90% የTaq DNA polymerase እንቅስቃሴ ከ2 ደቂቃ በኋላ በ94℃ ወደነበረበት ተመልሷል።
11. Nest-PCR
የጎጆ ፕሪመርቶችን በመጠቀም ተከታታይ የማጉላት ዙሮች ልዩነትን እና ስሜታዊነትን ሊያሻሽሉ ይችላሉ።የመጀመሪያው ዙር ከ 15 እስከ 20 ዑደቶች መደበኛ ማጉላት ነው.ከመጀመሪያው የማጉላት ምርት ውስጥ ትንሽ ክፍልፋይ ከ 100 እስከ 1000 ጊዜ ተጨምሯል እና ለ 15 እስከ 20 ዑደቶች ወደ ሁለተኛ ዙር ማጉላት ተጨምሯል.በአማራጭ, የመጀመሪያው የተጨመረው ምርት በጄል ማጽዳት ሊለካ ይችላል.በሁለተኛው ዙር ማጉላት ላይ የተገጠመ ፕሪመር ጥቅም ላይ ይውላል፣ ይህም በመጀመሪያው ፕሪመር ውስጥ ካለው የዒላማ ቅደም ተከተል ጋር ሊጣመር ይችላል።የጎጆ PCR አጠቃቀም የበርካታ ዒላማ ቦታዎችን የማጉላት እድልን ይቀንሳል ምክንያቱም ከሁለቱም የፕሪመር ስብስቦች ጋር የሚሟሉ ጥቂት የዒላማ ቅደም ተከተሎች አሉ።ተመሳሳይ አጠቃላይ የዑደቶች ብዛት (ከ30 እስከ 40) ከተመሳሳይ ፕሪመር ጋር ልዩ ያልሆኑ ቦታዎችን አጉላ።Nsted PCR የተገደበ የዒላማ ቅደም ተከተሎችን (ለምሳሌ ብርቅዬ mrnas) ስሜትን ይጨምራል እና አስቸጋሪ PCRS (ለምሳሌ 5′ RACE) ልዩነትን ያሻሽላል።
12. PCR መውረድ
PCR መውረድ ለመጀመሪያዎቹ ጥቂት የ PCR ዑደቶች ጥብቅ የማደንዘዣ ሁኔታዎችን በመጠቀም ልዩነትን ያሻሽላል።ዑደቱ ከተገመተው Tm በ5℃ ከፍ ባለ የሙቀት መጠን ይጀምራል፣ ከዚያም እያንዳንዱ ዑደቱ በ1℃ እስከ 2℃ የሚቀንስ የሙቀት መጠን ከቲኤም 5℃ በታች ይሆናል።ከፍተኛ ግብረ ሰዶማዊነት ያለው የመድረሻ አብነት ብቻ ይጨምራል።እነዚህ ምርቶች በቀጣዮቹ ዑደቶች ውስጥ መስፋፋታቸውን ይቀጥላሉ, የተጨመሩ ልዩ ያልሆኑ ምርቶችን በማጨናነቅ.PCR መውረድ በፕሪመር እና በዒላማ አብነት መካከል ያለው የግብረ-ሰዶማዊነት ደረጃ በማይታወቅባቸው ዘዴዎች ጠቃሚ ነው ለምሳሌ እንደ AFLP DNA የጣት አሻራ።
ተዛማጅ PCR ኪት
የ2× PCR ጀግናTMሚክስ ሲስተም ከተራ PCR ድብልቅ ስርዓት የበለጠ ለ PCR አጋቾቹ ከፍተኛ መቻቻል አለው፣ እና የተለያዩ ውስብስብ አብነቶች PCR ማጉላትን በቀላሉ መቋቋም ይችላል።ልዩ የሆነ የምላሽ ስርዓት እና ከፍተኛ ብቃት ያለው Taq Hero የ PCR ምላሽ ከፍተኛ የማጉላት ቅልጥፍና፣ ልዩነት እና ስሜታዊነት እንዲኖረው ያደርጉታል።
ከፍተኛ የማጉላት ውጤታማነት
5'→3' የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ እንቅስቃሴ እና 5'→3' exonuclease እንቅስቃሴ ያለ 3'→5' exonuclease እንቅስቃሴ አለው።
ሪል ጊዜ PCR Easyᵀᴹ-SYBR አረንጓዴ አይ ኪት።
የተወሰነ-የተመቻቸ ቋት እና ትኩስ ጅምር Taq ኢንዛይም ልዩ ያልሆነ ማጉላት እና የፕሪመር ዲመር መፈጠርን ይከላከላል።
ከፍተኛ ትብነት—ዝቅተኛ የአብነት ቅጂዎችን መለየት ይችላል።
ኪቱ ልዩ የሆነ የForegene ግልብጥብጥ ሪጀንት እና Foregene HotStar Taq ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴን ከተለየ የምላሽ ስርዓት ጋር በማጣመር የምላሹን የማጉላት ቅልጥፍና እና ልዩነት ይጠቀማል።
የልጥፍ ሰዓት፡- ግንቦት-09-2023
