RNase ብዙ ጊዜ የአር ኤን ኤን ማውጣት ሙከራዎችን የሚያካሂዱ ብዙ ተማሪዎች መስማት የማይፈልጉት ሚስጥራዊነት ያለው ቃል ነው።ሙሉ በሙሉ ታጥቆ በመጨረሻ በጣም መርዛማ በሆኑት ፌኖል እና ክሎሮፎርም የተገኘው አር ኤን ኤ ተበላሽቷል።አልታረቅኩም!!!ዛሬ, የታዋቂውን Rnase አመጣጥ እንመልከት.

Ribonuclease (RNase) ወይም RNase፣ አር ኤን ኤ ን ወደ ትናንሽ ሞለኪውሎች ሃይድሮላይዝ ማድረግ የሚችል ኒውክሊዝ ነው።RNase, እንደ ትንሽ ሞለኪውል ፕሮቲን, ያልተለመደ የተረጋጋ ነው .የተለመደው ከፍተኛ የሙቀት መጠን እና ከፍተኛ ግፊት የእንፋሎት ማምከን እና የፕሮቲን መከላከያዎች ሙሉ በሙሉ ማንቀሳቀስ አይችሉም.የ RNase መረጋጋት በዋነኝነት የሚመጣው በመዋቅሩ ውስጥ ካለው የዲሰልፋይድ ቦንዶች ነው።ለምሳሌ፣ በብዛት ጥቅም ላይ የዋለው የቦቪን ፓንሴይ 124 አሚኖ አሲዶች ብቻ ነው ያለው፣ ግን 4 ዲሰልፋይድ ቦንዶች አሉት።የሰልፈር ቦንድ እና የዲሰልፋይድ ቦንድ ለ RNase እጅግ በጣም ጥሩ የሙቀት መረጋጋትን ይሰጣል።በተጨማሪም, rnase በአንጻራዊ ሁኔታ ሲታይ አነስተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ያለው ሲሆን በብዙ ሁኔታዎች ውስጥ የመጀመሪያውን መመሳሰል በፍጥነት መመለስ ይችላል.

በጣም የተረጋጋ ከመሆኑ በተጨማሪ,RNases በቤተ ሙከራ ውስጥ በሁሉም ቦታ ይገኛሉ .RNase ባዮሎጂያዊ የመከላከያ ዘዴ ነው.ለአንድ ሕዋስ፣ ውጫዊ አር ኤን ኤ ብዙ ጊዜ ገዳይ ነው።ከውጪ ዲ ኤን ኤ ጋር ሲነጻጸር፣ ኤግዚን የተባለው አር ኤን ኤ ብዙ ጊዜ የበለጠ አደገኛ ነው።አር ኤን ኤ በደስታ የተገለበጠ እና የተተረጎመ ነው፣ ስለዚህ ሁሉም ፍጥረታት ከሞላ ጎደል አር ኤን ኤ ወረራ ለመከላከል አር ኤን ኤስ ፈጥረዋል።ስለዚህ በቤተ ሙከራ ውስጥ የሚለሙት የባክቴሪያ ህዋሶች እና አር ኤን ኤን የምታወጡት የ RNase ጠረን ታወጣላችሁ።የሰው አካል ፈሳሾች (ምራቅ፣ እንባ፣ ወዘተ) ከፍተኛ መጠን ያለው RNase ይይዛሉ፣ ስለዚህ አር ኤን ኤ ሲበላሽ አታልቅስ።ባለቅክ ቁጥር የአር ኤን ኤ መበላሸት እየባሰ ይሄዳል!!እህት ዳዩ ለአር ኤን ኤ ለማውጣት ተስማሚ አይደለችም!

በተጨማሪም፣ ለስላሳ ቆዳዎ ​​ብዙ RNase ይይዛል፣ እና በቆዳው የተነኩ ማርከሮች፣ pipettes፣ የፍሪጅ በሮች እና የበር እጀታዎች እንዲሁ አር ናሴን ይይዛሉ።

በጣም ብዙ ራምንግ እያለ፣ ከ RNases ጋር እንዴት እንደምንይዝ እንመልከት።

አር ኤን ኤን ሲያስወግድ ሁሉም ሰው የሚያስብበት የመጀመሪያው ነገር ነው።DEPC(ዲቲል ፒሮካርቦኔት).DEPC በዋነኛነት ፕሮቲኑን ያስወግደዋል ከ RNase አክቲቭ ቡድን ሂስቲዳይን ኢሚዳዞል ቀለበት ጋር በማጣመር የኢንዛይም እንቅስቃሴን ይከለክላል።0.1% DEPC በ Rnase ላይ የተሻለ የማስወገጃ ውጤት ሊኖረው ይችላል, ነገር ግን DEPC የታወቀ ካርሲኖጅን መሆኑን ትኩረት መስጠት አለብን, ስለዚህ በሚጠቀሙበት ጊዜ ልዩ ትኩረት ሊሰጠው ይገባል.

ለ RNase፣ ከሁለት ገፅታዎች መጀመር አለብን፣የመጀመሪያው የ endogenous RNase እንቅስቃሴን መከልከል ነው

እንደ Guanidine isothiocyanate እና DTT ያሉ በትሪዞል ውስጥ የሚገኙት የተለመዱ አር ኤን ኤ ማውጣት የ RNase ዳይሰልፋይድ ቦንድ ሊከፍቱ ይችላሉ፣ነገር ግን አሁንም አንዳንድ RNases በተለይም በቲሹ ናሙናዎች ውስጥ አሉ፣ስለዚህ ለዝቅተኛ የሙቀት መጠን ትኩረት ይስጡ።

1.ወዲያውኑ የቲሹ ናሙናውን ከወሰዱ በኋላ በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ወይም በንግድ አር ኤን ኤ ማቆያ መፍትሄ ውስጥ ይንከሩት።

2.የሴል ናሙናውን አር ኤን ካወጣህ በኋላ ወደ ሊሲስ መፍትሄ ጨምር እና በበረዶ ሳጥኑ ላይ ቀባው

3. ለመፍጨት ፈሳሽ ናይትሮጅን መጠቀም ጥሩ ነው የቲሹ ናሙናዎች ተመሳሳይነት ሲኖራቸው.ፈሳሽ ናይትሮጅን በሌለበት ኤሌክትሪክ ግብረ-ሰዶማዊነት በሚጠቀሙበት ጊዜ የሆሞጂን አስማሚን ሙሉ በሙሉ ለማቀዝቀዝ ትኩረት ይስጡ.

ሁለተኛው exogenous DNase ነው

1.ሙሉ በሙሉ ታጥቁ፣ የላብራቶሪ ኮት ይልበሱ፣ ጭንብል ያድርጉ እና አዲስ ጓንት ማድረግዎን ያረጋግጡ (በጣም ቆጣቢ አይሁኑ!! ትሪዞል እጅግ በጣም የሚበላሽ እና በጓንቶችም በጣም ጠንካራ ስለሆነ በእጆችዎ ላይ አይንጠባጠቡ)።

2.ሁሉም ያገለገሉ pipette ምክሮች፣ EP tubes፣ PCR tubes እና ሌሎች መሳሪያዎች ዲ አር ናስ መታከም አለባቸው።በ 0.1% DEPC ውስጥ ሊጠጣ እና ከዚያም በከፍተኛ ግፊት ሊጫን ይችላል.በጢስ ማውጫ ውስጥ ለሥራው ትኩረት ይስጡ.የአካባቢ አምባገነኖች ኢንዛይሞችን ለማስወገድ የፍጆታ ዕቃዎችን በቀጥታ መግዛት ይችላሉ።

PS: አንድ ሰነፍ ዘዴ ልንገራችሁ.ምንም እንኳን ከፍተኛ ሙቀት እና ከፍተኛ ግፊት RNase ን ሙሉ በሙሉ ማስወገድ ባይችሉም, ትልቅ ክፍልን ያስወግዳል.2 ጊዜ ከፍተኛ ሙቀት እና ከፍተኛ ግፊት ጥሩ ውጤት አለው, እና አር ኤን ኤ ማውጣት አነስተኛ ውጤት አለው.

3.አልኮሆል ፕሮቲኖችን ያስወግዳል ፣ስለዚህ የአር ኤን ኤ ማውጣት ጠረጴዛ በ 75% አልኮል ሊጸዳ ይችላል , እና ጓንቶች በአልኮል ሊረጩ ይችላሉ.

4.የመጨረሻው አር ኤን ኤ ሟሟ መፍትሄ እና ሴንትሪፉጅ ቱቦ እንዲሁ ዲ አር ናስ መታከም አለበት።DEPC ውሃ በብዛት ጥቅም ላይ የዋለ የአር ኤን ኤ ሟሟ መፍትሄ ነው።ስለ DEPC ውሃ ትክክለኛ የዝግጅት ዘዴ እንነጋገር (የነጋዴውን DEPC ሲገዙ እንደገና ማሸግዎን ያስታውሱ)

DEPC በ 1:1000 ultrapure water ውስጥ ይጨምሩ ፣ በደንብ ይንቀጠቀጡ ፣ በአንድ ሌሊት በ 37 ° ሴ ይቁሙ እና በ 121 ° ሴ በከፍተኛ ሙቀት እና በከፍተኛ ግፊት ለ 15 ደቂቃዎች ያፅዱ።የ DEPC ውሃ በ -20 ° ሴ በ 1 ml aliquots ውስጥ ሊከማች ይችላል.

በመጨረሻም, ለማጠቃለል: ዝቅተኛ የሙቀት መጠን ቁልፍ ነው, የፍጆታ እቃዎች በጥሩ ሁኔታ ይያዛሉ, ሙሉ በሙሉ የታጠቁ እና ብዙ ንግግር አይናገሩም!

እንግዲህ ለዛሬው ስልት ያ ነው።የጠቀስከውን የ RNA ትኩረት እና ንፅህና እመኝልዎታለሁ።ሁለቱም A260/A280 2.0 ናቸው!!!

እርግጥ ነው, ከተጠቀሙየክፍል ሙቀት ኦፕሬሽን አር ኤን ኤ ማውጣት ኪትከላይ የተጠቀሱትን ችግሮች ላያጋጥሙዎት ይችላሉ.

ክዋኔ በክፍል ሙቀት፣ ዲናስ ሳይጨምር አጠቃላይ አር ኤን ኤ በ11 ደቂቃ ውስጥ ከሴሎች ያወጣል፣ እና አጠቃላይ አር ኤን ኤ ከእንስሳት ቲሹዎች ወይም ተክሎች በ30 ደቂቃ ውስጥ ያወጣል።

ለሙከራ ናሙናዎች እባክዎን ያነጋግሩ፡-overseas@foregene.com

ተዛማጅ ምርቶች፡

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/