ፀረ እንግዳ አካላት፣ እንዲሁም ኢሚውኖግሎቡሊን (Ig) ተብለው የሚጠሩት፣ በተለይ አንቲጂኖችን የሚያገናኙ ግላይኮፕሮቲኖች ናቸው።
 
የተለመደው ፀረ እንግዳ አካላት ዝግጅት የሚመረተው እንስሳትን በመከተብ እና ፀረ-ሴረም በመሰብሰብ ነው።ስለዚህ አንቲሴረም አብዛኛውን ጊዜ ፀረ እንግዳ አካላትን ከሌሎች ተያያዥነት የሌላቸው አንቲጂኖች እና በሴረም ውስጥ ያሉ ሌሎች የፕሮቲን አካላትን ይይዛል።አጠቃላይ አንቲጂን ሞለኪውሎች ብዙ የተለያዩ ኤፒቶፖችን ይይዛሉ፣ስለዚህ የተለመዱ ፀረ እንግዳ አካላት ከብዙ የተለያዩ ኤፒቶፖች ጋር ፀረ እንግዳ አካላት ድብልቅ ናቸው።በተመሳሳዩ ኤፒቶፕ ላይ የሚደረጉ የተለመዱ የሴረም ፀረ እንግዳ አካላት እንኳን አሁንም በተለያዩ የቢ ሴል ክሎኖች የሚመረቱ የተለያዩ ፀረ እንግዳ አካላት ያቀፈ ነው።ስለዚህ, የተለመዱ የሴረም ፀረ እንግዳ አካላት ፖሊክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት ወይም ፖሊክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት ተብለው ይጠራሉ.
 
ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት (ሞኖክሎናል አንቲቦዲ) በአንድ ቢ ሴል ክሎን የሚመረተው በጣም ወጥ የሆነ ፀረ እንግዳ አካል ነው እና ወደ አንድ የተወሰነ ኤፒቶፕ ብቻ ይመራል።ብዙውን ጊዜ የሚዘጋጀው በ hybridoma ቴክኖሎጂ ነው-hybridoma antibody ቴክኖሎጂ በሴል ፊውዥን ቴክኖሎጂ ላይ የተመሰረተ ነው, B ሴሎችን በማዋሃድ የተወሰኑ ፀረ እንግዳ አካላትን እና ማይሎማ ሴሎችን ማለቂያ የሌለው የእድገት አቅም ወደ B-cell hybridomas.ይህ ዲቃላ ሕዋስ የወላጅ ሴል ባህሪያት አሉት.ልክ እንደ ማይሎማ ሴሎች በብልቃጥ ውስጥ ላልተወሰነ እና የማይሞት ሊባዛ ይችላል፣ እና እንደ ስፕሌኒክ ሊምፎይተስ ያሉ ልዩ ፀረ እንግዳ አካላትን ያዋህዳል እና ያመነጫል።በክሎኒንግ አማካኝነት ከአንድ hybridoma ሴል የተገኘ አንድ ሞኖክሎናል መስመር ማለትም ሃይብሪዶማ ሴል መስመር ሊገኝ ይችላል።የሚያመነጨው ፀረ እንግዳ አካላት ከተመሳሳይ አንቲጂኒክ መወሰኛ ማለትም ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት ጋር የሚቃረኑ በጣም ተመሳሳይ የሆኑ ፀረ እንግዳ አካላት ናቸው።
 
ፀረ እንግዳ አካላት እንደ አንድ ወይም ከዚያ በላይ የ Y ቅርጽ ያላቸው ሞኖመሮች (ማለትም፣ ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት ወይም ፖሊክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት) አሉ።እያንዳንዱ የ Y ቅርጽ ያለው ሞኖመር በ 4 ፖሊፔፕቲድ ሰንሰለቶች የተዋቀረ ነው, ይህም ሁለት ተመሳሳይ ከባድ ሰንሰለቶችን እና ሁለት ተመሳሳይ የብርሃን ሰንሰለቶችን ያካትታል.ቀላል ሰንሰለት እና ከባድ ሰንሰለት እንደ ሞለኪውላዊ ክብደታቸው ይሰየማሉ።የ Y ቅርጽ ያለው መዋቅር የላይኛው ተለዋዋጭ ክልል ነው, እሱም አንቲጂን ማያያዣ ቦታ ነው.(ከDetai Bio-Monoclonal Antibody Concept የተወሰደ)
 
ፀረ እንግዳ አካላት አወቃቀር
ከባድ ሰንሰለት
አምስት ዓይነት አጥቢ እንስሳት Ig ከባድ ሰንሰለቶች አሉ፣ በግሪክ ፊደላት α፣ δ፣ ε፣ γ እና μ የተሰየሙ።ተጓዳኝ ፀረ እንግዳ አካላት IgA፣ IgD፣ IgE፣ IgG እና IgM ይባላሉ።የተለያዩ ከባድ ሰንሰለቶች በመጠን እና በአጻጻፍ ይለያያሉ.α እና γ ወደ 450 የሚጠጉ አሚኖ አሲዶች ሲይዙ μ እና ε ደግሞ ወደ 550 የሚጠጉ አሚኖ አሲዶች ይይዛሉ።
እያንዳንዱ ከባድ ሰንሰለት ሁለት ክልሎች አሉት-ቋሚ ክልል እና ተለዋዋጭ ክልል.ሁሉም ተመሳሳይ ዓይነት ፀረ እንግዳ አካላት አንድ አይነት ቋሚ ክልል አላቸው, ነገር ግን በተለያየ ዓይነት ፀረ እንግዳ አካላት መካከል ልዩነቶች አሉ.የከባድ ሰንሰለቶች γ, α እና δ ቋሚ ክልሎች በሶስት Ig ጎራዎች የተዋቀሩ ናቸው, ተጣጣፊነቱን ለመጨመር ከማጠፊያ ክልል ጋር;የከባድ ሰንሰለቶች μ እና ε ቋሚ ክልሎች በ 4 Ig ጎራዎች የተዋቀሩ ናቸው.በተለያዩ ቢ ሴሎች የሚመረተው ፀረ እንግዳ አካል የከባድ ሰንሰለት ተለዋዋጭ ክልል የተለያዩ ነው፣ ነገር ግን በተመሳሳይ ቢ ሴል ወይም ሴል ክሎን የሚመረተው ፀረ እንግዳ አካል ተለዋዋጭ ክልል አንድ ነው፣ እና የእያንዳንዱ ከባድ ሰንሰለት ተለዋዋጭ ክልል ወደ 110 አሚኖ አሲዶች ርዝመት አለው።, እና አንድ ነጠላ Ig ጎራ ይፍጠሩ.
 
የብርሃን ሰንሰለት
በአጥቢ እንስሳት ውስጥ ሁለት ዓይነት የብርሃን ሰንሰለቶች ብቻ አሉ-ላምዳ ዓይነት እና የካፓ ዓይነት።እያንዳንዱ የብርሃን ሰንሰለት ሁለት ተያያዥነት ያላቸው ጎራዎች አሉት-ቋሚ ክልል እና ተለዋዋጭ ክልል.የብርሃን ሰንሰለት ርዝመት 211 ~ 217 አሚኖ አሲዶች ነው.በእያንዳንዱ ፀረ እንግዳ አካላት ውስጥ የሚገኙት ሁለቱ የብርሃን ሰንሰለቶች ሁልጊዜ ተመሳሳይ ናቸው.ለአጥቢ እንስሳት በእያንዳንዱ ፀረ እንግዳ አካል ውስጥ ያለው የብርሃን ሰንሰለት አንድ አይነት ብቻ ነው ያለው: kappa ወይም lambda.በአንዳንድ የታች አከርካሪ አጥንቶች ውስጥ እንደ cartilaginous fishes (cartilage fishes) እና የአጥንት አሳዎች፣ እንደ አዮታ (አዮታ) ዓይነት ያሉ ሌሎች የብርሃን ሰንሰለቶችም ይገኛሉ።
 
Fab እና Fc ክፍሎች
ፀረ እንግዳ አካላትን ለመሰየም የ Fc ክፍል በቀጥታ ከኤንዛይሞች ወይም ከፍሎረሰንት ማቅለሚያዎች ጋር ሊጣመር ይችላል።በኤሊዛ ሂደት ውስጥ ፀረ እንግዳ አካላት በጠፍጣፋው ላይ የሚፈነጥቁበት ክፍል ነው, እንዲሁም ሁለተኛው ፀረ እንግዳ አካላት ተለይተው የሚታወቁበት እና በክትባት መከላከያ, ኢሚውኖብሎቲንግ እና ኢሚውኖሂስቶኬሚስትሪ ውስጥ የተጣበቁበት ክፍል ነው.ፀረ እንግዳ አካላት ወደ ሁለት F(ab) ክፍል እና አንድ Fc ክፍል በፕሮቲዮቲክ ኢንዛይሞች እንደ ፓፓይን ሊከፋፈሉ ይችላሉ ወይም ከሂንጅ ክልል በፔፕሲን ሊሰበሩ እና ሃይድሮሊዝድ ወደ አንድ F(ab) 2 ክፍል እና አንድ Fc ክፍል ሊሰበሩ ይችላሉ።IgG ፀረ እንግዳ አካላት አንዳንድ ጊዜ በጣም ጠቃሚ ናቸው.በ Fc ክፍል እጥረት ምክንያት የኤፍ (ab) ክፍል አንቲጂንን አያመነጭም, ወይም በ Vivo ጥናቶች ውስጥ በበሽታ ተከላካይ ሕዋሳት አይያዝም.በትናንሽ ሞለኪውላዊ ቁርጥራጮች እና የማገናኘት ተግባር እጥረት (በ Fc ክፍል እጥረት ምክንያት) የፋብ ክፍል ብዙውን ጊዜ በተግባራዊ ጥናቶች ውስጥ ለሬዲዮ መለያ ጥቅም ላይ ይውላል ፣ እና የ Fc ክፍል በዋነኝነት በሂስቶኬሚካል ቀለም ውስጥ እንደ ማገጃ ወኪል ያገለግላል።
 
ተለዋዋጭ እና ቋሚ ክልሎች
ተለዋዋጭ ክልል (V ክልል) በ 1/5 ወይም 1/4 (118 ያህል የአሚኖ አሲድ ቅሪቶችን የያዘ) የ H ሰንሰለት በ N-terminus አቅራቢያ እና 1/2 (ከ 108-111 አሚኖ አሲድ ቀሪዎችን የያዘ) በ N-terminus የ L ሰንሰለት አቅራቢያ ይገኛል.እያንዳንዱ የቪ ክልል በ intra-chain disulfide bonds የተሰራ የፔፕታይድ ቀለበት አለው፣ እና እያንዳንዱ የፔፕታይድ ቀለበት በግምት ከ67 እስከ 75 የሚደርሱ የአሚኖ አሲድ ቅሪቶችን ይይዛል።በ V ክልል ውስጥ የአሚኖ አሲዶች ቅንብር እና ዝግጅት ፀረ እንግዳ አካላትን የሚቀያይሩ አንቲጂንን ይወስናል.በቪ ክልል ውስጥ በየጊዜው በሚለዋወጡት የአሚኖ አሲዶች ዓይነቶች እና ቅደም ተከተሎች ምክንያት የተለያዩ አስገዳጅ አንቲጂን ልዩ ልዩ ልዩ ፀረ እንግዳ አካላት ሊፈጠሩ ይችላሉ።የኤል ሰንሰለት እና የኤች ሰንሰለት V ክልሎች በቅደም ተከተል VL እና VH ይባላሉ።በ VL እና VH ውስጥ የአሚኖ አሲድ ቅንብር እና የአንዳንድ የአካባቢ ክልሎች ቅደም ተከተል ከፍተኛ ልዩነት አላቸው.እነዚህ ክልሎች hypervariable ክልሎች (HVR) ይባላሉ።በቪ ክልል ውስጥ ያሉት የኤች.ቪ.አር ያልሆኑ ክፍሎች የአሚኖ አሲድ ቅንብር እና ዝግጅት በአንጻራዊነት ወግ አጥባቂ ናቸው, እሱም ማዕቀፍ ክልል ይባላል.በVL ውስጥ ሦስት hypervariable ክልሎች አሉ፣ አብዛኛውን ጊዜ በአሚኖ አሲድ ቅሪት ከ24 እስከ 34 እና ከ89 እስከ 97 በቅደም ተከተል ይገኛሉ።ሦስቱ የVL እና VH HVRs HVR1፣ HVR2 እና HVR3 ይባላሉ።የኤክስ ሬይ ክሪስታል ዲፍራክሽን ጥናትና ትንታኔ እንደሚያሳየው ሃይፐርቫሪዩብ ክልል በርግጥም ፀረ እንግዳ አካላት አንቲጂን የሚተሳሰርበት ቦታ በመሆኑ የማሟያ-መወሰን ክልል (ሲዲአር) ይባላል።የVL እና VH HVR1፣ HVR2 እና HVR3 በቅደም ተከተል CDR1፣ CDR2 እና CDR3 ሊባሉ ይችላሉ።በአጠቃላይ ሲዲአር 3 ከፍተኛ የሃይፐርቫሪነት ደረጃ አለው።የ Ig ሞለኪውሎች ሞኝ መወሰኛዎች ያሉበት hypervariable ክልል ዋና ቦታ ነው።በአብዛኛዎቹ ሁኔታዎች, የ H ሰንሰለት ከአንቲጂን ጋር በማያያዝ የበለጠ ጠቃሚ ሚና ይጫወታል.
ቋሚ ክልል (ሲ ክልል)በ 3/4 ወይም 4/5 (በግምት ከአሚኖ አሲድ 119 እስከ ሲ ተርሚናል) የኤች ሰንሰለት በሲ ተርሚነስ አቅራቢያ እና 1/2 (105 የአሚኖ አሲድ ቅሪቶችን ይይዛል) በኤል ሰንሰለት C ተርሚነስ አጠገብ ይገኛል።እያንዳንዱ የኤች ሰንሰለት ተግባራዊ ክልል ወደ 110 የሚጠጉ የአሚኖ አሲድ ቅሪቶችን ይይዛል፣ እና ከ50-60 አሚኖ አሲድ ቅሪቶች በዲሰልፋይድ ቦንድ የተገናኘ የፔፕታይድ ቀለበት ይይዛል።የዚህ ክልል የአሚኖ አሲድ ቅንብር እና አደረጃጀት በአንፃራዊነት ቋሚነት ያለው በአንድ አይነት እንስሳ Ig isotype L ሰንሰለት እና ተመሳሳይ አይነት H ሰንሰለት ውስጥ ነው.ተመሳሳይ ፣ እሱ ከተዛማጅ አንቲጂን ጋር ብቻ ማያያዝ ይችላል ፣ ግን የ C ክልል አወቃቀር አንድ ነው ፣ ማለትም ፣ ተመሳሳይ አንቲጂኒቲስ አለው።ፈረስ ፀረ-ሰው IgG ሁለተኛ ደረጃ ፀረ እንግዳ አካላት (ወይም ፀረ-አንቲቦዲ) ከሁለቱ ጋር ሊጣመር ይችላል ፀረ እንግዳ አካላት (IgG) ከተለያዩ exotoxins ጋር ይጣመራሉ.ይህ የሁለተኛ ደረጃ ፀረ እንግዳ አካላትን ለማዘጋጀት እና ፍሎረሴይን, አይሶፕስ, ኢንዛይሞች እና ሌሎች የተለጠፈ ፀረ እንግዳ አካላትን ለመተግበር አስፈላጊ መሰረት ነው.
 
 
ተዛማጅ ምርቶች፡
የሕዋስ ቀጥታ RT-qPCR ስብስብ