የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕቶች ከፍተኛ ሙቀትን መታገስ አይችሉም (ለኤምኤምኤልቪ እንቅስቃሴ በጣም ጥሩው የሙቀት መጠን 37-50 ° ሴ ነው ፣ እና AMV 42-60 ° ሴ ነው)።በጣም ውስብስብ የሆነው የቫይረስ አር ኤን ኤ በዝቅተኛ የሙቀት መጠን ወደ ሲዲኤንኤ ሊገለበጥ አይችልም ፣ ይህም የመለየት ቅልጥፍናን ያስከትላል።ባሕላዊ RT-qPCR በአጠቃላይ ሁለት ቁልፍ ኢንዛይሞች (ተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትሴ እና ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ) መሳተፍን ይጠይቃል፣ ይህም የምላሽ ስርዓቱን አሠራር ለማቃለል እና ወጪውን ለመቀነስ የማይቻል ያደርገዋል።እዚህ ሁለት ከፍተኛ ሙቀት-ተከላካይ ተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕቶችን እናስተዋውቃቸዋለን፣ TtH እና RevTaq።እነዚህ ሁለት ኢንዛይሞችም የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ተግባር ስላላቸው ሁለት ፈንክሽናል ኢንዛይሞች ይባላሉ።

ቲኤች ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ

ከቴርሞፊል ባክቴሪያ ቴርሞስ ቴርሞፊል HB8 የተገኘ ስለ TtH ሰምተህ መሆን አለበት።እንደ Mg2+ ያሉ divalent cations ሲኖር የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ እንቅስቃሴ አለው።እንደ Taq ኢንዛይም ባሉ PCR ግብረመልሶች ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል፣ነገር ግን ከTaq ኢንዛይም የበለጠ የሙቀት መከላከያ አለው፣ስለዚህ ከፍተኛ የጂሲ ይዘት ባላቸው አብነቶች በ PCR ላይ የተሻለ ተጽእኖ ይኖረዋል።

ይህ ኢንዛይም በመሠረቱ ምንም አይነት 3′→5′ exonuclease activity እና 5′→3′ exonuclease activity የለውም፣ስለዚህ ለዲዲዮክሲስ ቅደም ተከተል ሊያገለግል ይችላል።

ይህ ኢንዛይም የ RTase እንቅስቃሴ አለው።Mn2+ በሚኖርበት ጊዜ የRTase እንቅስቃሴ ይሻሻላል።ይህንን ባህሪ በመጠቀም፣ በተመሳሳዩ ቱቦ ውስጥ የተገላቢጦሽ ግልባጭ ምላሽ እና PCR ምላሽን ማለትም አንድ-ደረጃ RT-PCR ን ለማከናወን ሊያገለግል ይችላል።ሆኖም፣ Mn2+ በሚኖርበት ጊዜ የ RT-PCR ትክክለኛነት ከፍተኛ አይደለም።የ RT እንቅስቃሴ ከ rnaase H እንቅስቃሴ ጋር ምንም ግንኙነት የለውም።

· የTth-DNA polymerase (pH9, optimum +55℃～+70℃, ከፍተኛው +95℃) የጨመረው እንቅስቃሴ በአር ኤን ኤ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ምክንያት የሚመጡትን ችግሮች ያሸንፋል።የተገኘው ሲዲኤንኤ በMg2+ ions በሚገኝበት ተመሳሳይ ኢንዛይም በ PCR ሊጨምር ይችላል።

· የTth-DNA polymerase የተገላቢጦሽ ግልባጭ እና የዲኤንኤ ማጉላት በከፍተኛ ሙቀት የመስራት ችሎታ ይህ ኢንዛይም ለቁጥር RT-PCR፣ cloning እና የጂን አገላለጽ ሴሉላር እና ቫይራል አር ኤን ኤ ጠቃሚ ያደርገዋል።
· Tth-DNA polymerase ለ RT-PCR አር ኤን ኤ እስከ 1 ኪ.ቢ.

ባህሪያት እና ጥቅሞች

ቲ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ፡

• የተመቻቸ የ polymerase chain reaction (PCR) ምርት መጠን፣ ቢያንስ 1000 bp በRT-PCR ምላሽ ያረጋግጡ።

• የተሻሻለውን ዲኦክሲራይቦኑክሊዮሳይድ ትራይፎስፌት እንደ ንዑሳን ክፍል ተቀበል

• ከ RNase H እንቅስቃሴ ጋር ያልተዛመደ

• ብዙውን ጊዜ በአር ኤን ኤ ውስጥ ካለው ከፍተኛ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ጋር የተያያዙ ችግሮችን ለማሸነፍ ከፍተኛ የሙቀት መረጋጋት አለው

RevTaq RT-PCR DNA polymerase

ሙቀትን የሚቋቋም ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ከተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትሴሴ እንቅስቃሴ ጋር

RevTaq-RT-PCR-DNA polymerase የተቀረጸ፣ከፍተኛ ሙቀትን የሚቋቋም፣ሁለት-ተግባር ያለው ኢንዛይም በግልባጭ ትራንስክሪፕትስ እና ዲኤንኤ ፖሊሜሬሴ እንቅስቃሴዎች በተቀናጀ እና አርቲፊሻል ዝግመተ ለውጥ ነው።

· የ RevTaq RT-PCR DNA polymerase በ 95 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ያለው ግማሽ ህይወት ከ 40 ደቂቃዎች በላይ ነው.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ከፍተኛ የሙቀት መጠን መገልበጥ በቀጥታ ከአር ኤን ኤ አብነት ይፈቅዳል፣ እና የተገላቢጦሽ ግልባጭ እርምጃ ብዙ የሲዲኤንኤ አብነቶችን ለመፍጠር ብዙ ጊዜ ሊደገም ይችላል።

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase "ዜሮ-ደረጃ" RT-PCR (ምንም ኢሶተርማል የተገላቢጦሽ ግልባጭ ደረጃ) ይፈቅዳል፣ ምክንያቱም በሳይክል የ PCR ማራዘሚያ ደረጃ፣ የተገላቢጦሽ ግልባጭ እና የዲኤንኤ ማጉላት በአንድ ጊዜ ይከሰታሉ።ይህ ደግሞ በከፍተኛ ሙቀት ውስጥ የተገላቢጦሽ ግልባጭ ምላሽን ያበረታታል, በዚህም በከፍተኛ ሙቀት ውስጥ በአር ኤን ኤ ውስጥ ያለውን ጠንካራ ሁለተኛ መዋቅር በማቅለጥ ላይ የሚያጋጥሙትን ችግሮች ይቀንሳል.

· በአፕታመር ላይ በተመሰረተ የሆት ጅምር ቀመር ምክንያት፣ RevTaq RT-PCR DNA polymerase የማደንዘዣ እና የማራዘሚያ ሙቀት ከ 57°C በላይ በሚሆንበት ጊዜ የተሻለ ውጤት ያስገኛል።

· ኢንዛይሙ ሙቀትን የሚቋቋም ስለሆነ በጣም ከፍተኛ የማቅለጫ ነጥቦች (> 60 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ) ያላቸው ፕሪመር እና መመርመሪያዎችን ለመሥራት ይመከራል.

· በምላሽ ማቀናበሪያ ሂደት ውስጥ የአናሊንግ/የማራዘሚያውን የሙቀት መጠን በሙቀት ቅልመት በኩል ለማመቻቸት ይመከራል።

· የሙቀት መጠኑ ከፍ ባለ መጠን የ PCR ልዩነቱ ከፍ ያለ ነው።የተገላቢጦሽ ዑደቱ ብዙውን ጊዜ ከ PCR ዑደት ከፍ ባለ የሙቀት መጠን ይከናወናል፣ ምክንያቱም የDNA Primer:RNA Template hybridization ብዙውን ጊዜ ከDNA Primer:cDNA Template duplex የበለጠ የማቅለጥ ነጥብ አለው።

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase በጄኔቲክ ምህንድስና የተመቻቸ ነው፣ እና የአምፕሊኮን መጠኑ ከ60-300 bp መካከል ነው።

RevTaq RT-PCR DNA polymerase ማወቂያ ገደብ 4 ቅጂዎች ይደርሳል/

የተመቻቸ የምላሽ ስርዓት (ከፍተኛ የማቅለጫ ነጥብ ፕሪሚየር መመስረት) በስዕሉ ላይ ይታያል.በRevTaq RT-PCR DNA polymerase የሚነዳ RT-PCR ከTaqPath ባለ 1-ደረጃ RT-qPCR ማስተር ድብልቅ እና ዝቅተኛ ማወቂያ የናሙና ማቅለጫ ቅልመት የተሻለ ትብነት ያሳያል።

ተጨማሪ ጥቅሞች:

የፈጣን ጅምር ተግባር →የመጀመሪያው የሙቀት ዴንታሬሽን ደረጃ ሊዘለል ይችላል።

ትኩስ ጅምር አፕታመር ፎርሙላ → 100% የኢንዛይም እንቅስቃሴን ወዲያውኑ ያቅርቡ እና በዝቅተኛ የሙቀት መጠን (<57°C) ላይ ልዩ ያልሆነ ማጉላትን ይከላከሉ።

የክሌቭጅ ተግባር → የአር ኤን ኤ ማውጣት እርምጃ ተትቷል፣ ምክንያቱም RevTaq RT-PCR DNA polymerase የድፍድፍ ምላሽ ናሙናዎችን ማካሄድ ይችላል።በሞቃት የ RT-PCR ዑደት ውስጥ የኤውካርዮት ፣ የባክቴሪያ እና የቫይረስ ሕዋስ ሽፋን ወዲያውኑ ሊያጠፋ ይችላል።

IVD ጥሬ እቃ ደረጃ → ከፍተኛ ጥራት ያላቸው ደረጃዎች እና እጅግ በጣም ተወዳዳሪ ዋጋዎች