ሙጫ መልሶ ማግኘትን ለማሻሻል ጠቃሚ ምክሮች

1. በኤሌክትሮፊዮሬሲስ ጊዜ የናሙናውን ጭነት ይጨምሩ.

2. አዲስ የተዘጋጀ የኤሌክትሮፊዮሬሲስ ቋት ይጠቀሙ።

3. ሙጫ በሚቆርጡበት ጊዜ የማጣበቂያውን መጠን ለመቀነስ ሙጫውን በቆርቆሮዎች ብቻ ለመቁረጥ ይሞክሩ: ከጥቂት ዓላማ ቁርጥራጮች ጋር ማጣበቂያ አያስፈልግም, አለበለዚያ የመልሶ ማግኛ መጠን ላይ ተጽእኖ ይኖረዋል.

4. ሁለት ወይም ከዚያ በላይ የሆኑ ሙጫዎችን ከቀለጡ በኋላ, ምንም ያህል መጠን ቢኖረውም ቱቦ ይጠቀሙ እና ወደ ተመሳሳይ አምድ ያስተላልፉ.

5. በሶል ውስጥ የተጨመረው መፍትሄ ትንሽ ተጨማሪ ሊሆን ይችላል, ይህም የዲ ኤን ኤውን ከሽፋን ጋር ለማያያዝ የበለጠ ምቹ ነው, ነገር ግን በአጠቃላይ ከ 750ul አይበልጥም.

6. የጄል ማገገሚያ ቁልፉ ዲ ኤን ኤውን ከዓምዱ ጋር በማያያዝ በጨው ክምችት, በአሲድነት (ቻርጅ) እና በአምዱ ውስጥ ባለው መፍትሄ ሃይድሮፎቢቲቲ.ስለዚህ, የኤሌክትሮፊዮሬሲስ ቋት ፒኤች በጣም ከፍተኛ ከሆነ, 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) ወደ ሶል ውስጥ መጨመር ይቻላል;በገለባው ላይ ያለውን የዲ ኤን ኤ ሞለኪውሎች በተሻለ ሁኔታ ለመጥለፍ 30% አይሶፕሮፓኖል ሙጫውን ካሟጠ በኋላ ወደ ፈሳሽ ውስጥ እንዲሞቅ ማድረግ ይቻላል.

7. ኤሊየኑን ከመጨመራቸው በፊት ኤታኖልን ሙሉ በሙሉ ለማትነን ዓምዱን በክፍል ሙቀት ውስጥ ለጥቂት ደቂቃዎች (10 ደቂቃ ያህል) ይተዉት።

8. በመጨረሻ፣ የመልሶ ማግኛውን መጠን ለመቀነስ ትንሽ ኤሌሜንት ይጨምሩ።በአጠቃላይ, 30-50μl eluent ለኤሌትዩሽን ጥቅም ላይ ይውላል (በጣም ትንሽ አይደለም, አለበለዚያ ሽፋኑን እርጥብ ማድረግ አይችልም, ይህም ለኤሌትዩሽን የማይመች);ከሽፋኑ ጋር የተያያዘውን ዲ ኤን ኤ ሙሉ በሙሉ ለማንሳት የ elution ጠብታዎች በሽፋኑ መሃል ላይ ይገኛሉ።

9. ኤሊየንትን ከጨመረ በኋላ በ 55 ዲግሪ ለ 5 ደቂቃዎች በውኃ መታጠቢያ ውስጥ ሊገለበጥ ወይም በ 50 ዲግሪ ከ 10 ደቂቃዎች በላይ በውኃ መታጠቢያ ውስጥ ማስቀመጥ ወይም በ 4 ዲግሪ ምሽት በፓራፊል ማሸግ እና በሚቀጥለው ቀን ለማገገም ሴንትሪፉድ ማድረግ, ውጤቱ ጥሩ ነው.

10.የሴንትሪፉድ ኤሉኤትን ወደ ማስታወቂያ አምድ መልሰህ ጨምር እና እንደገና ሴንትሪፉጅ አድርግ።

ለ PCR ምርት መልሶ ማግኛ ዝርዝር ዘዴዎች እና ሂደቶች

1. ተራ የጎማ ሪሳይክል

ሙጫውን መልሰው ማግኘት ከፈለጉ, ምቹ እና ትንሽ ከፍ ያለ የመልሶ ማግኛ መጠን ያለው ኪት መጠቀም ጥሩ ነው.በትክክል በእጅ መልሰው ማግኘት ከፈለጉ ሙጫውን ከቆረጡ በኋላ 3 እጥፍ የቲኢ መጠን መጨመር ይችላሉ.በውሃ መታጠቢያ ውስጥ ከቀለጠ በኋላ, phenol, phenol / ክሎሮፎርም በንጽህና ይወጣሉ, እና ኤታኖል ይለቀቃል.በቃ.

2. ዲ ኤን ኤ ከዝቅተኛ የማቅለጫ ነጥብ ጄል ማገገም

የዲኤንኤ ፍርስራሾችን ማጣራት TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ከጄል መጠን ጋር እኩል ይጨምሩ እና ጄል ሙሉ በሙሉ ለመሟሟት በ 65 ዲግሪ ሴንቲግሬድ የውሃ መታጠቢያ ውስጥ ለ 5 ደቂቃዎች ያስቀምጡ.

ወደ ክፍል ሙቀት ከመጣ በኋላ, እኩል መጠን ያለው phenol (ከቲኢ ጋር የተሞላ, ቲኢ በላይኛው ሽፋን ላይ ተዘግቷል, እና የታችኛው የ phenol ንብርብር ተወግዷል) እና ድብልቁ በቀስታ ተቀላቅሏል (መቀላቀል አያስፈልግም) እና በ 12,000 ሩብ ደቂቃ ለ 3 ደቂቃዎች.1-2 ጊዜ ይድገሙት.

የሱፐርኔታንትን ይውሰዱ, የኢታኖል ዝናብን ለማካሄድ 0.1 ጥራዝ 3mol/L ሶዲየም አሲቴት (ፒኤች 5.2) እና 2.5 ጊዜ የፍፁም ኢታኖል መጠን ይጨምሩ.የተጣራውን ዲ ኤን ኤ በተገቢው የቲኢ መጠን ይሟሟት, ይዘቱን ይለኩ እና ለአገልግሎት ይዘጋጁ (ለዒላማው የጂን አወቃቀር ትንተና, የፍተሻ ዝግጅት, ወዘተ.) ጥቅም ላይ ይውላል.

3. PCR መልሶ ማግኘት በጥሩ ማጉላት ልዩነት

የ PCR ማጉላት ልዩነት ጥሩ ከሆነ የ PCR ምርትን ቀላል ማጥራት እና መልሶ ማግኘት ብቻ ነው.50ug/ml proteinase K ወደ PCR ምርት፣ 37 ዲግሪ ለ 1 ሰ፣ አንድ ጊዜ በ phenol/chloroform ማውጣት፣ አንድ ጊዜ በክሎሮፎርም ማውጣት እና 0.1 የሱፐርኔታንት መጠን መጨመር ይችላሉ።የሶዲየም አሲቴት በዝናብ 2.5 ጥራዞች ፍጹም ኢታኖል ተገኝቷል።

ተዛማጅ ምርቶች፡

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/