በቅርቡ አንድ አስደናቂ ነገር አገኘሁ!በዙሪያው ያሉ ብዙ የላቁ የሙከራ ባለሙያዎች አንዳንድ በጣም መሠረታዊ የሆኑ የሙከራ እውቀት ነጥቦችን እንኳን አያውቁም።

ለምሳሌ የሚከተሉትን ጥያቄዎች መመለስ ትችላለህ?

በ OD260 እና A260 መካከል ልዩነት አለ?እያንዳንዳቸው ምን ማለት ናቸው?
OD የኦፕቲካል ጥግግት (optical density) ምህጻረ ቃል ነው፣ ሀ የመምጠጥ ምህጻረ ቃል ነው (መምጠጥ)፣ ሁለቱ ፅንሰ-ሀሳቦች በእውነቱ አንድ ናቸው፣ “የጨረር ጥግግት” “መምጠጥ” ነው፣ ነገር ግን “የጨረር ጥግግት” ከአብዛኞቹ ብሄራዊ ደረጃዎች እና የበለጠ ደረጃውን የጠበቀ ነው።

ብዙውን ጊዜ የኒውክሊክ አሲድ ክምችትን ለማስላት የኦዲ እሴትን በ260nm እንለካለን፣ስለዚህ 1OD ምንን ይወክላል?
ኑክሊክ አሲድ በ 260nm የሞገድ ርዝመት ያለው ከፍተኛ የመጠጫ ጫፍ አለው፣ እሱም ሁለቱንም ዲ ኤን ኤ እና አር ኤን ኤ እንዲሁም የተበጣጠሱ ኑክሊክ አሲድ ቁርጥራጮችን ይይዛል (ይህ ቁልፍ ነጥብ ነው)።
በ260 nm የሞገድ ርዝመት የሚለካው የኦዲ እሴት OD260 ሆኖ ተመዝግቧል።ናሙናው ንጹህ ከሆነ, የ OD260 እሴት የኒውክሊክ አሲድ ናሙና ትኩረትን ማስላት ይችላል.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (ድርብ-ክር ያለው ዲ ኤን ኤ)
=37 μግ/ሚሊ ኤስኤስዲኤንኤ (ነጠላ ገመድ ያለው ዲ ኤን ኤ)
= 40 μግ / ml አር ኤን ኤ
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
በ RT-PCR፣ Realtime-PCR እና QPCR መካከል ምንም ግንኙነት እና ልዩነት አለ?
RT-PCR ለሪቨርስ ግልባጭ PCR አጭር ነው።
ሪል ታይም PCR=qPCR፣ አጭር ለ Quantitative Real Time PCR
ምንም እንኳን ሪል ታይም PCR (የእውነተኛ ጊዜ የፍሎረሰንት መጠናዊ PCR) እና የተገላቢጦሽ ግልባጭ PCR (ተገላቢጦሽ PCR) ሁለቱም በ RT-PCR አህጽሮተ ቃል የተሰጡ ቢመስሉም።ነገር ግን ዓለም አቀፋዊ ስምምነቱ፡ RT-PCR በተለይ በግልባጭ የ PCR ግልባጭን ያመለክታል።

በባዮሎጂ ውስጥ የዲኤንኤ/አር ኤን ኤ ርዝመትን ለመግለጽ በብዛት ጥቅም ላይ የሚውሉት nt፣ bp እና kb ምንድናቸው?
nt = ኑክሊዮታይድ
bp = ቤዝ ጥንድ ቤዝ ጥንድ
kb = kilobase

እርግጥ ነው፣ ብዙ ሰዎች ስለ እነዚህ ጥቃቅን ዝርዝሮች ግድ የላቸውም ትላለህ!ሁሉም ሰው ይህን ያደርጋል፣ እና ምን እንደሆነ ማንም አይጠይቅዎትም።ይህ እንደማያስፈልግ ያውቃሉ, አይደል?

አይ ፣ አይ ፣ አይ ፣ ይህንን ማወቅ በጣም አስፈላጊ ነው!በዚህ ምክንያት?
ምክንያቱም አንድ ጽሑፍ መለጠፍ ይፈልጋሉ!ወንድም!ለመመረቅ እያሰብክም ይሁን ሳይንሳዊ ምርምር ግኝቶችን የምትከታተል ከሆነ ለመናገር በጽሁፎች ላይ መታመን አለብህ!

ኑክሊክ አሲድ ማውጣት በጣም ቀላል እና መሠረታዊ ሙከራ መሆን አለበት.የኑክሊክ አሲድ የማውጣት ጥራት በቀጥታ የሚቀጥሉትን ሙከራዎች ውጤት ይወስናል።

ብዙ ጊዜ ብናገርም አሁንም ብዙ የማይጨነቁ ጓደኞቼ አሉ።በዚህ ጊዜ ከጽሑፉ ለመውጣት ወሰንኩ!

MIQE ተብሎ የሚጠራው የቁጥር ሪል-ጊዜ PCR ሙከራዎችን ለማተም ዝቅተኛው መረጃ, በአለም አቀፍ ደረጃ የተጀመረ የፍሎረሰንስ መጠናዊ ሙከራ መመሪያዎች ስብስብ ነው፣ እሱም የፍሎረሰንስ መጠናዊ PCR ሙከራዎችን ለመገምገም እና ጽሑፎችን ለማተም አስፈላጊ የሆነውን የሙከራ መረጃ አነስተኛ ደረጃዎችን ያቀርባል።በተሞካሪው በተሰጡት የሙከራ ሁኔታዎች እና የትንታኔ ዘዴዎች ገምጋሚዎቹ የተመራማሪውን የሙከራ እቅድ ትክክለኛነት በተሻለ ሁኔታ መገምገም ይችላሉ።

በኒውክሊክ አሲድ የማውጣት ክፍል ውስጥ የሚከተሉት የመለየት እቃዎች ቀርበዋል.

“ኢ” መቅረብ ያለበትን መረጃ ያሳያል እና “D” አስፈላጊ ከሆነ መቅረብ ያለበትን መረጃ ያመለክታል።

ቅጹ በጣም የተወሳሰበ ነው, በእውነቱ, ሁሉም ሰው መጀመር እንዳለበት መናገር እፈልጋለሁ

ንፅህና (ዲ)፣ ምርት (ዲ)፣ ሙሉነት (ኢ) እና ወጥነት (ኢ) በእነዚህ አራት ገጽታዎች ኑክሊክ አሲዶችን ለመገምገም።

እንደ የሙከራ ልምዶች, በመጀመሪያ ስለ ንጽህና እና ትኩረትን የመገምገሚያ ዘዴዎች ይናገሩ.

የኦዲ መለኪያ ለሙከራዎች በጣም ተወዳጅ እና ቀላሉ የመለየት ዘዴ ነው።መርሆውን በተመለከተ፣ እዚህ ዝርዝር ውስጥ አልገባም።ብዙ ላቦራቶሪዎች አሁን የኑክሊክ አሲድ ናሙናዎችን በቁጥር ለመተንተን ultra-micro spectrophotometers ይጠቀማሉ።የመምጠጥ ዋጋን በሚያሳይበት ጊዜ ፕሮግራሙ የማጎሪያውን ዋጋ (ኑክሊክ አሲድ፣ ፕሮቲን እና የፍሎረሰንት ቀለም) እና ተዛማጅ ሬሾዎችን በቀጥታ ይሰጣል።ስለ ኦዲ እሴት ትንተና፣ ይህን ምስል ያስቀምጡ እና ደህና ይሆናሉ።

ሁለንተናዊ የኦዲ እሴት መፍትሔ ዝርዝር

ነገር ግን፣ ለእርስዎ በተናጠል መቅረብ ያለባቸው ጥቂት ማስጠንቀቂያዎች አሉ።

(ከሁሉም በላይ፣ እናንተ የምታጠራቅሙ እና እስኪፈልጓቸው ድረስ የምትጠብቁት መሆን አለባችሁ!)

ማስታወሻ 1 መሳሪያዎች

የ OD እሴቱ በተለያዩ መሳሪያዎች ተፅዕኖ ይኖረዋል.OD260 በተወሰነ ክልል ውስጥ እስካለ ድረስ የOD230 እና OD280 እሴቶች ትርጉም አላቸው።ለምሳሌ ፣የተለመደው Eppendorf D30 በ 260nm የመምጠጥ ክልል 0 ~ 3A ነው ፣ እና NanoDrop One of Thermo በ260nm ነው።የ 0.5 ~ 62.5A የመጠጫ ክልል.

ማስታወሻ 2የማሟሟት reagent

የ OD እሴቱ በተለያዩ reagents በመሟሟት ሊጎዳ ይችላል።ለምሳሌ፣ OD260/280 የተጣራ አር ኤን ኤ በፒኤች ውስጥ ያለው ንባብ7.5 10 ሚ.ሜ ትሪስቋት በ1.9-2.1 መካከል ነው፣ ውስጥ እያለገለልተኛ የውሃ መፍትሄሬሾው ዝቅተኛ ይሆናል, ምናልባት 1.8-2.0 ብቻ ነው, ግን ይህ ማለት የአር ኤን ኤ ጥራት ልዩነትን ይለውጣል ማለት አይደለም.

ማስታወሻ 3ቀሪ ንጥረ ነገሮች

የተቀሩት ንጥረ ነገሮች መኖር የኒውክሊክ አሲድ ትኩረትን መለኪያ ትክክለኛነት ላይ ተጽእኖ ያሳድራሉ, ስለዚህ በተቻለ መጠን በኒውክሊክ አሲድ ናሙናዎች ውስጥ ፕሮቲን, ፎኖል, ፖሊሶካካርዴ እና ፖሊፊኖል ቅሪቶችን ማስወገድ ያስፈልጋል.

ሆኖም ፣ በእውነቱ ፣ ከኦርጋኒክ ሬጀንቶች ጋር ማውጣት የድሮ ዘዴ ነው።በንግድ ኪት ውስጥ የማውጣት ውጤት በሲሊካ ላይ የተመሰረተ ማስታወቂያ አምድ ከሴንትሪፍጋሽን ጋር በማጣመር፣ ለማስወገድ አስቸጋሪ የሆኑትን መርዛማ እና ጎጂ ኦርጋኒክ ሬጀንቶችን በማስወገድ፣ ወዘተ. ችግሩ፣ ለምሳሌየForegene ኑክሊክ አሲድ የማውጣት ኪት፣ በቀዶ ጥገናው በሙሉ ፈጣን እና ደህንነቱ የተጠበቀ የDNase/RNase እና መርዛማ ኦርጋኒክ ሪጀንቶችን አይጠቀምም።, እና የተፅዕኖ ነውጥሩ(በአጋጣሚ ራሰ በራ እንደሆነ ተናግሯል፣ ግን ማወቅ እንደምትፈልግ አውቃለሁ)።

ምሳሌ 1፡ የጂኖሚክ ዲኤንኤ ማውጣት ምርት እና ንፅህና።

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) የአፈር ናሙናዎችን ከተለያዩ ምንጮች በማከም የተገኘው የጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ መጠን እና ንፅህና በሚከተለው ሰንጠረዥ ይታያል።
ምሳሌ 2፡ የቲሹ አር ኤን ኤ ማውጣት ምርት እና ንፅህና።

የእንስሳት ጠቅላላ አር ኤን ኤ ማግለል ኪት (RE-03012) የተለያዩ የቲሹ ናሙናዎችን ያከናወነ ሲሆን የተገኘው የአር ኤን ኤ መጠን እና ንፅህና ከዚህ በታች ባለው ሠንጠረዥ ውስጥ ይታያል (ለአይጥ ቲሹ)።
ሆኖም፣ በኦዲ እሴት ጨርሰሃል ብለው አያስቡ።ከፊት ለፊቴ የሳብኩልህን ቁልፍ ነጥቦች ተንከባከብ አለህ?

ማስታወቂያ

የተቆራረጡ ኑክሊክ አሲድ ሞለኪውሎች በመምጠጥ ውስጥም ይሰላሉ.በአር ኤን ኤ ውስጥ የጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ቅሪቶች እንዳሉዎት ካሰቡ፣ የኦዲ እሴትዎ በጣም ከፍ ያለ ይመስላል፣ ነገር ግን ትክክለኛው የአር ኤን ኤ ትኩረት ሊታወቅ አይችልም።የእርስዎ አር ኤን ኤ መሆን አለመሆኑ ግልጽ አይደለም፣ስለዚህ የበለጠ ትክክለኛ ፍርድ ለመስጠት አሁንም ሁሉን አቀፍ የግምገማ ዘዴ እንፈልጋለን፣ይህም በ MIQE ውስጥ የተጠቀሰው የኑክሊክ አሲድ ታማኝነት ግምገማ።