PCR ማሽን|በርግጥ ይገባሃል?

የኖቤል ሽልማት አሸናፊ PCR ቴክኖሎጂ

እ.ኤ.አ. በ 1993 አሜሪካዊው ሳይንቲስት ሙሊስ በኬሚስትሪ የኖቤል ሽልማት ተቀበለ ፣ እና የእሱ ስኬት የ PCR ቴክኖሎጂ ፈጠራ ነው።የ PCR ቴክኖሎጂ አስማት በሚከተሉት ባህሪያት ውስጥ ነው-በመጀመሪያ ደረጃ የዲ ኤን ኤ መጠኑ በጣም ትንሽ ነው, እና በንድፈ ሀሳብ አንድ ሞለኪውል ለማጉላት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል;በሁለተኛ ደረጃ, የማጉላት ቅልጥፍና ከፍተኛ ነው, እና የታለመው የጂን መጠን በጣም ሰፊ ነው.ማጉላት፣ በጥቂት ሰዓታት ውስጥ ከ10 ሚሊዮን ጊዜ በላይ።አሁን የ PCR መሳሪያ በህይወት ሳይንስ ምርምር እና በሌሎች በርካታ ገፅታዎች በስፋት ጥቅም ላይ ውሏል.

የተለያዩ ሞዴሎች እና የሙቀት ሳይክሎች አምራቾች የተለያዩ አፈፃፀም እና ተደጋጋሚነት ሊያሳዩ ይችላሉ።እነዚህ ልዩነቶች የ PCR ቅልጥፍናን ብቻ ሳይሆን የተገኘውን መረጃ ትክክለኛነት እና ወጥነት ላይ ተጽእኖ ያሳድራሉ.የ PCR ማሽን ባህሪያትን መረዳታችን የሙከራዎቻችንን ስኬት ከፍ ለማድረግ ይረዳናል።

የማሞቂያ ሞጁል

የሙቀት ዑደት የሙቀት መጠን ትክክለኛነት ለ PCR ስኬት ወይም ውድቀት ወሳኝ ሊሆን ይችላል.ከጉድጓድ-ወደ-ጉድጓድ የሙቀት መጠን በሙቀት ማገጃው ላይ አስተማማኝ እና ሊባዙ የሚችሉ PCR ውጤቶችን ለማግኘት ወሳኝ ነው።

የሙቀት ትክክለኛነትን ለማረጋገጥ አንዱ መንገድ የሙቀት ማረጋገጫ መሳሪያዎችን በመጠቀም በተደጋጋሚ መሞከር እና በሰለጠነ ባለሙያ እንደ አስፈላጊነቱ እንደገና ማስተካከል ነው።የሙቀት ማረጋገጫ ሙከራዎች በተለምዶ ለሚከተሉት ጥቅም ላይ ይውላሉ:

በደንብ-ወደ-ጉድጓድ ትክክለኛነት በአይኦተርማል ሞድ ውስጥ ካለው የሙቀት መጠን ጋር ሲነፃፀር

በደንብ-ወደ-ጉድጓድ ትክክለኛነት የሙቀት መጠን ከተቀየረ በኋላ ከተዘጋጀው የሙቀት መጠን አንጻር

የሙቀት ክዳን የሙቀት ትክክለኛነት

የፕራይመር አኒሊንግ የሙቀት መቆጣጠሪያ

የግራዲየንት የሙቀት መቆጣጠሪያ በፒሲአር ውስጥ የፕሪመር ማደንዘዣን ማመቻቸትን የሚያመቻች የ PCR መሣሪያ ተግባር ነው።የግራዲየንት መቼት አላማ በሞጁሎች መካከል የተለያዩ የሙቀት መጠኖችን ማግኘት ነው፣ እና በእያንዳንዱ አምድ መካከል ≥2°C የሙቀት መጠን መጨመር እና መውደቅ፣የተለያዩ ሙቀቶችን በአንድ ጊዜ በመሞከር ጥሩውን የፕሪመር አነሊንግ የሙቀት መጠን ማግኘት ይቻላል።በንድፈ ሀሳብ፣ እውነተኛ ቅልመት በሞጁሎች መካከል ቀጥተኛ የሙቀት መጠንን ያገኛል።

ነገር ግን፣ የተለመዱ የግራዲየንት ቴርማል ሳይክሎች በተለምዶ አንድ የሙቀት ማገጃ እና የሙቀት መቆጣጠሪያ በሁለቱም ጫፎች ላይ በሚገኙ ሁለት የማሞቂያ እና የማቀዝቀዣ ንጥረ ነገሮች በመጠቀም ብዙውን ጊዜ የሚከተሉትን ውሱንነቶች ያስከትላል።

ሁለት ሙቀቶች ብቻ ሊዘጋጁ ይችላሉ፡ ለፕሪመር ማደንዘዣ ከፍተኛ እና ዝቅተኛ የሙቀት መጠኖች በሁለቱም የሙቀት ሞጁል ጫፎች ላይ ተቀምጠዋል, እና ሌሎች ሙቀቶች ትክክለኛ ቅንብር በሞዱል መካከል ሊገኙ አይችሉም.

በተለያዩ አምዶች መካከል ባለው የሙቀት ልውውጥ ምክንያት በሞጁሉ ላይ በተለያዩ ክልሎች መካከል ያለው የሙቀት መጠን ከእውነተኛ መስመራዊ ቅልመት ይልቅ የሲግሞይድ ከርቭን የመከተል ዕድሉ ከፍተኛ ነው።

የናሙና ሙቀት

ለ PCR ውጤቶች ትክክለኛነት የሙቀቱ ዑደት የናሙና ሙቀትን የመቆጣጠር ችሎታ በጣም አስፈላጊ ነው.የናሙና የሙቀት መጠንን ለመተንበይ በመሳሪያ-የተወሰኑ መለኪያዎች እንደ የራምፕ ተመኖች፣ የመጠባበቂያ ጊዜዎች እና ስልተ ቀመሮች ያሉ ወሳኝ ናቸው።

የ PCR ማሽን የማሞቅ እና የማቀዝቀዝ መጠን ማለት በተወሰነ ጊዜ ውስጥ በሚከሰቱ PCR ደረጃዎች መካከል ያለው የሙቀት መጠን ይቀየራል ማለት ነው.ሙቀቱ ከሞጁል ወደ ናሙናው ለማስተላለፍ የተወሰነ ጊዜ ስለሚወስድ የናሙናው ትክክለኛ የሙቀት እና የማቀዝቀዝ ፍጥነት ይቀንሳል.ስለዚህ የሙቀት ለውጥ ፍጥነት ፍቺ መለየት እና መረዳት ያስፈልጋል.

ከፍተኛው ወይም ከፍተኛው የሞዱል መወጣጫ ፍጥነት በሞጁሉ በጣም ትንሽ ጊዜ ውስጥ በመግፊያው ወቅት ሊያሳካው የሚችለውን ፈጣን የሙቀት ለውጥ ይወክላል።

አማካኝ የማገጃ መወጣጫ ፍጥነት ረዘም ላለ ጊዜ የሙቀት ለውጥ መጠንን ይወክላል እና የበለጠ የ PCR ማሽን ፍጥነትን ይወክላል።

ከፍተኛው የናሙና ማሞቂያ እና የማቀዝቀዝ መጠን እና አማካይ የናሙና ማሞቂያ እና የማቀዝቀዣ መጠን በናሙናው የተገኘውን ትክክለኛ የሙቀት መጠን ያንፀባርቃል.የናሙና ማሞቂያ እና ማቀዝቀዝ መጠን የ PCR ማሽን አፈፃፀም እና በ PCR ውጤቶች ላይ ያለውን ተጽእኖ የበለጠ ትክክለኛ ንፅፅር ያቀርባል.

የሳይክል መተኪያን በሚሰሩበት ጊዜ፣ በቀላሉ ለመተካት እና በ PCR ተደጋጋሚነት ላይ አነስተኛ ተፅእኖን ለማግኘት የቀደመውን ሞድ የሚያስመስል የራምፕ ተመን ፕሮግራም ያለው መሳሪያ መጠቀም ይመከራል።

የሙቀት ዑደት (thermal cycler) ናሙናው የተቀመጠው የሙቀት መጠን ከደረሰ በኋላ ብቻ እርምጃዎችን በጊዜ እንዲመራ መደረግ አለበት.በዚህ መንገድ, ናሙናው በተቀመጠው የሙቀት መጠን ውስጥ የሚቆይበት ጊዜ በአሰራር ሂደቱ ውስጥ ከሚያስፈልጉት ተጓዳኝ የዑደት ሁኔታዎች ጋር በትክክል ይጠበቃል.

የሙቀት ሳይክሎች ናሙናዎች በቅድመ ዝግጅት ፕሮግራም መሰረት በፍጥነት ወደተዘጋጀው የሙቀት መጠን እንዲደርሱ ለማድረግ ብዙ ጊዜ ውስብስብ የሂሳብ ስልተ ቀመሮችን ይጠቀማሉ።በምላሹ ስርዓት መጠን እና ጥቅም ላይ በሚውሉት PCR ፕላስቲኮች ውፍረት ላይ በመመርኮዝ ስልተ ቀመር የናሙናውን የሙቀት መጠን እና የተቀመጠውን የሙቀት መጠን ለመድረስ የሚወስደውን ጊዜ ሊተነብይ ይችላል።በእነዚህ ስልተ ቀመሮች ላይ በመተማመን፣ በሙቀት ሳይክል ሰሪው የማሞቅ ወይም የማቀዝቀዝ ሂደት፣ የማገጃው ሙቀት አብዛኛውን ጊዜ የሙቀት ማገጃ overshoot ወይም undershoot በሚባል ሂደት ከተቀመጠው እሴት ይበልጣል።እንዲህ ዓይነቱ ማዋቀር ናሙናው ከመጠን በላይ ሳይተኩስ ወይም ሳይተኩስ በተቻለ ፍጥነት ወደ የተቀመጠው የሙቀት መጠን መድረሱን ያረጋግጣል.

የሙከራ ፍሰት

የሙቀት ዑደቱን ፍሰት ሊጨምሩ የሚችሉ ምክንያቶች የራምፕ ተመኖች፣ የሙቀት ማገጃ ውቅሮች እና አውቶሜሽን መድረኮችን ማዋሃድ ያካትታሉ።

የሙቀት ዑደቱ የማሞቅ እና የማቀዝቀዝ መጠን በተቀመጠው የሙቀት መጠን ላይ የሚደርሰውን ፍጥነት ይወክላል.የሙቀት መጠኑ በፍጥነት እና በመውደቅ, PCR በፍጥነት ይሰራል, ይህም ማለት በተወሰነ ጊዜ ውስጥ ብዙ ሙከራዎችን ማጠናቀቅ ይቻላል.በተጨማሪም ፈጣን የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴዎችን በመጠቀም ሙከራዎችን ማፋጠን ይቻላል.

የሙቀት ሳይክል ሞጁል ንድፍ ለ PCR ሙከራዎችም ወሳኝ ነው።ለምሳሌ, ሊተኩ የሚችሉ ሞጁሎች በአንድ ሩጫ የናሙናዎች ብዛት ላይ ተለዋዋጭነትን ይፈቅዳሉ.በተጨማሪም ማሞቂያ ሞጁሎች በተናጥል የሚቆጣጠሩት ሞጁሎች በአንድ የሙቀት ዑደት ላይ የተለያዩ PCR ፕሮግራሞችን በአንድ ጊዜ ለማሄድ ተስማሚ ናቸው.

ለአውቶሜትድ ከፍተኛ-ተከታታይ PCR, የፓይፕቲንግ አያያዝ ስርዓትን የሚቆጣጠረው ሶፍትዌር ፕሮግራም እና ተስማሚ መሆን አለበት.አውቶሜትድ ሲስተሞች ከፍተኛ የ PCR ምላሽን ለመስራት ተስማሚ ናቸው ምክንያቱም በትንሽ የሰው ጣልቃገብነት ያለማቋረጥ ሊሰሩ ስለሚችሉ በእጅ የሙከራ ማዋቀር የሚፈጀውን ጊዜ በመቀነስ እና በተወሰነ ጊዜ ውስጥ የምላሾችን ብዛት ይጨምራሉ።

የሙቀት ሳይክሎች አስተማማኝነት ፣ ዘላቂነት እና የጥራት ማረጋገጫ

ከአፈጻጸም እና ከውጤት ችሎታዎች በተጨማሪ የ PCR ማሽን አንዳንድ ተደጋጋሚ አጠቃቀምን, የአካባቢን ጭንቀትን እና የመርከብ ሁኔታዎችን መቋቋም አለበት.አንዳንድ አምራቾች መሣሪያው እንዴት አስተማማኝነት እና የመቆየት ሙከራዎችን እንደሚያከናውን ሪፖርት ሊያደርጉ ይችላሉ።ተዛማጅ የ PCR መሣሪያ ማወቂያ የሚከተሉትን ያካትታል:

አስተማማኝነት፡ ሜካኒካል ማሽነሪዎች በተደጋጋሚ ጥቅም ላይ በሚውሉ መሳሪያዎች ላይ እንደ የሙቀት ክዳን፣ የቁጥጥር ፓነሎች/ንክኪዎች እና የሙቀት ብስክሌት ሞጁሎች ላይ ተደጋጋሚ ሙከራዎችን ለማድረግ ያገለግላሉ።

የአካባቢ ግፊት፡- የአካባቢ ክፍሎችን እንደ ሙቀት፣ እርጥበት ያሉ የተለያዩ የተለመዱ ሙከራዎችን ሁኔታዎችን ለማስመሰል መጠቀም ይቻላል።

የማጓጓዣ ሙከራ፡ መሳሪያው ያልተበላሹ የስራ ሁኔታዎች ላይ መድረሱን ለማረጋገጥ ኃይለኛ የድንጋጤ እና የንዝረት ሙከራ በአለም አቀፍ የደህንነት ማጓጓዣ ማህበር መስፈርቶች መሰረት ሊከናወን ይችላል።

PCR ማሽንን ለመጠበቅ ዋስትና እና አገልግሎት

ጥብቅ አስተማማኝነት እና የመቆየት ሙከራ ቢኖርም የሙቀት ሳይክሎች በመሳሪያው ህይወት ውስጥ ቴክኒካዊ ችግሮች መኖራቸው አይቀሬ ነው።ለአእምሮ ሰላም መሳሪያ ሲገዙ የአምራቹ ዋስትና፣ አገልግሎት እና ጥገና ግምት ውስጥ መግባት አለበት።

እንደ በቦታው ላይ / ወደ ፋብሪካ መመለስ ያሉ አገልግሎቶች ተለዋዋጭነት, የርቀት መቆጣጠሪያ አገልግሎቶች እና በጥገና ሂደት ውስጥ ያሉ መተኪያ መሳሪያዎች, ወዘተ, በስራ ውጤታማነት ላይ ያለውን ተፅእኖ ለመቀነስ.

የዋስትና ጊዜ ርዝማኔ፣ የአገልግሎቱ መመለሻ ጊዜ፣ የቴክኒክ ድጋፍ ተደራሽነት እና የባለሙያ ድጋፍ ሰጭ ባለሙያዎች ችሎታ።

የላቦራቶሪ እና ተዛማጅ የቁጥጥር መስፈርቶችን ለማሟላት የመሳሪያዎች መጫኛ, አሠራር, ትብብር እና ማረጋገጫ አዋጭነት.መሳሪያው ከተዛማጁ መመዘኛዎች ጋር በትክክል መስራቱን ለማረጋገጥ እንደ የሙቀት ማረጋገጫ፣ ሙከራ እና ማስተካከያ ያሉ የጥገና አገልግሎቶች ይገኛሉ።

ተዛማጅ ምርቶች፡