መራ

ረጅም ኮዲንግ ያልሆነ አር ኤን ኤ፣ lncRNA ከ 200 ኑክሊዮታይድ የሚበልጥ ርዝመት ያለው፣ በአጠቃላይ በ200-100000 nt መካከል ያለ ኮድ ያለው አር ኤን ኤ ነው።lncRNA በኤፒጄኔቲክ ፣ በግልባጭ እና በድህረ-ጽሑፍ ደረጃዎች ውስጥ የጂን አገላለጽ ይቆጣጠራል ፣ እና በ X ክሮሞዞም ዝምታ ፣ ጂኖም ማተም እና ክሮማቲን ማሻሻያ ፣ ወደ ጽሑፍ ቅጂ ማግበር ፣ የጽሑፍ ጣልቃገብነት ፣ የኑክሌር ማጓጓዣ ፣ የሕዋስ ዑደት ደንብ ፣ የሕዋስ ልዩነት ደንብ እና የመጠን ማካካሻ ውጤቶች (የመጠን ማካካሻ ሂደቶችን መከላከል ፣ ከሰው ልጅ ማካካሻ ጋር የተያያዙ ሌሎች በርካታ ሂደቶችን መከላከል) እና ሌሎች በርካታ የካሳ ሂደቶችን መከላከል እና ሌሎች በርካታ የማካካሻ ሂደቶችን መከላከል ናቸው ። እና በአሁኑ ጊዜ በባዮሜዲኬሽን መስክ ውስጥ ከሚገኙት ትኩስ ቦታዎች አንዱ ናቸው.

01  የ LncRNA ዓይነቶች እና ባህሪያት

ከላይ በስዕሉ ላይ እንደሚታየው lncRNA በተለያዩ የምስረታ ምንጮች መሰረት ወደ ብዙ ዓይነቶች ይከፈላል.የሚከተሉት ባህሪያት አሉት:

1. lncRNAs ብዙውን ጊዜ ረዘም ያሉ ናቸው፣ በተለዋዋጭ አገላለጽ እና በሚለዩበት ጊዜ የተለያዩ የስፕሊንግ ዘዴዎች
2. ከኮዲንግ ጂኖች ጋር ሲነጻጸር, lncRNA አብዛኛውን ጊዜ ዝቅተኛ የመግለፅ ደረጃ አለው
3. አብዛኛዎቹ lncRNAs በቲሹ መለያየት እና እድገት ሂደት ውስጥ ግልጽ የሆነ ጊዜያዊ እና የቦታ አገላለጽ ልዩነት አላቸው።
4. በእብጠት እና በሌሎች በሽታዎች ውስጥ የባህርይ መግለጫዎች አሉ
5. የ lncRNA ንዑስ ሴሉላር ሥፍራዎች የተለያዩ ናቸው።
6. ቅደም ተከተል በጥበቃ ውስጥ ዝቅተኛ ነው, ነገር ግን ተግባሩ የተወሰነ የጥበቃ ደረጃ አለው, ወዘተ.

02 ስለ LncRNA የተገላቢጦሽ ግልባጭ ተዘውትረው የሚጠየቁ ጥያቄዎች

በሴሎች ውስጥ ባለው የ lncRNA ዝቅተኛ ይዘት ፣ ረጅም ርዝመት እና ከፍተኛ-ደረጃ መዋቅር ፣ እንደዚህ ዓይነቱ አር ኤን ኤ ብዙውን ጊዜ እንደ ግንድ loops ወይም hairpins ያሉ ውስብስብ አወቃቀሮች አሉት ፣ እና RT-qPCR ለተሳሳተ ወደ ተቃራኒ የጽሑፍ ግልባጭ ወይም ዝቅተኛ ቅልጥፍና ችግሮች የተጋለጠ ነው።

03 LncRNA የተገላቢጦሽ ግልባጭ መፍትሄ

በማዕከላዊው ደንብ፣ አር ኤን ኤን እንደ አብነት በመጠቀም ዲ ኤን ኤውን ለማዋሃድ የራሳቸውን የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕት በመጠቀም የአር ኤን ኤ ቫይረሶች ሂደት የተገላቢጦሽ ግልባጭ ይባላል።የሲዲኤን አብነት በብልቃጥ ውስጥ ለማዋሃድ አር ኤን ኤ ቫይረስ reverse transcriptase የመጠቀም ሂደት የተገላቢጦሽ ግልባጭ ይባላል።በተገላቢጦሽ የጽሑፍ ግልባጭ ሥርዓት ውስጥ የተካተቱት ዋና ዋና ነገሮች፡ አር ኤን ኤ አብነት፣ የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትሴስ፣ ፕሪመር እና ሌሎች አካላት።

1.RNA አብነት

የአር ኤን ኤ አብነት በተገላቢጦሽ ግልባጭ ላይ የሚያሳድረው ተጽዕኖ በአወቃቀሩ፣ በንጽህና እና በታማኝነት ይንጸባረቃል።የወጣው አር ኤን ኤ ንፅህና እና ታማኝነት ከፍ ባለ መጠን የተገላቢጦሽ ግልባጭ ቅልጥፍና ከፍ ያለ እና ቀጣይ የቁጥር ውጤቶች ይበልጥ ትክክለኛ ይሆናሉ።በተለምዶ ጥቅም ላይ በሚውሉ የአር ኤን ኤ ኤክስትራክሽን ሪጀንቶች የተጣራው አር ኤን ኤ ብዙ ጊዜ የአልኮሆል እና የጓኒዲን ጨው ቅሪቶችን ይይዛል፣ ይህም በአብዛኛዎቹ የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትሴስ ላይ ጠንካራ የመከላከል ተጽእኖ አለው።

2. በግልባጭ ትራንስክሪፕት

የተገላቢጦሽ ግልባጭ በጠቅላላው የተገላቢጦሽ ግልባጭ ሥርዓት ውስጥ ቁልፍ ተጽዕኖ አለው።በአብዛኛዎቹ ላቦራቶሪዎች ውስጥ ጥቅም ላይ ለሚውለው የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕት ተስማሚ የሙቀት መጠን በአጠቃላይ 42 ° ሴ ነው.እንደ እውነቱ ከሆነ, የከፍተኛ ደረጃ አር ኤን ኤ መዋቅር መክፈቻ ከፍተኛ ሙቀት ያስፈልገዋል, እና ለተቃራኒው ትራንስክሪፕት የሚያስፈልጉት ነገሮች ከፍተኛ ናቸው.

3.ፕሪመር

የተገላቢጦሽ ግልባጭ ፕሪመር ጂን-ተኮር ፕሪመር፣ የዘፈቀደ ፕሪመር እና Oligo dT primers ያካትታሉ።አብዛኛዎቹ lncRNAs የ polyA ጭራዎችን አያካትቱም፣ እና የዘፈቀደ ፕሪመርሮችን ከ Oligo dT ጋር በትክክል ማዛመድ አስፈላጊ ነው።

4.ሌሎች ክፍሎች

አር ኤን ኤ ለማዋረድ በጣም ቀላል ከመሆኑ እውነታ አንፃር ፣ በተገላቢጦሽ የጽሑፍ ግልባጭ ስርዓት ውስጥ ያሉትን ክፍሎች ማስተዋወቅ ሊቀንስ ይችላል ፣ ይህም የ RNase እንዳይገባ በብቃት ይከላከላል እና የተገላቢጦሽ ግልባጭ ለስላሳ እድገትን ያረጋግጣል።

Fኦሬጂንከአር ኤን ኤ አብነት ያገኛል፣ ወደ qPCR በግልባጭ ግልባጭ

የእርስዎን lncRNA ማወቂያን ባጠቃላይ ያጅቡ

የእንስሳት ጠቅላላ አር ኤን ኤማጽናኛኪት (ከ gDNA ማስወገጃ አምድ ጋር)

የሕዋስ ጠቅላላ አር ኤን ኤማጽናኛኪት (ከ gDNA ማስወገጃ አምድ ጋር)

Lnc-RT HeroTM I(ከgDNase ጋር)(Super Premix ለአንደኛ-ክር ሲዲኤንኤ ውህደት ከ lncRNA)

እውነተኛ ጊዜ PCR EasyTM-SYBR አረንጓዴ I

Aጥቅሞች ofአር ኤን ኤ ማውጣት፡

ኪቱ የሶስተኛውን ትውልድ አር ኤን ኤ ማውጣት ቴክኖሎጂን ይጠቀማል፣ ዲናሴን መጠቀም አያስፈልግም።

11 ደቂቃ ከ96፣ 24፣ 12 እና 6-በደንብ የሰሌዳ የሰሌዳ ሴሎች፣ ከፍተኛ-ውጤታማነት ከ gDNA-ነጻ፣ ከፍተኛ-ንፅህና፣ ከፍተኛ ጥራት ያለው አጠቃላይ የሴል አር ኤን ኤ ማውጣት።

የ lncRNA የተገላቢጦሽ ግልባጭ ጥቅሞች፡-

የጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ብክለትን በፍጥነት ለማስወገድ በተለይ ለLncRNA የተሰራ የተገላቢጦሽ የመገልበጥ ስርዓት።

የተገላቢጦሽ ግልባጭ ስርዓቱ ከፍተኛ የሙቀት መረጋጋት አለው እና አሁንም በ 50 ° ሴ ጥሩ የተገላቢጦሽ አፈፃፀም አለው።

ከፍተኛ የጂሲሲ ይዘት ያላቸው እና ውስብስብ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ያላቸው አብነቶች በከፍተኛ ቅልጥፍና ሊገለበጡ ይችላሉ።

ጥቅሞችof qPCR፡

ትኩስ ጅምር Foregene Taq Polymerase ከፍተኛ የማጉላት ብቃት፣ ከፍተኛ የማጉላት ትብነት እና ከፍተኛ የማጉላት ልዩነት አለው።

የተሻሻለው ሪል ፒሲአር ቀላል ድብልቅ SYBR አረንጓዴ ከፍተኛ የመለየት ስሜት አለኝ፣ እና የፍሎረሰንት መጠኑ ከተመሳሳይ ምርቶች 3-5 እጥፍ ይበልጣል፣ ይህም የተለያዩ አይነት የፍሎረሰንት መጠናዊ ሙከራዎችን ፍላጎቶች ሊያሟላ ይችላል።