የ PCR ምላሽ አስደናቂ ባህሪው ትልቅ የማጉላት አቅሙ እና እጅግ በጣም ከፍተኛ ስሜታዊነት ነው።የ PCR አፈጻጸምን እና የመለየት ቅልጥፍናን ለማሻሻል የ PCR ማጉላት አቅምን እና የመለየት ስሜትን ለማሻሻል ቆርጠናል, ነገር ግን ራስ ምታት በሙከራው ሂደት ውስጥ ነው.የውሸት አወንታዊ ውጤቶች ብዙ ጊዜ ይከሰታሉ፣ እና በጣም ትንሽ መጠን ያለው የመስቀል ብክለት ወይም PCR ምርት መበከል በሙከራው ውስጥ የውሸት አወንታዊ ውጤቶችን ሊያስከትል ይችላል።
አምስት አይነት PCR ምርት መበከል
ለ PCR መበከል ብዙ ምክንያቶች አሉ፣ እነሱም በግምት በሚከተሉት ምድቦች ሊከፈሉ ይችላሉ።
የናሙና መበከል በዋነኝነት የሚከሰተው ናሙናውን ለመሰብሰብ መያዣው በመበከሉ ነው, ወይም ናሙናው በሚቀመጥበት ጊዜ, በመያዣው ውስጥ ልቅ በሆነ መታተም ምክንያት ይፈስሳል, ወይም ናሙናው ከመያዣው ውጭ ተጣብቋል, ይህም የመስቀል ብክለትን ያስከትላል;መበከል በናሙናዎች መካከል ወደ ብክለት ይመራል;አንዳንድ ጥቃቅን ተህዋሲያን ናሙናዎች፣ በተለይም ቫይረሶች፣ በኤሮሶል ሊሰራጭ ወይም ኤሮሶል ይፈጥራሉ፣ ይህም የእርስ በርስ መበከልን ያስከትላል።
ዋናው ምክንያት PCR reagents በሚዘጋጅበት ጊዜ የናሙና ሽጉጥ, መያዣ, ባለ ሁለት የተጣራ ውሃ እና ሌሎች መፍትሄዎች በ PCR ኑክሊክ አሲድ አብነት ተበክለዋል.
በሞለኪውላር ባዮሎጂ ላቦራቶሪዎች እና ክሎኒድ ፕላዝማይድን እንደ አወንታዊ ቁጥጥሮች በሚጠቀሙ አንዳንድ ላቦራቶሪዎች የክሎኒድ ፕላዝማድ ብክለት ችግርም የተለመደ ነው።በክፍል ውስጥ ያለው የክሎኒንግ ፕላስሚድ ይዘት በጣም ከፍተኛ ስለሆነ እና በማጥራት ሂደት ውስጥ ተጨማሪ መሳሪያዎች እና ሬጀንቶች ያስፈልጋሉ ፣ እና በህያው ሴሎች ውስጥ ያለው ፕላዝማ በህያው ሴሎች ጠንካራ የእድገት እና የመራባት ችሎታ የመበከል እድሉ ከፍተኛ ነው።
የተራቀቁ ምርቶች መበከል በ PCR ምላሽ ውስጥ በጣም የተለመደው የብክለት ችግር ነው.የ PCR ምርት ቅጂ ብዛት ትልቅ (በአጠቃላይ 1013 ቅጂ/ሚሊ) ነው፣ ይህም ከ PCR ማወቂያ ቅጂ ቁጥር ገደብ እጅግ የላቀ ስለሆነ፣ በጣም ትንሽ የሆነ የ PCR ምርት ብክለት የውሸት አወንታዊ ውጤቶችን ሊያስከትል ይችላል።
የኤሮሶል ብክለት የ PCR ምርቶችን የመበከል እድሉ ከፍተኛ ነው, እና በቀላሉ ሊታለፍ የሚገባው ነው.የተፈጠረው በፈሳሽ ወለል እና በአየር መካከል ባለው ግጭት ነው።በአጠቃላይ የኤሮሶል ብክለት ሊፈጠር የሚችለው ክዳኑ ሲከፈት፣ ናሙናው በሚመኝበት ጊዜ ወይም የአጸፋው ቱቦ በኃይል ሲናወጥ ነው።እንደ ስሌቶች ከሆነ የኤሮሶል ቅንጣት 48,000 ቅጂዎችን ሊይዝ ይችላል, ስለዚህ በእሱ ምክንያት የሚፈጠረው ብክለት ልዩ ትኩረት ሊሰጠው የሚገባ ችግር ነው.
በተለይም የሙከራ ላቦራቶሪዎች አንድን ዘረ-መል ለመፈተሽ ብዙውን ጊዜ ተመሳሳይ ጥንድ ፕሪመር ይጠቀማሉ።በጊዜ ሂደት, በቤተ ሙከራ ውስጥ ከፍተኛ መጠን ያለው PCR ምርት መበከል ይከሰታል.እንዲህ ዓይነቱ ብክለት ከተከሰተ በኋላ በአጭር ጊዜ ውስጥ ማስወገድ አስቸጋሪ ነው.
በመጀመሪያዎቹ ሶስት የብክለት ዓይነቶች ለማስወገድ ውጤታማ ዘዴዎችን መጠቀም እንችላለን ነገር ግን በ PCR ምርቶች ምክንያት የሚከሰተውን ብክለት ለመከላከል አስቸጋሪ ነው, በተለይም መደበኛ ያልሆኑ PCR ላቦራቶሪዎች በመገንባት ላይ.በ PCR ሂደት ውስጥ የ pipette ጫፍ ሲጠባ እና ፈሳሹን ሲነፍስ እና የ PCR ቱቦ ሽፋን ሲከፈት, ኤሮሶል ይፈጠራል.በኤሮሶል የተሸከሙት የዲኤንኤ ሞለኪውሎች (አንድ ኤሮሶል በአስር ሺዎች የሚቆጠሩ ዲ ኤን ኤ ሊይዝ ይችላል) በአየር ውስጥ ስለሚንሳፈፉ ለማስወገድ አስቸጋሪ ነው።የሚቀጥለው ዙር PCR ከተጀመረ በኋላ የውሸት አዎንታዊ ውጤቶች መከሰታቸው የማይቀር ነው።
ከዚህ በታች ባለው ስእል እንደሚታየው አሉታዊ መቆጣጠሪያው ተጓዳኝ የፍላጎት ባንድን አጉሏል፡
የዚህ የ PCR ብክለት እና መከላከል የመጀመሪያ ክፍል እዚህ አስተዋውቋል።የሚቀጥለው እትም ሁለተኛውን ክፍል "የ PCR ምርት ብክለትን መከላከል" ያመጣልዎታል, ስለዚህ ይጠብቁ!
የልጥፍ ጊዜ: Jul-25-2017
