ዳይሬክት PCR በቀጥታ የእንስሳትን ወይም የእፅዋትን ቲሹዎች ኑክሊክ አሲድ ሳይወጣ ለማጉላት የሚጠቀም ምላሽ ነው።በብዙ መንገዶች ቀጥታ PCR ልክ እንደ መደበኛ PCR ይሰራል

ዋናው ልዩነት በቀጥታ PCR ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውለው ብጁ ቋት ነው, ናሙናው በቀጥታ በ PCR ምላሽ ሊሰጥ ይችላል ኑክሊክ አሲድ ማውጣት ሳይኖር, ነገር ግን ለኤንዛይሞች መቻቻል እና ቀጥተኛ PCR ምላሽ ውስጥ የተሳተፈ የጠባቂው ተኳሃኝነት ተጓዳኝ መስፈርቶች አሉ.

ምንም እንኳን በጋራ ናሙናዎች ውስጥ ብዙ ወይም ያነሱ PCR አጋቾቹ ቢኖሩም፣ ቀጥተኛ PCR አሁንም በኢንዛይሞች እና በመያዣዎች እርምጃ አስተማማኝ ማጉላትን ሊያሳካ ይችላል።ባህላዊው PCR ምላሽ ከፍተኛ ጥራት ያለው ኑክሊክ አሲድ እንደ አብነት ይፈልጋል፣ ይህም አብነት ፕሮቲኖችን እና ሌሎች ቆሻሻዎችን ከያዘ የ PCR ምላሽን ለስላሳ እድገት ሊገታ ይችላል።ቀጥተኛ PCR በአሁኑ ጊዜ በሞለኪውላር ምርመራ መስክ ውስጥ በጣም ታዋቂ ከሆኑ ቴክኖሎጂዎች አንዱ ነው።

01 ዳይሬክት PCR በመጀመሪያ ለእንስሳት እና ለዕፅዋት ያገለግል ነበር።

የመጀመሪያው ቀጥተኛ PCR በእንስሳትና በእጽዋት መስክ ማለትም እንደ ደም, ቲሹ እና አይጥ ፀጉር, ድመት, ዶሮ, ጥንቸል, በግ, ከብቶች, ወዘተ, የእፅዋት ቅጠሎች እና ዘሮች, ወዘተ., ጂኖቲፒንግ, ትራንስጀኒክ, ፕላስሚድ ማወቂያን, የጂን knockout ትንታኔን, የዲኤንኤ ምንጭ መለየት, ዝርያን መለየት, የ SNP ትንተና እና ሌሎች መስኮችን ያጠናል.

እነዚህ መስኮች አንዳንድ የተለመዱ ባህሪያት አሏቸው, ማለትም የዒላማው የጂን ይዘት በአንጻራዊነት ከፍተኛ ነው እና የኒውክሊክ አሲድ ማውጣት ችግር አለበት, ስለዚህ ቀጥተኛ PCR ጊዜን መቆጠብ እና በውጤቱ ላይ ትንሽ ተጽእኖ ብቻ ሳይሆን ወጪን መቆጠብ ይችላል.

ለበሽታ አምጪ ተህዋሲያን የሚያገለግል ቀጥተኛ PCR የቅርብ ዓመታት ጉዳይ ነው ፣ አንዳንድ የ PCR reagent አምራቾች ፈጠራን በሚሰሩበት ጊዜ በዚህ አቅጣጫ ብዙ ጥረቶችን አድርገዋል።በተለይም በዚህ የኮቪድ-19 ወረርሽኝ፣ ብዙ እንደዚህ ያሉ የመለየት ምርቶች በገበያ ላይ ታይተዋል፣ ለምሳሌ SARS-CoV-2 Nucleic Acid Detection Kit (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) በForegene በምርምር እና የተገነባ፣ የእውነተኛ ጊዜ RT PCR ቴክኖሎጂን (rRT-PCR)ን በመጠቀም የ SARS-CoV-2 ን በሰው ኒውክሊክ አሲድ ናሙናዎች ውስጥ ታይቷል።

መደበኛውን ORF1ab፣ N፣ E እና ለማወቅ ቀጥታ PCR ቴክኖሎጂን ከሚጠቀሙ ኩባንያዎች አንዱ Foregene ነው።ተለዋጭ lineages ኑክሊክ አሲዶች በሰው nasopharyngeal ወይም oropharyngeal swab ናሙናዎች እንደ SARS-CoV-2 B.1.1.7 የዘር (ዩኬ), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) እና P.1 የዘር (BR).

02  ለቀጥታ PCR የሚያስፈልጉ ሬጀንቶች

ናሙና Lysate

የናሙና lysate በራስዎ ሊዋቀር ወይም ሊገዛ ይችላል።በተለያዩ የሊዛት ብራንዶች ስብጥር ውስጥ ያለው ልዩነት የመዋሸት ችሎታን የተለየ ያደርገዋል ፣ ከዚያ የውሸት ጊዜ ትንሽ የተለየ ይሆናል።ለምሳሌ የእንስሳት ቲሹ ናሙናዎችን ለማዘጋጀት ለ 30 ደቂቃዎች ወይም በአንድ ሌሊት ሊስሲስ በአጠቃላይ ይመከራል, እና ለቫይረሶች የሊሲስ መፍትሄ ከ3-10 ደቂቃዎች ይደርሳል.

PCR ዋና ድብልቅ

ልዩ ማጉላትን ለመጨመር እና የማጉላት ችሎታን ለመጨመር የሙቅ-ጅምር ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴን ለመጠቀም ይመከራል።የቀጥታ PCR ዋና አካል በጣም ታጋሽ የሆነ ፖሊመሬሴስ ነው.

በናሙናው ውስጥ የዲኤንኤ ማጉላትን የሚነኩ ክፍሎችን ያስወግዱ ወይም ያግዱ

ናሙናው በሊዛት ከተሰራ በኋላ, ፕሮቲኖች, ቅባቶች እና ሌሎች የሕዋስ ፍርስራሾች ይለቀቃሉ, እነዚህ ንጥረ ነገሮች የ PCR ምላሽን ይከላከላሉ.ስለዚህ, ቀጥተኛ PCR የእነዚህን ነገሮች ተጽእኖ ለመቀነስ ተጓዳኝ መወገድን ወይም መከላከያዎችን መጨመር ያስፈልገዋል.

03  የቀጥታ PCR አምስት የእውቀት ነጥቦች ስብስብ

በመጀመሪያ፣ Direct PCR ቴክኖሎጂ ለተለያዩ ባዮሎጂካል ናሙናዎች ቀጥተኛ PCR ቴክኖሎጂ ነው።በዚህ ቴክኒካዊ ሁኔታ ውስጥ, ኑክሊክ አሲድ መለየት እና ማውጣት አያስፈልግም, የቲሹ ናሙናውን እንደ እቃው በቀጥታ ይጠቀሙ እና የ PCR ምላሽን ለማከናወን የታለመውን የጂን ፕሪመርን ይጨምሩ.

ሁለተኛ፣ ዳይሬክት PCR ቴክኖሎጂ የባህላዊ የዲኤንኤ አብነት ማጉላት ቴክኖሎጂ ብቻ ሳይሆን የአር ኤን ኤ አብነት ተቃራኒ ቅጂ PCRንም ያካትታል።

ሦስተኛ፣ ዳይሬክት PCR ቴክኖሎጂ በቲሹ ናሙናዎች ላይ መደበኛ የጥራት PCR ግብረመልሶችን በቀጥታ ማከናወን ብቻ ሳይሆን የሪል-ታይም qPCR ምላሾችንም ያካትታል፣ይህም የምላሽ ስርዓቱ ጠንካራ ፀረ-ጀርባ የፍሎረሰንት ጣልቃገብነት አቅም እንዲኖረው እና ውስጣዊ የፍሎረሰንት ተቃራኒውን ችሎታ ያጠፋል።

አራተኛ፣ በዳይሬክት PCR ቴክኖሎጂ የታለሙ ናሙናዎች የኒውክሊክ አሲድ አብነቶችን መልቀቅ ብቻ ያስፈልጋቸዋል፣ እና የ PCR ምላሽን የሚያደናቅፉ ፕሮቲኖችን፣ ፖሊዛክካርዳይዶችን፣ የጨው ionዎችን እና የመሳሰሉትን አያስወግዱም።የኢንዛይም እንቅስቃሴን እና ውስብስብ ሁኔታዎችን የማባዛት ትክክለኛነት ለማረጋገጥ በምላሽ ስርዓቱ ውስጥ ያለው ኑክሊክ አሲድ ፖሊመሬሴ እና ፒሲአር ድብልቅ እጅግ በጣም ጥሩ የመቋቋም እና የመላመድ ችሎታን ይፈልጋል።

አምስተኛ፣ ምንም አይነት የኑክሊክ አሲድ ማበልፀጊያ ህክምና ሳይደረግበት በ Direct PCR ቴክኖሎጂ የታለመው የቲሹ ናሙና እና የአብነት መጠኑ በጣም ትንሽ ነው፣ ይህም የምላሽ ስርዓቱ እጅግ በጣም ከፍተኛ የመነካካት እና የማጉላት ብቃት እንዲኖረው ይፈልጋል።