PCR ምላሽ በሚሰጥበት ጊዜ ሁሉም ሰው እንደዚህ አይነት ወይም እንደዚህ አይነት ችግሮች ያጋጥመዋል ብዬ አምናለሁ፣ ነገር ግን አብዛኛዎቹ በሁለት ዋና ዋና ችግሮች ሊከፈሉ ይችላሉ፡

የጂን አብነት (ማጉላት) በጣም ትንሽ ማጉላት;
በጣም ብዙ ኢላማ ያልሆነ የጂን ማጉላት።
ተጨማሪዎችን መጠቀም እነዚህን ችግሮች ለመፍታት ከተለመዱት ስልቶች አንዱ ነው.ብዙውን ጊዜ ተጨማሪዎች ሚና ሁለት ገጽታዎች አሉት-
ሁለተኛ ደረጃ መዋቅርየጂኖች (ሁለተኛ መዋቅር);
ልዩ ያልሆነ ፕሪሚንግ ይቀንሱ።
ዛሬ፣ አርታዒው በ PCR ግብረመልሶች እና ተግባሮቻቸው ውስጥ ያሉትን የተለመዱ ተጨማሪዎች በአጭሩ ያስተዋውቀዎታል።
ሁለተኛ ደረጃ መዋቅርን የሚቀንሱ ተጨማሪዎች
ሰልፎክሳይድ(DMSO)
የጂን ናሙናዎችከከፍተኛ የጂ.ሲ.ሲ ይዘት ጋር .ሆኖም፣ DMSO እንዲሁ የTaq polymerase እንቅስቃሴን በእጅጉ ይቀንሳል።ስለዚህ, ሁሉም ሰው የአብነት ተደራሽነት እና የ polymerase እንቅስቃሴን ማመጣጠን አለበት.ለሙከራዎ የሚስማማውን ትኩረት ለማግኘት እንደ ከ2% እስከ 10% ያሉ የተለያዩ የ DSMO ስብስቦችን መሞከር እንደሚችሉ አዘጋጁ ይጠቁማል።
አዮኒክ ያልሆኑ ሳሙናዎች
እንደ 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 ወይም NP-40 ያሉ ​​ion-ያልሆኑ ሳሙናዎች አብዛኛውን ጊዜ የዲኤንኤ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅርን ይቀንሳሉ.ምንም እንኳን ይህ የአብነት ጂን ማጉላትን ሊጨምር ቢችልም, ልዩ ያልሆነ ማጉላት ችግርንም ያመጣል.ስለዚህ እነዚህ ተጨማሪዎች ፍርስራሾች ለሌለባቸው ዝቅተኛ ምርት PCR ምላሾች በደንብ ይሰራሉ፣ ግን በአንጻራዊነት ርኩስ ለሆኑ የPRC ምላሾች ጥሩ አይደሉም።ion-ያልሆኑ ሳሙናዎች ሌላው ጥቅም የኤስዲኤስ ብክለትን መቀነስ ነው.ብዙውን ጊዜ በዲ ኤን ኤ ማውጣት ሂደት ውስጥ, SDS ወደ PCR ደረጃ እንዲመጣ ይደረጋል, ይህም የ polymerase እንቅስቃሴን በእጅጉ ይከለክላል.ስለዚህ, 0.5% Tween-20 ወይም Tween-40 ወደ ምላሽ መጨመር የኤስ.ዲ.ኤስ አሉታዊ ተፅእኖዎችን ያስወግዳል.
ቤታይን_
ቤታይን የሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ምስረታ በመቀነስ የዲኤንኤ ማጉላትን ሊያሻሽል ይችላል እና በአጠቃላይ የንግድ PCR ኪት ውስጥ "ምስጢር" ተጨማሪ ነው.ቤታይን ለመጠቀም ከፈለጉ ቤታይን ወይም ቤታይን ሞኖ-ሃይድሬት (Betaine ወይም Betaine mono-hydrate) ማስቀመጥ አለቦት ነገር ግን ቤታይን ሃይድሮክሎራይድ (Betaine HCl) ሳይሆን ከ1-1.7M የመጨረሻ መጠን ማስተካከል።ቤታይን የዲ ኤን ኤ መቅለጥ/ዲ ኤን ኤ ዲናቱሬሽን የመሠረት ጥንድ ቅንብር ጥገኝነትን ስለሚያስወግድ ልዩነቱን ለማሻሻል ይረዳል።
ልዩ ያልሆኑ ፕሪሚንግ ለመቀነስ ተጨማሪዎች
ፎርማሚድ
ፎርማሚድ በተለምዶ ጥቅም ላይ የሚውለው ኦርጋኒክ PCR ተጨማሪ ንጥረ ነገር ነው።በዲ ኤን ኤ ውስጥ ከዋና ግሩቭ እና ከትንሽ ግሩቭ ጋር ሊጣመር ይችላል፣በዚህም የዋናው ዲኤንኤ ድርብ ሄሊክስ መረጋጋትን በመቀነስ የዲ ኤን ኤ መቅለጥ የሙቀት መጠንን ይቀንሳል።በ PCR ሙከራዎች ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውለው የፎርማሚድ መጠን በአብዛኛው ከ1% -5% ነው.
Tetramethylአሚዮኒየም ክሎራይድ( TMAC)
Tetramethylammonium ክሎራይድ hybridization (hybridization Specificity) መካከል Specificity ለመጨመር እና የዲ ኤን ኤ መቅለጥ ሙቀት መጨመር ይችላሉ.ስለዚህ፣ TMAC ልዩ ያልሆኑ ፕሪሚንግን ያስወግዳል እና የዲኤንኤ እና አር ኤን ኤ የተሳሳተ ትስስርን ይቀንሳል።ከተጠቀሙየተበላሹ ፕሪመርሮችበ PCR ምላሽ፣ በተለምዶ ከ15-100ሚ.ሜ ክምችት ላይ ጥቅም ላይ የሚውለውን TMAC መጨመር ያስታውሱ።
ሌሎች የተለመዱ ተጨማሪዎች
ከላይ ከተጠቀሱት ሁለት ተጨማሪዎች ምድቦች በተጨማሪ በ PCR ግብረመልሶች ውስጥ ብዙ የተለመዱ ተጨማሪዎች አሉ, ምንም እንኳን የተለያዩ ተግባራት ቢኖራቸውም, በጣም አስፈላጊ ናቸው.
ማግኒዥየም ion
ማግኒዥየም ion የፖሊሜሬዝ አስፈላጊ ኮፋክተር (ኮፋክተር) ነው ፣ ማለትም ፣ ያለ ማግኒዚየም ion ፣ ፖሊመሬሴ እንቅስቃሴ-አልባ ነው።ይሁን እንጂ በጣም ብዙ የማግኒዚየም ionዎች የ polymerase ቅልጥፍና ላይ ተጽእኖ ሊያሳድሩ ይችላሉ.በእያንዳንዱ PCR ምላሽ ውስጥ የማግኒዚየም ions ትኩረት ይለያያል.የማጭበርበር ወኪሎች (እንደ ኤዲቲኤ ወይም ሲትሬት ያሉ)፣ የዲኤንቲፒ እና የፕሮቲን ክምችት ሁሉም የማግኒዚየም ions ክምችት ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል።ስለዚህ፣ በ PCR ሙከራዎ ላይ ችግሮች ካጋጠሙዎት፣ የተለያዩ የማግኒዚየም ion ውህዶችን ለመቀየር መሞከር ይችላሉ፣ ለምሳሌ፣ ከ1.0 እስከ 4.0mM፣ በመካከላቸው ከ0.5-1ሚሜ ልዩነት።
ብዙ የቀዘቀዙ ዑደቶች የማግኒዚየም ክሎራይድ መፍትሄን ወደ ማጎሪያነት ሊያመራ እንደሚችል ልብ ሊባል ይገባል ።ስለዚህ ከእያንዳንዱ ጥቅም በፊት ሙሉ በሙሉ ሟሟት እና ከመጠቀምዎ በፊት በደንብ መቀላቀል አለብዎት.
የቦቪን ሴረም አልቡሚን(ቦቪን አልቡሚን፣ ቢኤስኤ)
በሞለኪውላር ኬሚስትሪ ሙከራዎች ውስጥ ቦቪን ሴረም አልቡሚን በጣም የተለመደ ተጨማሪ ነገር ነው, በተለይም በእገዳ ኢንዛይም መፈጨት እና PCR ሙከራዎች ውስጥ.በ PCR ምላሽ፣ BSA እንደ ፎኖሊክ ውህዶች ያሉ ብከላዎችን ለመቀነስ ይረዳል።እንዲሁም በሙከራ ቱቦው ግድግዳ ላይ የሬክታተሮችን ማጣበቂያ ሊቀንስ ይችላል ተብሏል።በ PCR ምላሽ ውስጥ፣ አብዛኛውን ጊዜ የ BSA መጠን መጨመር 0.8 mg/ml ሊደርስ ይችላል።
 
ተዛማጅ ምርቶች፡
PCR ጀግና(ከቀለም ጋር)
PCR ጀግና