በ PCR reagents የመጀመሪያ ደረጃ ላይ የፕሪመር እና የፍተሻዎችን አፈፃፀም ማረጋገጥ እና በጣም ተስማሚ የሆኑ የምላሽ ሁኔታዎችን መወሰን የመደበኛ ሙከራዎችን ለስላሳ እድገት ለማረጋገጥ ቅድመ ሁኔታዎች ናቸው።
ስለዚህ በመጀመሪያ ደረጃ የፕሪመር ምርመራን እንዴት ማረጋገጥ አለብን?
ዋናዎቹ አመላካቾች የመነሻ መስመር፣ የማጉላት ኩርባ፣ የሲቲ እሴት፣ የማጉላት ብቃት፣ ዝቅተኛ የማጎሪያ ናሙና ማወቂያ፣ ሲቪ፣ ወዘተ ናቸው።
መነሻ መስመር
የመነሻ መስመር በ PCR ማጉያ ጥምዝ ውስጥ ያለው አግድም መስመር ነው.በ PCR ማጉያ ምላሽ የመጀመሪያዎቹ ዑደቶች ውስጥ, የፍሎረሰንት ምልክት ብዙም አይለወጥም እና ቀጥተኛ መስመር ይፈጥራል.ይህ ቀጥተኛ መስመር መነሻ ነው.
የ PCR ፕሪመር መመርመሪያዎችን ሲፈተሽ, የመነሻ መስመሩ ደረጃ መሆኑን ወይም አለመሆኑን ትኩረት ይስጡ.የፕሪመር መመርመሪያ ትኩረት ንፅህና በመነሻው ላይ ተጽዕኖ ይኖረዋል, ለምሳሌ የመነሻ መስመሩ እንዲነሳ ወይም እንዲወድቅ ያደርጋል.የመነሻ መስመርም በጣም ሊታወቅ የሚችል አመላካች ነው.
የማጉላት ኩርባ
ሌላው ሊታወቅ የሚችል አመላካች የማጉላት ኩርባ ቅርጽ ነው.ሁለተኛ ደረጃ ማጉላትን ወይም ሌሎች ያልተለመዱ የማጉላት ኩርባዎችን ለማስወገድ የ S ቅርጽ ያለው ኩርባ መኖሩ የተሻለ ነው።
ሲቲ እሴት
ከመነሻው ወደ ገላጭ እድገቱ ከመነሻው ነጥብ ጋር የሚዛመዱ የዑደቶች ብዛት የሲቲ እሴት ነው.
ለተመሳሳይ ናሙና, የተለያዩ የፕሪመር መመርመሪያዎች የተለያዩ የማጉላት ኩርባዎችን ያስከትላሉ, እና ተዛማጅ የሲቲ እሴት በማጉላት ቅልጥፍና እና ጣልቃገብነት ደረጃ ላይ ተጽእኖ ይኖረዋል.በንድፈ ሀሳብ፣ የምንመርጠው የፕሪመር ፍተሻ አነስተኛ የሲቲ እሴት፣ የተሻለ ይሆናል።
የማጉላት ብቃት
የ PCR ማጉላት ውጤታማነትን ለመገምገም በጣም አስተማማኝ እና የተረጋጋ ዘዴዎች አንዱ መደበኛ ኩርባ ነው, እሱም በተመራማሪዎችም በሰፊው ይታወቃል.ዘዴው የዒላማ አብነቶችን አንጻራዊ ቁጥር ለመቆጣጠር ተከታታይ ናሙናዎችን ማድረግን ያካትታል.እነዚህ ናሙናዎች ብዙውን ጊዜ የሚሠሩት በተከማቸ የአክሲዮን መፍትሄዎች ተከታታይ ዳይሉሽን ነው፣ በብዛት ጥቅም ላይ የሚውለው 10-fold dilution ነው።ተከታታይ የተዳቀሉ ናሙናዎችን በመጠቀም የCq እሴትን ለማግኘት መደበኛ የqPCR ፕሮግራምን በመጠቀም እና በመጨረሻም በእያንዳንዱ ናሙና ክምችት እና በተዛማጅ Cq እሴት መሰረት መደበኛውን ኩርባ ይሳሉ።ለቁጥር ትንተና qPCR ሲጠቀሙ የማጉላት ብቃቱ ከ90% -110% (3.6>k>3.1) ክልል ውስጥ መሆን አለበት።
ዝቅተኛ-ማተኮር ናሙናዎች ማወቂያ
የናሙና ትኩረት ዝቅተኛ ሲሆን የተለያዩ የፕሪመር መመርመሪያዎች የመለየት መጠኖች የተለያዩ ናቸው.ለመድገም 20 ዝቅተኛ የማጎሪያ ናሙናዎችን እንመርጣለን, እና ከፍተኛው የመለየት ፍጥነት ያለው የፕሪመር-ፕሮብ ሲስተም በጣም ጥሩ ነው.
የልዩነት ቅንጅት (ሲቪ)
10 የተባዙ ናሙናዎች በተለያዩ የፕሪመር መመርመሪያዎች ሊገኙ ይችላሉ በሬጀንት የመስመር መስፈርት መሰረት ለኑክሊክ አሲድ ማጉላት።
መጠናዊ ሬጀንቶች፡-
ትክክለኛነት
በአንድ ባች ውስጥ ያለው ትክክለኛነት ማሟላት አለበት፡ የፍተሻ ትኩረት የሎጋሪዝም እሴት ልዩነት (CV,%) ≤5% ነው።የናሙና ትኩረቱ ዝቅተኛ ሲሆን የመለየት ትኩረት የሎጋሪዝም ልዩነት (CV,%) ≤10% ነው.
ጥራት ያላቸው መልመጃዎች;
ትክክለኛነት
በአንድ ክፍል ውስጥ ያለው ትክክለኛነት ማሟላት አለበት-
(1) የሲቲ እሴት ልዩነት (CV፣%) ≤5%
ተመሳሳይ ናሙና ለ 10 ጊዜ በትይዩ ይሞከራል, እና የፈተና ውጤቶቹ ወጥነት ያለው መሆን አለባቸው
የልጥፍ ጊዜ፡ ሴፕቴምበር-18-2021
