PCR, ብዙ PCR, በቦታው PCR, ተገላቢጦሽ PCR, RT-PCR, qPCR (1)–PCR

የተለያዩ PCR ጽንሰ-ሀሳቦችን, ደረጃዎችን እና ዝርዝሮችን እንመርጣለን

Ⅰ. PCR

ፖሊመሬሴ ቻይን ሪአክሽን፣ PCR ተብሎ የሚጠራው፣ የተወሰኑ የዲኤንኤ ቁርጥራጮችን ለማስፋት የሚያገለግል ሞለኪውላዊ ባዮሎጂያዊ ቴክኖሎጂ ነው።በብልቃጥ ውስጥ እንደ ልዩ የዲ ኤን ኤ ማባዛት ተደርጎ ሊወሰድ ይችላል።ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴ (ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ 1) በ1955 መጀመሪያ ላይ የተገኘ ሲሆን የሙከራ እሴት እና ተግባራዊነት ያለው Klenow Fragment of E. Coli በ1970ዎቹ መጀመሪያ ላይ በዶክተር ኤች ክሌኖ ተገኝቷል ነገር ግን ይህ ኢንዛይም የሙቀት መጠንን ስለማይታገስ ከፍተኛ ሙቀት ሊበላሽ ስለሚችል ከፍተኛ ሙቀት ካለው የ polymerase chain reaction ጋር አያሟላም።ዛሬ ጥቅም ላይ የዋሉት ኢንዛይሞች (ታክ ፖሊሜሬዝ ይባላሉ) በ1976 ከቴርሙስ አኳቲከስ ከተባለ ሙቅ ምንጭ ባክቴሪያ ተለይተዋል። ባህሪው ከፍተኛ ሙቀትን መቋቋም የሚችል እና ተስማሚ ኢንዛይም ቢሆንም ከ1980ዎቹ በኋላ በሰፊው ጥቅም ላይ ውሏል።በ1971 በዶ/ር ኬጄል ክሌፔ ቀርቦ የቀረበው የ PCR የመጀመሪያ ፕሪሚቲቭ ፕሮቶታይፕ የመጀመሪያ ጽንሰ-ሀሳብ ከጂን ጥገና እና ቅጂ ጋር ተመሳሳይ ነው።ዛሬ የተሰራው PCR በ1983 በዶ/ር ካሪ ቢ ሙሊስ የተዘጋጀ ነው። ዶ/ር ሙሊስ በዚያ አመት የ PE ኩባንያዎችን አገልግለዋል፣ ስለዚህ ፒኢ በ PCR ኢንዱስትሪ ውስጥ ልዩ ደረጃ አለው።ዶ / ር ሙሊስ በ 1985 ከሳይኪ እና ከሌሎች ጋር የመጀመሪያውን ተዛማጅ ወረቀት በይፋ አሳተመ. ከዚያን ጊዜ ጀምሮ የ PCR አጠቃቀም በቀን በሺዎች የሚቆጠሩ ማይሎች ነው, እና ተዛማጅ ወረቀቶች ጥራት ሌሎች በርካታ የምርምር ዘዴዎችን ጣፋጭ ያደርገዋል ሊባል ይችላል.በመቀጠል የ PCR ቴክኖሎጂ በባዮሎጂካል ሳይንሳዊ ምርምር እና ክሊኒካዊ አፕሊኬሽኖች ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል, የሞለኪውላር ባዮሎጂ ምርምር በጣም አስፈላጊ ቴክኖሎጂ ይሆናል.ሙሊስ በ1993 በኬሚስትሪ የኖቤል ሽልማት አሸንፏል።

PCRመርህ

የ PCR ቴክኖሎጂ መሰረታዊ መርህ ከዲ ኤን ኤ ተፈጥሯዊ የማባዛት ሂደት ጋር ተመሳሳይ ነው, እና ልዩነቱ የሚወሰነው ከሁለቱም የዒላማ ቅደም ተከተል ጫፎች ጋር በሚጣጣም ኦሊጎኑክሊዮታይድ ፕሪመር ላይ ነው.PCR ሶስት መሰረታዊ ምላሽ ሰጪ እርምጃዎችን ያቀፈ ነው፡ ①የአብነት ዲኤንኤ መበላሸት፡- የአብነት ዲኤንኤው ለተወሰነ ጊዜ ወደ 93 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ እንዲሞቅ ከተደረገ በኋላ በዲኤንኤው በመተው ፒሲአር በማጉላት ለተሰራው ዲኤንኤ ሁለት ሰንሰለት ያለው ዲኤንኤ መፍትሄ የሚቀጥለው ዙር ምላሽ እንዲቀላቀል አንድ ነጠላ ሰንሰለት ያድርጉት።②የአብነት ዲ ኤን ኤ እና ፕሪመር መሰርሰሪያ (ውህድ)፡ አብነት ዲኤንኤው ሞቅቶ ወደ አንድ ሰንሰለት ከተበላሸ በኋላ የሙቀት መጠኑ ወደ 55°ሴ ዝቅ ይላል።የፕሪመር ማሟያ ቅደም ተከተል እና አብነት ዲ ኤን ኤ ነጠላ ሰንሰለት።የፕሪመር ማራዘሚያ፡ የዲኤንኤ አብነት - የፕሪመር ማሰሪያው በTaqDNA polymerase ተግባር ላይ የተመሰረተ ነው፣ dNTP እንደ ምላሽ ጥሬ እቃ ነው።የማባዛት መርሆውን ያቆዩ፣ የአብነት ዲኤንኤ ሰንሰለትን የሚያሟላ አዲስ ከፊል-የተያዘ የቅጂ ሰንሰለት ያዋህዱ፣ እና የዑደት መበላሸት-ማደስ-ኤክስቴንሽን ሶስት ሂደቶች የበለጠ “በከፊል የተያዘ የቅጂ ሰንሰለት” ሊያገኙ ይችላሉ፣ እና ይህ አዲስ ሰንሰለት እንደገና ይገኛል ለቀጣዩ ዑደት አብነት ይሁኑ።ዑደቱን ለማጠናቀቅ 2-4 ደቂቃ ይወስዳል, የታለመው ጂን በ2-3 ሰዓታት ውስጥ ብዙ ሚሊዮን ጊዜ ሊጨምር ይችላል.

መደበኛPCRምላሽ ስርዓት

አምስት የ PCR ምላሽ አካላት

በ PCR ምላሽ ውስጥ በዋናነት አምስት አይነት ንጥረ ነገሮች አሉ እነሱም ፕሪመር፣ ኢንዛይም፣ ዲኤንቲፒ፣ አብነት እና ቋት (Mg2+ ያስፈልጋል)።[የ PCR አሰራር]

መደበኛ PCR ሂደት በሶስት ደረጃዎች የተከፈለ ነው

1. የዲኤንኤ መበላሸት (90°C-96°C)፡ ባለ ሁለት ሰንሰለት የዲኤንኤ አብነቶች በሙቀት እርምጃ፣ ሃይድሮጂን ቦንዶች ይቋረጣሉ፣ ነጠላ ሰንሰለት ዲኤንኤ ይመሰርታሉ።

2. Annealing (25℃ -65℃)፡ የስርአቱ የሙቀት መጠን ይቀንሳል፣ ፕሪመር ከዲኤንኤ አብነት ጋር ተጣምሮ የአካባቢ ባለሁለት ሰንሰለት ይመሰርታል።

3. ማራዘሚያ (70℃ -75℃)፡ በታቅ ኢንዛይም (72 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ገደማ፣ ምርጡ እንቅስቃሴ)፣ dNTP እንደ ጥሬ እቃው ጥቅም ላይ ይውላል፣ ከፕሪመር 5′ ጫፍ → 3′ መጨረሻ፣ ውህደት እና አብነት እርስ በርስ ይጣጣማሉ።

እያንዳንዱ ዑደት ተጥሏል፣ ተጠርጓል እና ተዘርግቷል፣ የዲኤንኤ ይዘት በእጥፍ ይጨምራል።በአሁኑ ጊዜ በአጭር የማጉላት ቦታ ምክንያት አንዳንድ PCR ምንም እንኳን የታክ ኢንዛይም እንቅስቃሴ ጥሩ ባይሆንም በጣም በአጭር ጊዜ ውስጥ ሊባዛ ይችላል, ስለዚህ ወደ ሁለት ደረጃዎች ሊቀየር ይችላል, ማለትም, ማስታገሻ እና ማራዘሚያ በ 60 ° C-65 ° ሴ በተመሳሳይ ጊዜ ይከናወናል.የማንሳት እና የማቀዝቀዝ ሂደትን ለመቀነስ እና የምላሽ ፍጥነትን ለማሻሻል.

PCR ምላሽ ባህሪያት

● ከፍተኛ-ልዩነት

የ PCR ምላሽ ልዩ ወሳኝ ነገሮች፡- ①ልዩ የፕሪመር እና የአብነት ዲኤንኤ ጥምረት።② የመሠረት ማጣመር መርህ።③የTaqDNA polymerase syntesis ምላሽ ታማኝነት።④የዒላማው ዘረ-መል ልዩነት እና ወግ አጥባቂነት።

ትክክለኛው የፕሪመር እና የአብነት ጥምረት ቁልፉ ነው።የፕሪመር እና የአብነት ማሰር እና የፕሪመር ሰንሰለት ማራዘሚያ በአልካላይን መሰረት ማዛመድ መርህ ላይ የተመሰረተ ነው.የ polymerase syntesis ምላሾች ታማኝነት እና የታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ከፍተኛ የሙቀት መጠን መቋቋም የአብነት እና ፕሪመርን ማሰር (ውህድ) ለማድረግ በከፍተኛ ሙቀት ሊከናወን ይችላል።የጥምረቱ ልዩነት በከፍተኛ ሁኔታ ይጨምራል.ቅንጥቡ ከፍተኛ ትክክለኛነትን ጠብቆ ማቆየት ይችላል።ከፍተኛ ጥንቃቄ የተሞላበት እና ከፍተኛ ጥንቃቄ የተሞላበት የጄኔቲክ ክልልን በመምረጥ, ልዩነቱ ከፍ ያለ ነው.

● ከፍተኛ ስሜታዊነት

የ PCR ምርቶች የምርት መጠን በመረጃ ጠቋሚ ጨምሯል, ይህም የፒክከርን መነሻ አብነት (PG=10-12) በማስፋፋት የማይክሮ መቆጣጠሪያውን ወደ ማይክሮግራም (μg= -6) ደረጃ ለመጨመር ያስችላል.የታለመ ሴሎች ከ 1 ሚሊዮን ሴሎች ሊገኙ ይችላሉ;ቫይረሶችን በሚታወቅበት ጊዜ የ PCR ስሜታዊነት 3 RFUs (ባዶ ነጠብጣቦች የተፈጠሩ ክፍሎች) ሊደርስ ይችላል ።በባክቴሪያ ሳይንስ ውስጥ ዝቅተኛው የመለየት መጠን 3 ባክቴሪያዎች ነው።

● ቀላል እና ፈጣን

የ PCR ነጸብራቅ ከፍተኛ የሙቀት መጠን ያለው Taq DNA polymerase ይጠቀማል, ይህም በአንድ ጊዜ የምላሽ መፍትሄን ይጨምራል, ማለትም, በዲኤንኤ ማጉላት መፍትሄ እና በውሃ መታጠቢያ ገንዳ ላይ የመበስበስ-አኔል-ማራዘሚያ ምላሽ.በአጠቃላይ የማጉላት ምላሽ ከ 2 እስከ 4 ሰዓታት ውስጥ ይጠናቀቃል.የተጨመሩ ምርቶች በአጠቃላይ በኤሌክትሪክ ሰይፍ የሚተነተኑ ናቸው, እና አይሶቶፖችን, ራዲዮአክቲቭ ብክለትን እና ቀላል ማስተዋወቅን መጠቀም የለባቸውም.

● የናሙናው ንፅህና ዝቅተኛ ነው።

ቫይረሶችን ወይም ባክቴሪያዎችን እና የባህል ሴሎችን መለየት አያስፈልግም.የዲ ኤን ኤ ጥሬ ምርቶች እና አር ኤን ኤ እንደ ማጉያዎች ሊያገለግሉ ይችላሉ።የዲኤንኤ ማጉላት ማወቂያ እንደ ደም፣ የሰውነት ፈሳሽ፣ ሳል ማጠቢያ ፈሳሽ፣ ፀጉር፣ ህዋሳት እና ህያው ቲሹ ያሉ ክሊኒካዊ ናሙናዎችን በመጠቀም በቀጥታ መጠቀም ይቻላል።

PCRየተለመዱ ችግሮች

● የውሸት አሉታዊ፣ ምንም የተጨመሩ ባንዶች የሉም

የ PCR ምላሽ ቁልፍ ደረጃዎች የሚከተሉትን ያካትታሉ፡- ① የአብነት ኑክሊክ አሲዶችን ማዘጋጀት፣ ② የፕሪመርስ ጥራት እና ልዩነት፣ ③ የኢንዛይሞች ጥራት ④ PCR ዑደት ሁኔታዎች።ምክንያቱን ማግኘቱም ከላይ ለተጠቀሱት ሊንኮች መተንተንና መጠናት አለበት።

አብነቶች፡ ① አብነቱ ልዩ ልዩ ፕሮቲን ይዟል፣ ② አብነቱ Taq ኢንዛይም አጋቾቹን ይዟል፣ ③ በአብነት ውስጥ ያለው ፕሮቲን አይጠፋም፣ በተለይም በክሮሞሶም ውስጥ ያለው የቡድን ፕሮቲን።⑤ የዲሚነር ኑክሊክ አሲድ መበስበስ ሙሉ በሙሉ አይደለም።የኢንዛይሞች እና የፕሪመርስ ጥራት ጥሩ ሲሆኑ, ምንም የማጉላት ባንድ የለም, ይህም በአብዛኛው የናሙናዎች የምግብ መፍጫ ሥርዓት ነው.በአብነት ኑክሊክ አሲድ የማውጣት ሂደት ላይ የሆነ ችግር አለ፣ ስለዚህ ውጤታማ እና የተረጋጋ የምግብ መፈጨት መፍትሄ ለማዘጋጀት አሰራሩ መስተካከል አለበት እና በዘፈቀደ መለወጥ የለበትም።

ኢንዛይም አለማግበር፡ አዲስ ኢንዛይም ወይም ሁለቱም አሮጌ እና አዲስ ኢንዛይሞች በአንድ ላይ ጥቅም ላይ መዋል አለባቸው የኢንዛይም እንቅስቃሴ ጠፍቷል ወይም በቂ አለመሆኑን ለመተንተን ወደ ሀሰት አሉታዊ ውጤቶች ያመራል.ታክ ኢንዛይም ወይም ኤቲዲየም ብሮማይድ አንዳንድ ጊዜ እንደሚረሳ ልብ ሊባል ይገባል.

ፕሪመር፡ የፕሪመር ጥራት፣ የፕሪመር ትኩረት፣ እና የሁለቱ ፕሪመርሮች መጠን የተመጣጠነ መሆን አለመሆኑን።ለ PCR ውድቀት የተለመደ ምክንያት ነው ወይም እየጨመረ ያለው ባንድ ተስማሚ እና ለመበተን የተጋለጠ አይደለም.በአንዳንድ የቡድን ቁጥሮች ፕሪመር ጥራት ላይ ችግሮች አሉ።ሁለቱ ፕሪመርሮች ከፍተኛ ትኩረት እና ዝቅተኛ ትኩረት አላቸው, ይህም ዝቅተኛ-ውጤታማነት asymmetric ማጉላት ያስከትላል.የመከላከያ እርምጃዎች የሚከተሉት ናቸው፡- ① ክፍሎችን ለማዋሃድ ጥሩ ፕሪመር ይምረጡ።② የፕሪመር መጠኑ በ OD እሴት ላይ ብቻ የተመካ አይደለም, ነገር ግን የአጋር ስኳር ጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ ለመሥራት ለፕሪመር ኦሪጅናል ፈሳሽ ትኩረት ይሰጣል.የፕሪመር ስትሪፕ ዞን መኖር አለበት, እና የሁለቱ ፕሪመር ብሩህነት በአጠቃላይ ወጥነት ያለው መሆን አለበት.Belt, PCR በዚህ ጊዜ ሊሳካ ይችላል, እና በፕሪመር ውህድ ክፍል መፍታት አለበት.ፕሪመር ከፍ ያለ ከሆነ, ብሩህነት ዝቅተኛ ነው, እና ትኩረቱ ሲቀልጥ ሚዛናዊ መሆን አለበት.③ የፍሪጁን ብዙ ቅዝቃዜ ወይም የረዥም ጊዜ ማቀዝቀዣ ክፍሎችን ለመከላከል ፕሪመር ተከፍሎ በከፍተኛ ትኩረት ማከማቸት አለበት፣ ይህም ፕሪመር እንዲበላሽ እና እንዲቀንስ ያደርጋል።④ የፕሪመር ዲዛይኑ ምክንያታዊ አይደለም, ለምሳሌ የፕሪመር ርዝመት በቂ አይደለም, እና የዲ ክላስተር በፕሪሚየር መካከል ይመሰረታል.

Mg2+ማጎሪያ፡ Mg2+ion ትኩረት በ PCR ማጉላት ውጤታማነት ላይ ትልቅ ተጽእኖ አለው።ከመጠን በላይ ትኩረት መስጠት PCR ማጉላት ተቃራኒ ጾታን ሊቀንስ ይችላል.ትኩረቱ በጣም ዝቅተኛ ከሆነ የ PCR ማጉላት ውፅዓት እንኳን ያለ ማስፋፊያ ባንድ PCR ማጉላት እንዲሳካ ያደርገዋል።

የምላሽ መጠን ለውጥ፡- በ PCR ማጉላት የሚጠቀመው የድምጽ መጠን 20ul, 30ul, እና 50ul ወይም 100uL ነው, ትልቅ መጠን ለ PCR ማጉላት የሚቀርበው በተለያዩ የሳይንሳዊ ምርምር እና ክሊኒካዊ ሙከራዎች ዓላማዎች መሰረት ነው.እንደ 20ul ያሉ ትናንሽ ጥራዞችን ካደረጉ በኋላ, መጠኑን በሚሰሩበት ጊዜ የገመድ ሁኔታን ማዘጋጀት አስፈላጊ ነው, አለበለዚያ ግን አይሳካም.

አካላዊ ምክንያቶች፡ ትራንስፎርሜሽን ለ PCR ማጉላት በጣም አስፈላጊ ነው።የመበላሸቱ ሙቀት ዝቅተኛ ከሆነ, የመበስበስ ጊዜው አጭር ነው, በሐሰት አሉታዊ ሁኔታዎች ውስጥ ሊከሰት ይችላል;በጣም ዝቅተኛ የማደንዘዣ ሙቀት ልዩ ያልሆነ ማጉላትን ሊያስከትል እና የተወሰነ የማጉላት ቅልጥፍናን ሊቀንስ ይችላል።PCR የማጉላት ቅልጥፍናን ለመቀነስ የፕሪመር እና የአብነት ጥምር ላይ ከፍተኛ ተጽዕኖ ያሳድሩ።አንዳንድ ጊዜ መደበኛ ቴርሞሜትሮችን መጠቀም አስፈላጊ ነው ተለዋዋጭነት, ማራዘሚያ እና የተራዘመ የሙቀት መጠን በማራዘሚያ ወይም በውሃ ውስጥ የሚሟሟ ማብሰያ, ይህም ለ PCR ውድቀት አንዱ ምክንያት ነው.

የዒላማ ቅደም ተከተል ልዩነቶች፡ የዒላማው ቅደም ተከተል ከተፈጠረ፣ ሚውቴሽን ወይም መሰረዝ፣ የፕሮቶታይፕ እና የአብነት ውህደት ሲጣመሩ ወይም በዒላማ ቅደም ተከተል እጥረት ምክንያት ፕሪመር እና አብነት ተጨማሪውን ቅደም ተከተል ያጣሉ እና የ PCR ማጉላት ስኬታማ አይሆንም።

● የውሸት አዎንታዊ

የ PCR ማጉላት ባንድ ከዒላማው ተከታታይ ባንድ ጋር ወጥነት ያለው ሆኖ ይታያል፣ እና አንዳንድ ጊዜ ባንዱ የበለጠ ንጹህ እና ከፍ ያለ ነው።

የፕሪመር ንድፍ አግባብነት የለውም፡ የተመረጠው የማጉላት ቅደም ተከተል እና ዓላማ የሌለው የማጉላት ቅደም ተከተል ተመሳሳይነት አለው, ስለዚህ PCR ሲጨምር, የተጨመሩ PCR ምርቶች ዓላማ የሌላቸው ቅደም ተከተሎች ናቸው.የዒላማው ቅደም ተከተል በጣም አጭር ነው ወይም ፕሪመር በጣም አጭር ነው, እና ለሐሰት አዎንታዊ የተጋለጠ ነው.እንደገና መንደፍ ያስፈልጋል።

የዒላማ ቅደም ተከተል ወይም የማጉላት ምርቶች መሻገር፡- ለዚህ ብክለት ሁለት ምክንያቶች አሉ፡ በመጀመሪያ ደረጃ የአጠቃላይ ጂኖም ወይም ትላልቅ ክፍሎችን መበከል ወደ ሐሰት አወንታዊ ውጤቶች ያመራል።የዚህ ዓይነቱ የውሸት አወንታዊ ውጤት በሚከተሉት ዘዴዎች ሊፈታ ይችላል፡- በቀዶ ጥገናው ወቅት ጥንቃቄ እና ረጋ ያለ ጥንቃቄ ያድርጉ እና የታለመው ቅደም ተከተል ወደ ናሙና ሽጉጥ ውስጥ እንዳይተነፍስ ወይም ከሴንትሪፉጋል ቱቦ ውስጥ እንዳይረጭ ለመከላከል።ከፍተኛ ሙቀትን መቋቋም የማይችሉ ኢንዛይሞች እና ንጥረ ነገሮች ካልሆነ በስተቀር ሁሉም ሬጀንቶች ወይም መሳሪያዎች በከፍተኛ ግፊት መበከል አለባቸው.የሴንትሪፉጋል ቧንቧዎች እና ናሙናዎች በአንድ ጊዜ ጥቅም ላይ መዋል አለባቸው.አስፈላጊ ሆኖ ሲገኝ, ናሙናዎችን ከመጨመራቸው በፊት, የምላሽ ቱቦ እና ሪጀንት ያለውን ኑክሊክ አሲድ ለማጥፋት ለአልትራቫዮሌት ጨረሮች ይጋለጣሉ.በሁለተኛ ደረጃ, በአየር ብክለት ውስጥ ትናንሽ ቁርጥራጮች.እነዚህ ትናንሽ ቁርጥራጮች ከዒላማው ቅደም ተከተል አጠር ያሉ ናቸው, ግን የተወሰኑ ግብረ-ሰዶማዊነት አላቸው.እርስ በርስ ሊጣመር ይችላል.ፕሪሚኖችን ካሟሉ በኋላ, PCR ምርቱ ሊሰፋ ይችላል, ይህም የውሸት አወንታዊ ምርትን ያመጣል.የጎጆ PCR ዘዴን ለመቀነስ ወይም ለማጥፋት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል.

● ልዩ ያልሆነ የማጉላት ባንድ

ከ PCR ማጉላት በኋላ የታዩት ባንዶች ከሚጠበቀው መጠን፣ ወይም ትልቅ ወይም ትንሽ፣ ወይም በተመሳሳይ ጊዜ፣ ወይም በተመሳሳይ ጊዜ፣ የተወሰኑ የማጉላት ባንዶች እና ልዩ ያልሆኑ የማጉላት ባንዶች ጋር የማይጣጣሙ ናቸው።ልዩ ያልሆኑ ባንዶች ብቅ ማለት፡- በመጀመሪያ፣ ፕሪመርዎቹ ከዒላማው ቅደም ተከተል ጋር ያልተሟሉ ናቸው፣ ወይም የፕሪመር ፖሊመርዜሽን ዲ ክላስተር ለመፍጠር።ሁለተኛው የ MG2 + ions ትኩረት በጣም ከፍተኛ ነው, የአነቃቂው የሙቀት መጠን በጣም ዝቅተኛ ነው, እና የ PCR ዑደቶች ብዛት ይዛመዳል.በሁለተኛ ደረጃ የኢንዛይሞች ጥራት እና መጠን.ብዙውን ጊዜ, የአንዳንድ ምንጮች ኢንዛይሞች ለየት ያሉ ላልሆኑ ባንዶች የተጋለጡ ናቸው እና የሌላኛው ምንጭ ኢንዛይሞች አልተከሰቱም.አንዳንድ ጊዜ ልዩ ያልሆኑ የኢንዛይሞች ማጉላትም ይከሰታል።የመከላከያ እርምጃዎች አስፈላጊ ከሆነ እንደገና የተነደፉ ማራኪዎች ናቸው.የኢንዛይም መጠን ይቀንሱ ወይም የሌላ ምንጭ ኢንዛይም ይተኩ.ዋናውን መጠን ይቀንሱ፣ የአብነቶችን መጠን በትክክል ይጨምሩ እና የዑደቶችን ብዛት ይቀንሱ።የመረበሽ ሙቀትን በትክክል ይጨምሩ ወይም ሁለቱን የሙቀት ነጥብ ዘዴ ይጠቀሙ (93 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ መበላሸት ፣ ማደንዘዝ እና በ 65 ዲግሪ ሴንቲግሬድ አካባቢ ማራዘም)።

● የሚጎተት ወይም ስሚር ቴፕ ይታይ

PCR ማጉላት አንዳንድ ጊዜ የሚተገበር ወይም የተሸጎጠ ወይም ምንጣፍ የሚመስል ቀበቶ ይመስላል።በዚ ምኽንያት እዚ ኸኣ፡ ብዛዕባ ኤንዛይም ወይ ጥራሕ ዘይኰነስ፡ የዲኤንቲፒ ንጥፈታት፡ ማይግ 2+ ንእሽቶ ኽትከውን ትኽእል ኢኻ፡ ንኻልኦት ምዃንካ ምፍላጥና፡ ንዑደት ዑደቶም ንዚምልከት እዩ።የመከላከያ እርምጃዎች የሚከተሉት ናቸው፡ ①የኢንዛይሞችን መጠን ይቀንሱ ወይም የሌላ ምንጭ ኢንዛይም ይቀይሩ።②የዲኤንቲፒ ትኩረትን ይቀንሱ ③Mg2+ ትኩረትን በአግባቡ ይቀንሱ።④ የአብነቶችን ብዛት ይጨምሩ እና የዑደቶችን ብዛት ይቀንሱ።

ተዛማጅ ምርቶች

PCR Heroᴹ (ከዳይ ጋር)

◮ ከፍተኛ ታማኝነት: ከተራ ታክ ኢንዛይም 6 እጥፍ;

◮ ፈጣን የማጉላት ፍጥነት

◮ ተጨማሪ የአብነት መላመድ

◮ ከፍተኛ የማጉላት ብቃት

◮ የአካባቢ መቻቻል የበለጠ ጠንካራ ነው: ለአንድ ሳምንት በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ማስቀመጥ, ከ 90% በላይ እንቅስቃሴን መጠበቅ;

3'

PCR Easyᴹ (ከዳይ ጋር)

የልዩ ምላሽ ስርዓት እና ከፍተኛ ብቃት ያለው Taq DNA Polymerase የ PCR ምላሽ ከፍተኛ የማጉላት ብቃት፣ ልዩነት እና ስሜታዊነት እንዲኖረው ያደርጉታል።

RT-qPCR Easyᵀᴹ (አንድ እርምጃ)-SYBR አረንጓዴ I

◮ አንድ-ደረጃ ኪት በግልባጭ ወደ ጽሑፍ ቅጂ እና qPCR በአንድ ቱቦ ውስጥ ሁለት ግብረመልሶችን ያደርጋል፣ አብነት አር ኤን ኤን፣ የተወሰኑ PCR primers እና RNase-free ddH ማከል ብቻ ያስፈልገዋል።₂O.

◮ ኪቱ በፍጥነት እና በብቃት በቁጥር የቫይራል አር ኤን ኤ ወይም መከታተያ አር ኤን ኤ መተንተን ይችላል።

◮ ኪቱ ልዩ የሆነ የForegene ግልበጣ ቅጂ reagent እና Foregene HotStar Taq DNA Polymerase ከተለየ የምላሽ ስርዓት ጋር በማጣመር የምላሹን የማጉላት ቅልጥፍና እና ልዩነት ይጠቀማል።

◮ የተመቻቸ የምላሽ ስርዓት ምላሹ ከፍተኛ የመለየት ስሜት፣ ጠንካራ የሙቀት መረጋጋት እና የተሻለ መቻቻል እንዲኖረው ያደርገዋል።

◮ RT-qPCR ቀላል^TM(አንድ እርምጃ)-SYBR Green I ኪት ከ ROX ውስጣዊ ማመሳከሪያ ቀለም ጋር አብሮ ይመጣል፣ ይህም የሲግናል ዳራ እና በጉድጓድ መካከል የሚፈጠሩ ስህተቶችን ለማስወገድ የሚያገለግል ሲሆን ይህም ደንበኞች በተለያዩ የቁጥር PCR መሳሪያዎች ሞዴሎች ለመጠቀም ምቹ ነው።

RT ቀላል^TMII (ማስተር ፕሪሚክስ ለ የመጀመሪያ ደረጃ ሲዲኤንኤ ውህደት ለእውነተኛ ጊዜ PCR)

በ2 ደቂቃ ውስጥ gDNA ን በአብነት ውስጥ ማስወገድ የሚችል gDNA ን የማስወገድ ብቃት።

- ቀልጣፋ የተገላቢጦሽ ግልባጭ ሥርዓት፣ የመጀመሪያውን ሲዲኤንኤ ውህደቱን ለማጠናቀቅ 15 ደቂቃ ብቻ ይወስዳል።

-ውስብስብ አብነቶች፡ ከፍተኛ የጂሲሲ ይዘት ያላቸው እና ውስብስብ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ያላቸው አብነቶች በከፍተኛ ቅልጥፍና ሊገለበጡ ይችላሉ።

-ከፍተኛ-ስሜታዊነት የተገላቢጦሽ ግልባጭ ሥርዓት፣ pg-ደረጃ አብነቶች ከፍተኛ ጥራት ያለው ሲዲኤንኤ ማግኘት ይችላሉ።

- የተገላቢጦሽ ግልባጭ ሲስተም ከፍተኛ የሙቀት መረጋጋት አለው ፣ ጥሩው የምላሽ ሙቀት 42 ℃ ነው ፣ እና አሁንም በ 50 ℃ ላይ ጥሩ የተገላቢጦሽ አፈፃፀም አለው።