የመስማት ችግር (HL) በሰዎች ውስጥ በጣም የተለመደ የስሜት ህዋሳት በሽታ ነው.በበለጸጉ አገሮች ውስጥ 80% የሚሆኑት በልጆች ላይ ከቋንቋ በፊት መስማት የተሳናቸው ጉዳዮች በጄኔቲክ ምክንያቶች ይከሰታሉ.በጣም የተለመዱት የነጠላ ጂን ጉድለቶች (በሥዕል 1 ላይ እንደሚታየው) 124 የጂን ሚውቴሽን በሰዎች ላይ ከማይመሳሰል የመስማት ችግር ጋር ተያይዘው ተገኝተዋል፣ የተቀሩት በአካባቢ ሁኔታዎች የተከሰቱ ናቸው።ኮክሌር ተከላ (በውስጠኛው ጆሮ ውስጥ የተቀመጠ የኤሌክትሮኒካዊ ማነቃቂያ በቀጥታ ወደ የመስማት ችሎታ ነርቭ የሚሰጥ ኤሌክትሮኒካዊ መሳሪያ) እስካሁን ድረስ ለከባድ ኤች ኤል ሕክምና በጣም ውጤታማው አማራጭ ሲሆን የመስሚያ መርጃ (ውጫዊ የኤሌክትሮኒክስ መሣሪያ የድምፅ ሞገዶችን የሚቀይር እና የድምፅ ሞገዶችን የሚያሰፋ) መካከለኛ HL በሽተኞችን ይረዳል ።ይሁን እንጂ በአሁኑ ጊዜ በዘር የሚተላለፍ HL (GHL) ለማከም ምንም ዓይነት መድኃኒቶች የሉም።በቅርብ ዓመታት ውስጥ የጂን ቴራፒ ውስጣዊ ጆሮን ለማከም እንደ ተስፋ ሰጭ አቀራረብ እየጨመረ ትኩረት አግኝቷል.
ምስል1.ከመስማት ችግር ጋር የተያያዘ የልዩነት አይነት ስርጭት።[1]
በቅርብ ጊዜ, የሳልክ ኢንስቲትዩት እና የሼፊልድ ዩኒቨርሲቲ ሳይንቲስቶች በሞለኪዩላር ቴራፒ - ዘዴዎች እና ክሊኒካል ልማት [2] የምርምር ውጤት አሳትመዋል, ይህም በ Vivo ጂን በዘር የሚተላለፍ የመስማት ችግር ሰፊ የመተግበሪያ ተስፋዎችን አሳይቷል.በሳልክ ኢንስቲትዩት ረዳት የምርምር ፕሮፌሰር እና የዋትት ሴንተር ለላቀ ባዮፎቶኒክስ ዳይሬክተር የሆኑት ዩሪ ማኖር በከባድ የመስማት ችግር መወለዱን እና የመስማትን መልሶ ማቋቋም ድንቅ ስጦታ እንደሆነ ተሰምቷቸው ነበር።ቀደም ሲል ያደረገው ምርምር Eps8 የአክቲን ትስስር እና የካፒንግ እንቅስቃሴዎች ያለው የአክቲን ተቆጣጣሪ ፕሮቲን ነው;በኮክሌር ፀጉር ሴሎች ውስጥ፣ በ Eps8 ከ MYO15A፣ WHIRLIN፣ GPSM2 እና GNAI3 ጋር የፈጠረው የፕሮቲን ውስብስብ በዋነኛነት አለ የረዥም stereocilia ምክሮች ከ MYO15A ጋር ባአፕ2ኤል2ን ባጭሩ ስቴሪዮሲሊያ ተተርጉመው ፀጉርን ለመንከባከብ ይጠበቅባቸዋል።ስለዚህ, Eps8 ለወትሮው የመስማት ተግባር አስፈላጊ የሆነውን የፀጉር ሴሎች ስቴሪዮሲሊያን ርዝመት መቆጣጠር ይችላል;Eps8 መሰረዝ ወይም ሚውቴሽን ወደ አጭር ስቴሪዮሲሊያ ይመራል፣ ይህም ለአእምሮ ግንዛቤ ድምፅን ወደ ኤሌክትሪክ ሲግናሎች በትክክል መለወጥ እንዳይችል ያደርገዋል፣ ይህ ደግሞ ወደ መስማት አለመቻል ይመራል።.የሼፊልድ ዩኒቨርሲቲ ፕሮፌሰር የሆኑት ዋልተር ማርኮቲ በተመሳሳይ ጊዜ የፀጉር ሴሎች Eps8 በማይኖርበት ጊዜ በተለመደው ሁኔታ ማደግ አይችሉም.በዚህ ጥናት ውስጥ፣ Manor እና Marcotti Eps8ን ወደ ስቴሪዮሲሊያሪ ህዋሶች ማከል ተግባራቸውን ወደነበረበት እንዲመለስ እና በምላሹም በአይጦች ላይ የመስማት ችሎታን ማሻሻል ይችል እንደሆነ ለመመርመር አንድ ላይ ተባብረዋል።የምርምር ቡድኑ የዱር-አይነት EPS8 የያዘውን የኮድ ቅደም ተከተል ወደ Eps8-/- አዲስ የተወለደ P1-P2 አይጥ በክብ መስኮት ሽፋን መርፌ ለማድረስ adeno-associated virus (AAV) vector Anc80L65 ተጠቅሟል።በመዳፊት cochlear ፀጉር ሕዋሳት ውስጥ stereocilia ያለውን ተግባር ከመብሰላቸው በፊት ተስተካክሏል;እና የጥገናው ውጤት በምስል ቴክኖሎጂ እና ስቴሪዮሲሊያን በመለካት ተለይቷል.ውጤቶቹ እንደሚያሳዩት Eps8 የስቴሪዮሲሊያን ርዝማኔ እንዲጨምር እና የፀጉር ሴሎችን ዝቅተኛ ድግግሞሽ ሴሎች ወደነበረበት እንዲመለስ አድርጓል.በተጨማሪም ከጊዜ በኋላ ሴሎቹ በዚህ የጂን ሕክምና የመዳን አቅማቸውን ያጡ ይመስላሉ.አንድምታው ይህ ህክምና በማህፀን ውስጥ መሰጠት ያስፈልገው ይሆናል፣ ምክንያቱም Eps8-/- የፀጉር ሴሎች አይጥ ከተወለዱ በኋላ ሊጠገኑ በማይችሉበት ሁኔታ የበሰለ ወይም የተከማቸ ጉዳት ደርሶባቸዋል።"Eps8 ብዙ የተለያዩ ተግባራት ያለው ፕሮቲን ነው፣ እና አሁንም ብዙ የሚመረመሩ ነገሮች አሉ" ሲል ማኖር ተናግሯል።ወደፊት የሚደረጉ ጥናቶች የ Eps8 ዘረ-መል (ጅን) ሕክምና በተለያዩ የእድገት ደረጃዎች የመስማት ችሎታን ወደነበረበት መመለስ እና የሕክምና እድሎችን ማራዘም ይቻል እንደሆነ መመርመርን ያካትታል።እንደ አጋጣሚ ሆኖ፣ እ.ኤ.አ. በኖቬምበር 2020 በእስራኤል የቴል አቪቭ ዩኒቨርሲቲ ፕሮፌሰር ካረንቢ አቭራሃም ውጤቶቻቸውን EMBO ሞለኪውላር ሜዲሲን በተባለው መጽሔት ላይ አሳትመዋል ፣ ይህም አዲስ የጂን ቴራፒ ቴክኖሎጂን በመጠቀም ጉዳት የሌለው ሰው ሰራሽ አዴኖ-ተጓዳኝ ቫይረስ AAV9-PHP።B, በ Syne4-/- አይጦች የፀጉር ሴሎች ላይ ያለው የጂን ጉድለት ተስተካክሏል የሲኒ 4 ኮድ አሰጣጥ ቅደም ተከተል የያዘ ቫይረስ ወደ አይጥ ውስጠኛው ጆሮ ውስጥ በመግባት ወደ ፀጉር ሴሎች እንዲገባ እና የተሸከሙትን ጄኔቲክ ቁስ እንዲለቁ በማድረግ እንዲበስሉ እና በተለምዶ እንዲሰሩ ያስችላቸዋል (ምስል 2).
ምስል2.በኮርቲ ኦርጋን እና በኔስፕሪን-4 ሴሉላር ተግባር ላይ በማተኮር የውስጣዊው ጆሮ የሰውነት አካል ንድፍ ውክልና.
በዘር የሚተላለፉ በሽታዎችን በጂን ደረጃ የማከም ዓላማን ለማሳካት የጂን ቴራፒን መጠቀም ማንኛውንም ሚውቴሽን ጂኖችን በማስገባት፣ በማስወገድ ወይም በማረም (ይህም የበሽታውን የዘረመል ለውጥ በመቆጣጠር) ከፍተኛ ክሊኒካዊ ውጤት እንዳለው መገንዘብ ይቻላል።የመተግበሪያ ተስፋዎች.የጄኔቲክ እጥረት ላለባቸው መስማት የተሳናቸው የጂን ሕክምና ዘዴዎች በሚከተሉት ምድቦች ሊከፈሉ ይችላሉ.
የጂን መተካት
የጂን መተካት ጉድለት ያለበትን ጂን በመለየት እና በመደበኛ ወይም በዱር-አይነት የጂን ቅጂ በመተካት ላይ በመመስረት በጣም “ቀጥተኛ” የጂን ሕክምና ነው ሊባል ይችላል።የ vesicular glutamate ማጓጓዣ 3 (VGLUT3) ጂን በመደምሰስ ምክንያት ለሚከሰት የመስማት ችግር የመጀመሪያ ስኬታማ የውስጥ ጆሮ የጂን ሕክምና ጥናት;ውጫዊ VGLUT3 በውስጥ ጆሮ ፀጉር ሕዋሳት (IHCs) ውስጥ AAV1-መካከለኛ ማድረስ ቀጣይነት ያለው የመስማት ማገገምን፣ ከፊል ሪባን ሲናፕቲክ ሞርፎሎጂ ማገገም እና የሚያደናቅፉ ምላሾች [4] ሊያስከትል ይችላል።ነገር ግን ከላይ በመግቢያው ላይ የተገለጹትን ሁለቱ የ AAV-delivered ዘረ-መል (ጅን) መተካትን ጨምሮ በምሳሌዎቹ ላይ ለተወሰኑ የጂን መሰረዝ ዓይነቶች ጥቅም ላይ የሚውሉት የመዳፊት ሞዴሎች በዘር የሚተላለፍ የመስማት ችግር በጊዜያዊነት ከሰዎች የተለዩ መሆናቸውን እና በ P1 አይጦች ውስጥ የውስጥ ጆሮ በአዋቂ የእድገት ደረጃ ላይ እንደሚገኝ ልብ ሊባል ይገባል።በአንጻሩ ግን ሰዎች የተወለዱት የበሰለ ውስጣዊ ጆሮ ነው።ይህ ልዩነት የጂን ቴራፒ ለበሰሉ አይጥ ጆሮዎች ካልደረሰ በስተቀር የመዳፊት ውጤቶችን ለሰው ልጅ በዘር የሚተላለፍ የመስማት ችግርን ለማከም ሊደረጉ የሚችሉ ችግሮችን ይከላከላል።
የጂን ማስተካከያ፡ CRISPR/Cas9
ከ "ጂን መተካት" ጋር ሲነጻጸር, የጂን አርትዖት ቴክኖሎጂ እድገት የጄኔቲክ በሽታዎችን ከሥሩ ሥር የማከም ንጋት አምጥቷል.በአስፈላጊ ሁኔታ, የጂን አርትዖት ዘዴ ለዋነኛ በዘር የሚተላለፍ መስማት ለተሳናቸው በሽታዎች ተስማሚ ያልሆኑ ባህላዊ ከመጠን ያለፈ ዘረመል ሕክምና ዘዴዎች ድክመቶችን የሚሸፍን ነው, እና ከመጠን ያለፈ ዘዴ ለረጅም ጊዜ አይቆይም ያለውን ችግር.የቻይና ተመራማሪዎች AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2 ጂን አርትዖት ስርዓት በመጠቀም Myo6C442Y ሚውቴሽን allele ውስጥ Myo6WT/C442Y አይጥ ካጠፉት በኋላ እና ማንኳኳቱን በ 5 ወራት ውስጥ, አይጦች የአምሳያው የመስማት ተግባር ወደነበረበት ተመልሷል;በተመሳሳይ ጊዜ በውስጠኛው ጆሮ ውስጥ የፀጉር ሴሎች የመትረፍ መጠን ተሻሽሏል ፣ የሲሊሊያ ቅርፅ መደበኛ ሆኗል ፣ እና ኤሌክትሮፊዚዮሎጂያዊ አመላካቾች ተስተካክለዋል [5]።ይህ በአለም ላይ የ CRISPR/Cas9 ቴክኖሎጂን በMyo6 ጂን ሚውቴሽን ምክንያት ለሚከሰት በዘር የሚተላለፍ የመስማት ችግርን ለማከም የመጀመርያው ሲሆን በዘር የሚተላለፍ የመስማት ችግርን ለማከም የጂን ኤዲቲንግ ቴክኖሎጂ ጠቃሚ የምርምር ሂደት ነው።የሕክምናው ክሊኒካዊ ትርጉም ጠንካራ ሳይንሳዊ መሠረት ይሰጣል.
የጂን ሕክምና አሰጣጥ ዘዴዎች
የጂን ህክምና ስኬታማ እንዲሆን እርቃናቸውን የዲ ኤን ኤ ሞለኪውሎች በሃይድሮፊሊቲነታቸው እና በፎስፌት ቡድኖች አሉታዊ ክፍያ ምክንያት ወደ ሴሎች ውስጥ ዘልቀው መግባት አይችሉም እና የተሟሉ የኑክሊክ አሲድ ሞለኪውሎችን ትክክለኛነት ለማረጋገጥ አስተማማኝ እና ውጤታማ ዘዴ መመረጥ አለበት።ተጨማሪው ዲ ኤን ኤ ለታለመው ሕዋስ ወይም ቲሹ ይደርሳል.AAV በከፍተኛ ተላላፊ ተፅእኖ ፣ ዝቅተኛ የበሽታ መከላከያ እና ለተለያዩ የቲሹ ዓይነቶች ሰፊ የአየር ጠባይ ስላለው ለበሽታ ሕክምና እንደ ማጓጓዣ ተሽከርካሪ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል።በአሁኑ ጊዜ አንድ ትልቅ የምርምር ሥራ በመዳፊት cochlea ውስጥ ካሉ የተለያዩ የሕዋስ ዓይነቶች አንፃር የተለያዩ የ AAV ንዑስ ዓይነቶችን tropism ወስኗል።የ AAV ማቅረቢያ ባህሪያትን በመጠቀም ከሴል-ተኮር አራማጆች ጋር ተጣምሮ ሴል-ተኮር አገላለፅን ማሳካት ይቻላል፣ ይህም ከዒላማ ውጪ የሆኑ ውጤቶችን ይቀንሳል።በተጨማሪም ከባህላዊ የ AAV ቬክተሮች እንደ አማራጭ አዳዲስ ሰው ሰራሽ AAV ቬክተሮች በየጊዜው እየተዘጋጁ እና በውስጣዊው ጆሮ ውስጥ የላቀ የመለወጥ ችሎታ ያሳያሉ, ከእነዚህ ውስጥ AAV2/Anc80L65 በብዛት ጥቅም ላይ ይውላል.የቫይራል ያልሆኑ መላኪያ ዘዴዎች በአካላዊ ዘዴዎች (ማይክሮኢንጀክሽን እና ኤሌክትሮፖሬሽን) እና ኬሚካላዊ ዘዴዎች (ሊፕድ-ተኮር, ፖሊመር-ተኮር እና የወርቅ ናኖፓርቲሎች) ሊከፋፈሉ ይችላሉ.ሁለቱም ዘዴዎች በዘር የሚተላለፍ የመስማት ችግርን ለማከም ጥቅም ላይ የዋሉ እና የተለያዩ ጥቅሞችን እና ገደቦችን አሳይተዋል.ለጂን ህክምና እንደ ተሸከርካሪ ከማድረስ በተጨማሪ በተለያዩ የዒላማ ህዋሶች፣ የአስተዳደር መንገዶች እና ቴራፒዩቲካል ውጤታማነት ላይ ተመስርተው የኢንቪቮ ጂን አስተዳደር የተለያዩ አቀራረቦችን መጠቀም ይቻላል።የውስጣዊው ጆሮ ውስብስብ መዋቅር ወደ ዒላማው ሴሎች ለመድረስ አስቸጋሪ ያደርገዋል እና የጂኖም አርትዖት ወኪሎች ስርጭት አዝጋሚ ነው.membranous labyrinth በጊዜያዊው አጥንት በአጥንት ላቢሪንት ውስጥ የሚገኝ ሲሆን ኮክሌር ቱቦ፣ ከፊል ክብ ቅርጽ ያለው ቱቦ፣ utricle እና ፊኛ ያካትታል።አንጻራዊ መነጠል፣ አነስተኛ የሊምፋቲክ ዝውውር እና በደም-ማዝ አጥር ከደም መለያየቱ ቴራፒዩቲኮችን ለአራስ አይጥ ብቻ የሚሰጠውን ውጤታማ ስርአት ይገድባል።ለጂን ቴራፒ ተስማሚ የሆነ የቫይረስ ቲተርን ለማግኘት የቫይራል ቬክተሮችን በቀጥታ ወደ ውስጠኛው ጆሮ ማስገባት አስፈላጊ ነው.የተቋቋሙት የመርፌ መስመሮች [6]፡ (1) ክብ የመስኮት ሽፋን (RWM)፣ (2) ትራኪኦስቶሚ፣ (3) endolymphatic ወይም perilymphatic cochleostomy፣ (4) ክብ የመስኮት ሽፋን እና የቲዩብ ፌንስትሬሽን (CF) (እንደ ምስል 3) ያካትታሉ።
ምስል3.የጂን ሕክምና ውስጣዊ ጆሮ ማድረስ.
በጂን ቴራፒ ብዙ መሻሻሎች ቢደረጉም በክሊኒካዊ የትርጉም ግቦች ላይ በመመርኮዝ የጂን ቴራፒ በጄኔቲክ በሽታ ላለባቸው ታካሚዎች የመጀመሪያ ደረጃ የሕክምና አማራጭ ከመሆኑ በፊት በተለይም ደህንነቱ የተጠበቀ እና ውጤታማ የቬክተር እና የአቅርቦት ዘዴን ከመፍጠር በፊት ብዙ ስራዎች መከናወን አለባቸው.ነገር ግን በቅርብ ጊዜ ውስጥ እነዚህ የሕክምና ዓይነቶች ለግል የተበጀ ሕክምና ዋና አካል ይሆናሉ እናም በጄኔቲክ መታወክ በሽተኞች እና በቤተሰቦቻቸው ላይ ከፍተኛ አዎንታዊ ተጽእኖ ይኖራቸዋል ብለን እናምናለን።
ፎርጌኔ ለታላሚ ጂኖች ከፍተኛ የፍተሻ ኪት ጀምሯል፣ ይህም ፈጣን እና የተገላቢጦሽ ግልባጭ እና qPCR ምላሽ ያለ አር ኤን ኤ ማውጣት ይችላል።
የምርት ማገናኛዎች
የሕዋስ ቀጥታ RT-qPCR ኪት—ታቅማን/SYBR GREEN I
ለተጨማሪ የምርት መረጃ፣ እባክዎን ያነጋግሩ፡-
የፖስታ ሰአት፡ ሴፕቴምበር-02-2022
