ለችግሮች ትንተና መመሪያዎች

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

አር ኤን ኤ ሊወጣ አይችልም ወይም የኑክሊክ አሲድ ምርት ዝቅተኛ ነው።

ብዙውን ጊዜ የመልሶ ማግኛ ቅልጥፍናን የሚነኩ ብዙ ምክንያቶች አሉ ለምሳሌ፡- የናሙና አር ኤን ኤ ይዘት፣ የአሠራር ዘዴ፣ የኤሌክትሮል መጠን፣ ወዘተ.

የተለመዱ ምክንያቶች ትንተና;

1.Ice መታጠቢያ ወይም ዝቅተኛ-ሙቀት (4 ° C) ክወና ወቅት centrifugation.

አስተያየት: የክፍል ሙቀት (15-25 ° ሴ) ክወና, ፈጽሞ በረዶ መታጠቢያ እና ዝቅተኛ የሙቀት ሴንትሪፉጅ.

2. ተገቢ ያልሆነ የናሙና ማከማቻ ወይም የናሙና ማከማቻ ለረጅም ጊዜ።

አስተያየት፡ ናሙናዎችን በ -80 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ያከማቹ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ያቀዘቅዙ እና ተደጋጋሚ የማቀዝቀዝ አጠቃቀምን ያስወግዱ።ለአር ኤን ኤ ለማውጣት አዲስ የተሰበሰቡ ናሙናዎችን ለመጠቀም ይሞክሩ።

3. በቂ ያልሆነ ናሙና lysis

የውሳኔ ሃሳብ፡ እባኮትን ናሙና እና የስራ መፍትሄ (Linear Acrylamide) በደንብ ተቀላቅለው ለ10 ደቂቃ በክፍል ሙቀት (15-25 ° ሴ) መከተላቸውን ያረጋግጡ።

4.The eluent በስህተት ታክሏል

ምክር፡ ከRNase-ነጻ ddH2O ወደ የመንጻቱ አምድ ሽፋን መሃል መጨመሩን ያረጋግጡ።

5. በ Buffer viRW2 ውስጥ ያለው የኢታኖል ትክክለኛ ያልሆነ መጠን

አስተያየት፡ እባክዎን መመሪያዎቹን ይከተሉ፣ ትክክለኛውን የኢታኖል መጠን ወደ Buffer viRW2 ይጨምሩ እና ኪቱን ከመጠቀምዎ በፊት በደንብ ያዋህዱ።

6.አግባብ ያልሆነ የናሙና አጠቃቀም.

አስተያየት፡ 200µl ናሙና በ500μl Buffer viRL።ከመጠን በላይ የሆነ የናሙና መጠን የአር ኤን ኤ ማውጣትን ይቀንሳል.

7.የተሳሳተ የኤሌክትሮማግኔቲክ መጠን ወይም ያልተሟላ ኤሉሽን.

የአስተያየት ጥቆማ: የመንጻቱ አምድ የኤሌክትሮል መጠን 30-50μl;የማብራሪያው ውጤት አጥጋቢ ካልሆነ ፣ ቀድሞ የቀዘቀዘውን RNase-Free ddH ለመጨመር ይመከራል₂ኦ እና በክፍል ሙቀት ውስጥ የማስቀመጥ ጊዜን ያራዝሙ፣ ለምሳሌ ከ5-10 ደቂቃ

8.Purification አምድ በ Buffer viRW2 ውስጥ ከታጠበ በኋላ የኤታኖል ቅሪት አለው።

አስተያየት፡- በ Buffer viRW2 እና በባዶ-ቱቦ ሴንትሪፉጅሽን ለ 2 ደቂቃ ኢታኖል ከታጠበ በኋላ አሁንም የሚቆይ ከሆነ፣ የቀረውን ኢታኖል ሙሉ በሙሉ ለማስወገድ የንፅህና አምድ በባዶ-ቱቦ ሴንትሪፍጋግ ለ 5 ደቂቃ በቤት ሙቀት ውስጥ ሊቆይ ይችላል።

የተጣራ አር ኤን ኤ ሞለኪውሎች መበስበስ

የተጣራው አር ኤን ኤ ጥራት እንደ የናሙና ማከማቻ፣ የ RNase ብክለት እና አሠራር ካሉ ነገሮች ጋር የተያያዘ ነው።

የተለመዱ ምክንያቶች ትንተና;

1.የተሰበሰቡ ናሙናዎች በጊዜ ውስጥ አልተቀመጡም.

አስተያየት፡ ናሙናው ከተሰበሰበ በኋላ በጊዜ ጥቅም ላይ ካልዋለ፣ እባክዎን በ -80 ℃ ወይም ፈሳሽ ናይትሮጅን ወዲያውኑ ያከማቹ።ለአር ኤን ኤ ሞለኪውሎች ለማውጣት በተቻለ መጠን አዲስ የተሰበሰቡ ናሙናዎችን ለመጠቀም ይሞክሩ።

2.የተሰበሰቡ ናሙናዎች እየቀዘቀዙ እና በተደጋጋሚ ይቀልጡ ነበር.

አስተያየት፡- ናሙና በሚሰበሰብበት እና በሚከማችበት ጊዜ ተደጋጋሚ ማቀዝቀዝ እና ማቅለጥ (ከአንድ ጊዜ በላይ) ያስወግዱ፣ ያለበለዚያ የኑክሊክ አሲድ ምርት ይቀንሳል።

3.RNase ቀዶ ጥገና ክፍል ውስጥ አስተዋወቀ ወይም ምንም የሚጣሉ ጓንቶች, ጭንብል, ወዘተ.

አስተያየት፡ የአር ኤን ኤ ሞለኪውሎች ሙከራን ማውጣት በተለየ የአር ኤን ኤ ኦፕሬሽን ክፍል ውስጥ በተሻለ ሁኔታ ይከናወናል፣ እና የሙከራው ጠረጴዛ ከሙከራው በፊት ይጸዳል።በ RNase መግቢያ ምክንያት የሚፈጠረውን የአር ኤን ኤ መበላሸትን ለማስወገድ በሙከራው ወቅት የሚጣሉ ጓንቶች እና ጭንብል ያድርጉ።

4.The reagent አጠቃቀም ወቅት RNase በ ተበክሏል ነው.

የአስተያየት ጥቆማ፡ ተዛማጅ ሙከራዎችን ለማድረግ በአዲስ የቫይረስ አር ኤን ኤ ማግለያ ኪት ይተኩ።

5.የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች፣ pipette ምክሮች፣ ወዘተ የ RNase ብክለት። አስተያየት፡ የሴንትሪፉጅ ቱቦዎች፣ pipette ምክሮች እና pipettes ሁሉም ከአርኤንሴ-ነጻ መሆናቸውን ያረጋግጡ።

የነጹት አር ኤን ኤ ሞለኪውሎች የታችኛው ተፋሰስ ሙከራዎች ላይ ተጽዕኖ አሳድረዋል።

በጣም ብዙ የጨው ionዎች ወይም ፕሮቲኖች ካሉ በንጽህና አምድ የነጹት የአር ኤን ኤ ሞለኪውሎች የታችኛው ተፋሰስ ሙከራዎች ላይ ተጽእኖ ይኖራቸዋል፡ ለምሳሌ፡ የተገላቢጦሽ ግልባጭ፣ ሰሜናዊ ብሎት፣ ወዘተ።

1.በ eluted አር ኤን ኤ ሞለኪውሎች ውስጥ ቀሪ የጨው ions አሉ.

የውሳኔ ሃሳብ፡ ትክክለኛው የኤታኖል መጠን ወደ Buffer viRW2 መጨመሩን ያረጋግጡ እና የመንፃቱን አምድ ሁለት ጊዜ በትክክለኛው የሴንትሪፍግሽን ፍጥነት በኦፕሬሽን መመሪያው ላይ ይታጠቡ።አሁንም የቀሩ የጨው ionዎች ካሉ Buffer viRW2ን ወደ ማጽጃው አምድ ማከል እና በክፍሉ የሙቀት መጠን ለ 5 ደቂቃ ያህል መተው ይችላሉ።ከዚያም የጨው ions ብክለትን በከፍተኛ መጠን ለማስወገድ ሴንትሪፍግሽን ያከናውኑ

2.በኤታኖል የተረፉት አር ኤን ኤ ሞለኪውሎች ውስጥ ይገኛሉ

የአስተያየት ጥቆማ፡ አንዴ የመንጻት አምዶች በBuffer viRW2 መታጠቡን ካረጋገጡ፣ በክወና መመሪያው ላይ ባለው ሴንትሪፉጋል ፍጥነት መሰረት ባዶ-ቱቦ ሴንትሪፍግሽን ያከናውኑ።አሁንም የሚቀረው ኤታኖል ካለ፣ የቀረውን ኢታኖል በከፍተኛ መጠን ለማስወገድ በባዶ ቱቦ ሴንትሪፉጅሽን ከቆየ በኋላ በክፍሉ የሙቀት መጠን ለ 5 ደቂቃዎች ሊቆይ ይችላል።

መመሪያ መመሪያዎች፡-

የቫይረስ አር ኤን ኤ ማግለል ኪት መመሪያ መመሪያ