በማወቅ ቴክኖሎጂ ታሪክ ውስጥ ያሉ በርካታ አብዮታዊ ግኝቶች በአእምሮዬ ውስጥ ፀረ-አንቲጂን የተወሰነ ማሰሪያ መርህ ላይ የተመሰረቱ የበሽታ መከላከያ ቴክኖሎጂዎች ናቸው።ዛሬ ስለ PCR ቴክኖሎጂ እንነጋገራለን.እንደ PCR ቴክኖሎጂ ዝግመተ ለውጥ፣ ሰዎች በተለምዶ PCR ቴክኖሎጂን በሦስት ትውልዶች ይከፋፍሏቸዋል፡ ተራ PCR ቴክኖሎጂ፣ የእውነተኛ ጊዜ ፍሎረሰንት መጠናዊ PCR ቴክኖሎጂ እና ዲጂታል PCR ቴክኖሎጂ።
Common PCR ቴክኒክ
ካሪ ሙልሊስ (1944.12.28-2019.8.7)
ካሪ ሙሊስ በ 1983 የ polymerase chain reaction (polymerase chain reaction, PCR) ፈለሰፈ. የሴት ጓደኛውን በሚያሽከረክርበት ጊዜ, በድንገት የመነሳሳት ብልጭታ እና የ PCR መርህ (በማሽከርከር ጥቅሞች ላይ) አሰበ ይባላል.ካሪ ሙሊስ እ.ኤ.አ. በ1993 በኬሚስትሪ የኖቤል ሽልማት ተሸልሟል። ዘ ኒው ዮርክ ታይምስ የሚከተለውን አስተያየት ሰጥቷል፡- “ከፍተኛ ኦሪጅናል እና ትርጉም ያለው፣ ባዮሎጂን ወደ ቅድመ-PCR እና ድህረ-PCR ዘመን ከሞላ ጎደል ይከፋፍላል።
የ PCR መርህ፡ በዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዜዝ ካታላይዝስ ስር እናት ስትራንድ ዲ ኤን ኤ እንደ አብነት ጥቅም ላይ ይውላል፣ እና የተወሰነው ፕሪመር እንደ ማራዘሚያ መነሻ ሆኖ ያገለግላል፣ እና ሴት ልጅ ስትራንድ ዲ ኤን ኤ ከእናቲቱ ስትራንድ አብነት ዲ ኤን ኤ ጋር የተጣጣመ ዲ ኤን ኤ በዲኤንኤ ውስጥ በ denaturation, annealing, ቅጥያ እና ሌሎች እርምጃዎች ይገለበጣል.በብልቃጥ ውስጥ የዲ ኤን ኤ ውህድ ማጉላት ቴክኖሎጂ ነው፣ ይህም በብልቃጥ ውስጥ የትኛውንም ኢላማ ዲ ኤን ኤ በፍጥነት እና በተለይም ሊያጎላ ይችላል።
የመደበኛ PCR ጥቅሞች
1.ክላሲክ ዘዴ ፣ የተሟላ ዓለም አቀፍ እና የሀገር ውስጥ ደረጃዎች
2.ዝቅተኛ ዋጋ የመሣሪያ reagent
3.PCR ምርቶች ለሌሎች ሞለኪውላር ባዮሎጂ ሙከራዎች ሊመለሱ ይችላሉ።
የሚመከር Foregene PCR ማሽን፡ https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
ተዛማጅ ምርቶች፡ https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
የመደበኛ PCR ጉዳቶች
1.ለመበከል ቀላል
2.አስቸጋሪ ክወና
3.የጥራት ትንተና ብቻ
4.መጠነኛ ስሜታዊነት
5.ልዩ ያልሆነ ማጉላት አለ, እና ልዩ ያልሆነው ባንድ ከዒላማው ባንድ ጋር ተመሳሳይ በሆነ መጠን, መለየት አይቻልም.
Capillary electrophoresis ላይ የተመሠረተ PCR
ለተራ PCR ድክመቶች ምላሽ ለመስጠት አንዳንድ አምራቾች በካፒላሪ ኤሌክትሮፊዮራይዝስ መርህ ላይ የተመሰረቱ መሳሪያዎችን አስተዋውቀዋል.ከ PCR ማጉላት በኋላ የኤሌክትሮፊዮሬሲስ እርምጃ በካፒታሉ ውስጥ ይጠናቀቃል.የስሜታዊነት ስሜት ከፍ ያለ ነው, እና የበርካታ መሠረቶች ልዩነት መለየት እና ማጉላት በ MAERKER ሊሰላ ይችላል.የምርት ይዘት.ጉዳቱ የ PCR ምርት አሁንም መከፈት እና ወደ መሳሪያው ማስገባት ያስፈልገዋል, እና አሁንም ከፍተኛ የመበከል አደጋ አለ.
CapillaryElectrophoresis
2. የእውነተኛ ጊዜ የፍሎረሰንት መጠናዊ PCR (Quantitative Real-time PCR፣ qPCR) ቴክኖሎጂFluorescent quantitative PCR፣እንዲሁም ሪል-ታይም PCR ተብሎ የሚጠራው በፒኢ (ፐርኪን ኤልመር) በ1995 የተገነባ አዲስ ኑክሊክ አሲድ መጠናዊ ቴክኖሎጂ ነው።ፍላጎት ካለህ ማረጋገጥ ትችላለህ።ይህ ዘዴ በአሁኑ ጊዜ በጣም የበሰለ እና በሰፊው ጥቅም ላይ የዋለው ከፊል-መጠን PCR ቴክኒክ ነው።
የሚመከር qPCR ማሽን፡https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
የፍሎረሰንት ማቅለሚያ ዘዴ (SYBR አረንጓዴ I):SYBR አረንጓዴ I ለቁጥር PCR በብዛት ጥቅም ላይ የሚውለው ዲ ኤን ኤ ማሰሪያ ቀለም ነው፣ እሱም በተለየ መልኩ ከድርብ-ክር ዲ ኤን ኤ ጋር ይያያዛል።በነጻው ግዛት፣ SYBR አረንጓዴ ደካማ ፍሎረሰንት ያመነጫል፣ ነገር ግን አንዴ ከዲ ኤን ኤ ጋር ከተገናኘ፣ ፍሎረሰንሱ በ1000 እጥፍ ይጨምራል።ስለዚህ፣ በምላሽ የሚወጣው አጠቃላይ የፍሎረሰንት ምልክት ባለ ሁለት ፈትል ዲ ኤን ኤ መጠን ጋር ተመጣጣኝ ነው እና በተጠናከረ ምርት መጨመር ይጨምራል።ማቅለሚያው በተለየ ሁኔታ ከድርብ-ፈትል ዲ ኤን ኤ ጋር ስለሚያያዝ የውሸት አወንታዊ ውጤቶች ሊፈጠሩ ይችላሉ።
ተዛማጅ ምርቶች፡ https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
የፍሎረሰንት መፈተሻ ዘዴ (Taqman ቴክኖሎጂ): ወቅትPCR ማጉላት, የተወሰነ የፍሎረሰንት መፈተሻ ከተጣመሩ ጥንድ ጋር በተመሳሳይ ጊዜ ይታከላል.መርማሪው መስመራዊ ኦሊጎኑክሊዮታይድ ነው፣ በሁለቱም ጫፎች ላይ በቅደም ተከተል የፍሎረሰንት ዘጋቢ ቡድን እና የፍሎረሰንት ኩንቸር ቡድን ያለው።መመርመሪያው ሳይበላሽ ሲቀር, በሪፖርተሩ ቡድን የሚወጣው የፍሎረሰንት ምልክት በኬንቸር ቡድን ይጠመዳል, እና ማወቂያው ምንም የፍሎረሰንት ምልክት የለም;በ PCR ማጉላት ጊዜ (በኤክስቴንሽን ደረጃ) የ 5'-3' Dicer የ Taq ኢንዛይም እንቅስቃሴ ፈታሹን በማዋሃድ እና በማዋረድ ዘጋቢው የፍሎረሰንት ቡድን እና የፍሎረሰንት ቡድን ይለያያሉ ፣ ስለዚህ የፍሎረሰንት ቁጥጥር ስርዓት የፍሎረሰንት ምልክት ሊቀበል ይችላል ፣ ማለትም ፣ የዲኤንኤ ሰንሰለት በተጠናከረ ቁጥር ፣ የፍሎረሰንት ውህደት ሙሉ በሙሉ ይፈጠራል ፣ የፍሎረሰንት ውህደት ይፈጠራል ። s እና የ PCR ምርቶች መፈጠር.የታክማን ምርመራ ዘዴ በክሊኒካዊ ምርመራ ውስጥ በብዛት ጥቅም ላይ የሚውለው የመለየት ዘዴ ነው።
ተዛማጅ ምርቶች፡ https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
የqPCR ጥቅሞች
1.ዘዴው ጎልማሳ እና ደጋፊ መሳሪያዎች እና ሬጀንቶች የተሟሉ ናቸው
2.የሪኤጀንቶች መካከለኛ ዋጋ
3.ለመጠቀም ቀላል
4.ከፍተኛ የመለየት ስሜት እና ልዩነት
የqPCR ጉዳቶች
የዒላማው ዘረ-መል (ጅን) ሚውቴሽን ወደ አምልጦ መለየትን ያመጣል.
ዝቅተኛ-ማጎሪያ አብነት የማወቂያ ውጤት ሊታወቅ አይችልም።
ለቁጥር ማወቂያ መደበኛውን ኩርባ ሲጠቀሙ ትልቅ ስህተት አለ።
3. ዲጂታል PCR (ዲጂታል PCR, dPCR) ቴክኖሎጂ
ዲጂታል PCR የኒውክሊክ አሲድ ሞለኪውሎችን ፍፁም የመጠን ዘዴ ነው።ከqPCR ጋር ሲነጻጸር፣ ዲጂታል PCR የዲኤንኤ/አር ኤን ኤ ሞለኪውሎችን ቁጥር በቀጥታ ማንበብ ይችላል፣ ይህም በመነሻ ናሙና ውስጥ የሚገኙትን የኑክሊክ አሲድ ሞለኪውሎች ትክክለኛ መጠን ነው።እ.ኤ.አ. በ 1999 በርት ቮግልስቴይን እና ኬኔት ደብልዩ ኪን-ዝለር የዲፒሲአርን ጽንሰ-ሀሳብ በመደበኛነት አቅርበዋል ።
እ.ኤ.አ. በ 2006 ፣ Fluidigm በንግድ ቺፕ ላይ የተመሠረተ dPCR መሣሪያን በማምረት የመጀመሪያው ነው።እ.ኤ.አ. በ 2009 ፣ የህይወት ቴክኖሎጂዎች የ OpenArray እና QuantStudio 12K Flex dPCR ስርዓቶችን አስጀመሩ።እ.ኤ.አ. በ 2013 ፣ ላይፍ ቴክኖሎጂ የ QuantStudio 3DdPCR ስርዓትን ጀምሯል ፣ ይህም ከፍተኛ- density nanoscale microfluidic ቺፕ ቴክኖሎጂን በመጠቀም ናሙናዎችን ለ 20,000 ነጠላ ህዋሶች በእኩል ለማሰራጨት ያስችላል።በምላሹ በደንብ.
እ.ኤ.አ. በ 2011 ባዮ-ራድ ጠብታ ላይ የተመሠረተ QX100 ዲፒሲአር መሳሪያን አቅርቧል ፣ይህም የውሃ ውስጥ-ዘይት ቴክኖሎጂን በመጠቀም ናሙናውን ወደ 20,000 ነጠብጣብ-ውሃ-ዘይት-ዘይት በእኩል ለማሰራጨት እና ነጠብጣቦችን ለመመርመር ነጠብጣብ ትንታኔን ይጠቀማል።እ.ኤ.አ. በ 2012 ሬይን ዳንስ በከፍተኛ ግፊት ጋዝ የሚመራውን የRainDrop dPCR መሳሪያን አስጀምሯል፣ እያንዳንዱን መደበኛ የምላሽ ስርዓት ከ1 ሚሊዮን እስከ 10 ሚሊዮን ፒኮላይተር-ደረጃ ማይክሮ-ነጠብጣቦችን ወደ ሚይዝ ምላሽ።
እስካሁን ድረስ ዲጂታል PCR ሁለት ዋና ዋና ክፍሎችን ፈጥሯል, ቺፕ ዓይነት እና ነጠብጣብ ዓይነት.ምንም አይነት ዲጂታል PCR ምንም ቢሆን፣ ዋና መርሆዎቹ ዳይሉሽን፣ የመጨረሻ ነጥብ PCR እና Poisson ስርጭትን ይገድባሉ።የኒውክሊክ አሲድ አብነቶችን የያዘው መደበኛ PCR ምላሽ ሥርዓት በእኩል በአስር ሺዎች PCR ምላሽ የተከፋፈለ ነው, ቺፕስ ወይም ማይክሮድሮፕሌት ላይ ይሰራጫሉ, ስለዚህ እያንዳንዱ ምላሽ በተቻለ መጠን አብነት ሞለኪውል ይዟል, እና ነጠላ-ሞለኪውል አብነት PCR ምላሽ ይከናወናል.ፍሎረሰንስን በማንበብ ምልክቱ መኖሩ ወይም አለመኖሩ ተቆጥሯል, እና ፍፁም መጠኑ የሚከናወነው የስታቲስቲክስ የፖይሰን ስርጭትን ከተስተካከለ በኋላ ነው.
የተጠቀምኳቸው የበርካታ ዲጂታል PCR መድረኮች ባህሪያት የሚከተሉት ናቸው።
1. ባዮ-ራድ QX200 ነጠብጣብ ዲጂታል PCR ባዮ-ራድQX200 በጣም ክላሲክ ዲጂታል PCR መድረክ ነው ፣ መሰረታዊ የመለየት ሂደት: 20,000 ናሙናዎች በ droplet ጄኔሬተር ይፈጠራሉ የውሃ ውስጥ-ዘይት ማይክሮ-ነጠብጣቦች በተራ PCR ማሽን ላይ ይጨምራሉ ፣ እና በመጨረሻም የእያንዳንዱ ማይክሮ-ነጠብጣብ የፍሎረሰንት ምልክት በማይክሮ-ነጠብጣብ አንባቢ ይነበባል።ክዋኔው የበለጠ የተወሳሰበ ነው, እና የብክለት አደጋ መካከለኛ ነው.
Xinyi TD1 ማይክሮ-ነጠብጣብ ዲጂታል PCRXinyi TD1 የአገር ውስጥ ዲጂታል PCR መድረክ ነው፣ መሠረታዊው የመለየት ሂደት፡ ከ30,000-50,000 የዘይት-ዘይት ጠብታዎችን በጠብታ ጀነሬተር በኩል ያመነጫል፣ በጋራ PCR መሳሪያ ላይ ያጎላል እና በመጨረሻም ያልፋል ጠብታ አንባቢ የእያንዳንዱን ነጠብጣብ የፍሎረሰንት ምልክት ያነባል።በዚህ መድረክ ላይ ሁለቱም ነጠብጣብ ማመንጨት እና ማንበብ በአነስተኛ የብክለት አደጋ በተዘጋጀ ቺፕ ውስጥ ይከናወናሉ.
STILLA ናይካ ማይክሮ-ነጠብጣብ ቺፕ ዲጂታል PCRSTILLA Naica በአንጻራዊ አዲስ ዲጂታል PCR መድረክ ነው።መሠረታዊው የማወቂያው ሂደት፡ የምላሽ መፍትሄን ወደ ቺፑ አክል፣ ቺፑን ወደ ማይክሮ-ነጠብጣቢ ትውልድ እና የማጉላት ስርዓት ውስጥ ማስገባት እና 30,000 ማይክሮ-ነጠብጣቦችን ማመንጨት ነው።በቺፑ ላይ ተዘርግተው PCR ማጉላት በቺፑ ላይ ተጠናቅቋል።ከዚያም አምፕሊፋይድ ቺፕ ወደ ማይክሮ-ነጠብጣብ የንባብ ትንተና ስርዓት ይተላለፋል, እና የፍሎረሰንት ምልክት ፎቶግራፍ በማንሳት ይነበባል.አጠቃላይ ሂደቱ በተዘጋ ቺፕ ውስጥ ስለሚካሄድ, የብክለት አደጋ አነስተኛ ነው.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D ቺፕ ዲጂታል PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D ሌላው ክላሲክ ቺፕ ላይ የተመሰረተ ዲጂታል PCR መድረክ ነው።የእሱ መሰረታዊ የማወቅ ሂደት: የምላሽ መፍትሄን ወደ ስርጭቱ ውስጥ ይጨምሩ እና የምላሽ መፍትሄውን በቺፑ ላይ በ 20,000 ማይክሮዌል በስርጭቱ በኩል ያሰራጩ።, ለማጉላት ቺፑን በ PCR ማሽን ላይ ያድርጉት እና በመጨረሻም ቺፑን ወደ አንባቢው ውስጥ ያስገቡ እና የፍሎረሰንት ምልክት ለማንበብ ፎቶግራፍ ያንሱ.ክዋኔው በአንጻራዊነት የተወሳሰበ ነው, እና አጠቃላይ ሂደቱ በተዘጋ ቺፕ ውስጥ ይከናወናል, እና የብክለት አደጋ አነስተኛ ነው.
5. JN MEDSYS Clarity ቺፕ ዲጂታል PCR
JN MEDSYS ግልጽነት በአንጻራዊነት አዲስ ቺፕ-አይነት ዲጂታል PCR መድረክ ነው።ዋናው የመለየት ሂደቱ፡ የምላሹን መፍትሄ ወደ አፕሊኬተሩ ውስጥ ይጨምሩ እና የምላሹን መፍትሄ በአፕሊኬተሩ በ PCR ቱቦ ውስጥ በተቀመጡ 10,000 PCR ቱቦዎች ላይ በእኩል ያሰራጩ።በማይክሮፖረስ ቺፕ ላይ ፣ የምላሽ መፍትሄው ወደ ቺፑ ውስጥ በካፒታል እርምጃ ውስጥ ይገባል ፣ እና ፒሲአር ያለው ቱቦ በፒሲአር ማሽኑ ላይ ለማጉላት ይቀመጣል ፣ እና በመጨረሻም ቺፑ ወደ አንባቢው ውስጥ ያስገባል የፍሎረሰንት ምልክት ፎቶግራፍ በማንሳት።ክዋኔው የበለጠ የተወሳሰበ ነው.የብክለት አደጋ አነስተኛ ነው.
የእያንዳንዱ ዲጂታል PCR መድረክ መለኪያዎች እንደሚከተለው ተጠቃለዋል
የዲጂታል PCR መድረክ የግምገማ አመልካቾች የተከፋፈሉ ክፍሎች ብዛት, የፍሎረሰንት ቻናሎች ብዛት, የአሠራር ውስብስብነት እና የብክለት ስጋት ናቸው.ነገር ግን በጣም አስፈላጊው ነገር የመለየት ትክክለኛነት ነው.የዲጂታል PCR መድረኮችን ለመገምገም አንዱ መንገድ እርስበርስ ለማረጋገጥ በርካታ ዲጂታል PCR መድረኮችን መጠቀም ሲሆን ሌላኛው መንገድ ትክክለኛ እሴቶችን ያላቸውን መደበኛ ንጥረ ነገሮችን መጠቀም ነው።
የ dPCR ጥቅሞች
1.ፍፁም የቁጥር መጠን ማሳካት
2.ከፍተኛ ስሜታዊነት እና ልዩነት
3.ዝቅተኛ ቅጂ ናሙናዎችን መለየት ይችላል
የ dPCR ጉዳቶች1. ውድ መሳሪያዎች እና ሬጀንቶች 2. የተወሳሰበ ቀዶ ጥገና እና ረጅም ጊዜ የመለየት ጊዜ 3. ጠባብ የመለየት ክልል
በአሁኑ ጊዜ የሶስቱ ትውልዶች PCR ቴክኖሎጂ የራሳቸው ጥቅሞች እና ጉዳቶች አሏቸው, እና እያንዳንዳቸው የራሳቸው የመተግበሪያ መስኮች አሏቸው, እና አንዱ ትውልድ ሌላውን የሚተካበት ግንኙነት አይደለም.የቴክኖሎጂው ቀጣይነት ያለው እድገት በፒሲአር ቴክኖሎጂ ውስጥ አዲስ ህያውነትን በመርፌ አንድን የመተግበሪያ አቅጣጫ ከሌላው እንዲከፍት አስችሎታል፣ ይህም የኑክሊክ አሲድ መለየት የበለጠ ምቹ እና ትክክለኛ እንዲሆን አድርጎታል።
ምንጭ፡- ዶ/ር ዩን ለሙከራ ይወስድዎታል
የሚመከሩ ምርቶች፡
የልጥፍ ሰዓት፡- ህዳር-18-2022
